Синтез новых носителей лекарственных веществ на основе полисахаридов и фосфолипидов : диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук : 02.00.03

Актуальность и степень разработанности темы исследования
Полисахариды и фосфолипидные структуры активно исследуются в качестве потенциальных носителей активных фармацевтических ингредиентов (АФИ), благодаря их природному сродству к биологическим тканям и способности регулировать фармакокинетические показатели препарата. Но их практическое использование имеет ряд ограничений, связанных с низкой стабильностью и недостаточной специфичностью взаимодействий природных молекул. Указанную проблему можно решить, используя возможности химической модификации, настройки поверхности и синтеза комплексных систем. Современные подходы по стабилизации лекарственных носителей гидрофильными синтетическими полимерами и модификации моноклональными антителами приводят к значительной себестоимости препарата и вероятности развития иммунного ответа, что отдаляет такие системы от клинического применения. Поэтому актуальность разработки новых способов модификации и нацеливания современных терапевтических систем, имеющих практический потенциал, непрерывно возрастает с ростом стандартов фармакотерапии. В решении обозначенной задачи инструменты органической химии приобретают новую значимость, позволяя науке приблизить реализацию идеального подхода к лечению заболеваний.
В настоящее время одно из основных направлений развития органической химии заключается в усложнении получаемых структур с использованием одностадийных стратегий. В этом контексте многокомпонентные реакции и методы динамической комбинаторной химии имеют огромный потенциал в синтезе новых биосовместимых биологически активных систем. Проведение таких реакций модификации в водной среде способствует самоорганизации процесса и сборке структур похожих на природные объекты, кроме того соответствует принципам «зеленой химии». Применение полимерных цепей в качестве основы для синтеза открывает еще более широкие возможности для получения носителей адресной доставки лекарственных средств. Реакция Уги позволяет синтезировать продукты с биоразрушаемыми пептидоподбными связями из неаминокислотных исходных реагентов, при этом ускорение данной реакции в водной среде делает выполнимой перекрестную сшивку водорастворимых полимеров с высокой эффективностью. Возможность использования обширного набора стартовых соединений многокомпонентной смеси обеспечивает значительную вариативность поверхности по сродству, амфифильности, заряду, которая важна для химической настройки поверхности под конкретные биологические цели.
5
Современная методология динамической комбинаторной химии представляет еще более комплексный подход к синтезу соединений, обладающих селективностью. Основу данного направления составляют самоорганизующиеся системы, образующиеся в результате обратимого связывания разнообразных строительных блоков под термодинамическим контролем. Такие системы обладают рядом преимуществ по сравнению с традиционным химическим синтезом, среди них: одновременный синтез целой библиотеки химических соединений различной уровневой организации и отбор наиболее эффективной структуры, в зависимости от целей скрининга. Сложность получаемых систем часто служит препятствием для развития этого перспективного подхода, особенно для динамических комбинаторных библиотек на полимерном скелете, но это в десятки раз дешевле и доступнее биосинтеза антител.
В настоящем исследовании два развивающихся направления органической химии (многокомпонентные реакции и динамическая комбинаторная химия) использованы для решения современных задач медицинской химии и фармакологии, заключающихся в разработке стабильных, биосовместимых, обладающих тканевой селективностью терапевтических систем адресной доставки.
Цель работы
Целью данной работы является синтез комплексных терапевтических систем на основе полисахаридов и фосфолипидов, обладающих настраиваемыми физико-химическими, поверхностными и биологическими свойствами, с использованием вариаций многокомпонентной реакции Уги и подходов динамической комбинаторной химии.
Для реализации поставленной цели были сформулированы ключевые задачи исследования.
 Получение монодисперсной липосомальной основы с размерами менее 200 нм:
– синтез стабилизирующих компонентов липосом, влияющих на заряд и
реологические свойства фосфолипидного бислоя;
– отработка оптимальных технологических параметров получения
липосомальных суспензий.
 Синтез амидных производных полисахаридов:
– синтез полигалактуронилгидразидов;
– синтез положительно-заряженных производных пектина с четвертичной аммониевой группой.

6
 Синтез полисахаридных микрогелей с помощью реакции Уги:
– синтез микрогелей на основе хитозана;
– синтез микрогелей на основе полигалактуронилгидразида.
 Синтез полисахаридных динамических комбинаторных библиотек, обладающих повышенным сродством к низкомолекулярным биологическим мишеням:
– синтез индивидуальных полигалактуронилгидразонов;
– синтез комбинаторных динамических библиотек на полисахаридном скелете;
– переорганизация систем с внесением молекулы-мишени;
– стабилизация полученных рецепторных комплексов путем восстановления двойных связей.
 Отработка методики нагрузки терапевтических систем АФИ
 Синтез комплексных систем адресной доставки:
– поверхностная постмодификация липосомального носителя путем встраивания гидрофобных радикалов производных полисахарида;
– ковалентная сшивка полисахаридной микрокапсулы на поверхности липосомальных частиц.
 Изучение биосовместимости и биологических свойств:
– изучение мукоадгезивных свойств;
– исследование цитотоксичности;
– анализ сродства к тканям в ходе биологического распределения.
Научная новизна
Разработан новый метод синтеза полисахаридных микрогелей с применением внутримолекулярной сшивки бифункционального полигалактуронилгидразида с помощью четырехкомпонентной реакции Уги.
Показано, что использование подхода динамической комбинаторной химии для синтеза динамических библиотек на основе полигалактуронилгидразонов позволяет получить полимеры, обладающие высокой селективностью связывания замещенных аминокислот.
Впервые осуществлена модификация липосомальных носителей производными хитозана и пектина, полученных с помощью реакции Уги.
Проведен синтез полимерных микрокапсул на поверхности сформированных липидных везикул, показана возможность получения композитных липосом с размерами 175-220 нм и низкой полидисперсностью.

7
Разработан метод получения липосом с хорошими мукоадгезивными свойствами с использованием производных полигалактуронилгидразида.
Теоретическая и практическая значимость
Разработан общий подход к синтезу субмикронных носителей лекарственных средств на основе фосфолипидов, пектина и хитозана с использованием методологии многокомпонентной реакции Уги.
В результате исследования предложена мукоадгезивная лекарственная форма для интраназальной доставки противовирусного препарата Триазавирин.
Предложена лекарственная форма для трансбуккальной доставки модельного локального анестетика, обладающая биосовместимостью и мукоадгезивностью.
Разработан новый метод стабилизации липосом, получены образцы липосом стабильные в течение 9 мес.
Методология и методы исследования: В процессе работы использовались стандартные методы органического синтеза. Выделение и очистка продуктов проводилась переосаждением, диализом и гель-фильтрацией. Для подтверждения структуры полученных в результате синтеза соединений использовались современные методы физико-химического анализа: ИК- и ЯМР- спектроскопии. Контроль протекания реакции и определение чистоты полученных веществ осуществляли с помощью качественных реакций на исходные продукты и тонкослойной хроматографией. Анализ физико-химических параметров высокомолекулярных производных проводили методами динамического рассеивания, pH-метрии и измерения динамической вязкости. Безопасность и сродство к тканям оценивалось рядом стандартизированных in vitro и in vivo методов, включающих МТТ-тест, оценку мукоадгезивных свойств и биораспределение.
Достоверность полученных результатов. Структура, чистота и физико-химические параметры были подтверждены с использованием современных валидированных методов анализа, испытания проводились не менее чем в трех параллелях с последующей статистической обработкой (p=0,05).
Личный вклад автора состоит в сборе, анализе и обобщении имеющихся литературных данных по способам химической модификации и адресного нацеливания лекарственных носителей на основе фосфолипидов и полисахаридов, изучении возможностей получения биосовместимых продуктов с помощью многокомпонентных реакций и подходов динамической комбинаторной химии, в формулировании научных гипотез и их проверки в результате проведения химических и биологических экспериментов, обработке, анализе и обобщению полученных спектральных данных и результатов исследований. Автором была выполнена

8
подготовка результатов научной работы к публикации и осуществлена презентация полученных данных на всероссийских и международных конференциях.
Положения и результаты, выносимые на защиту:
синтез и оптимизация липосомальных носителей;
синтез производных хитозана с помощью реакции Уги;
синтез амидных производных пектина;
синтез сшитых микрогелей на основе полигалактуронилгидразида;
синтез динамических комбинаторных библиотек на полисахаридном скелете; получение комплексных полисахарид-липосомальных систем;
нагрузка лекарственных форм модельными АФИ и высвобождение; изучение биологических свойств полученных носителей.
Публикации и апробация работы. Результаты работы опубликованы в 3 статьях в изданиях, рекомендуемых ВАК, в 3 тезисах докладов, входящих в международные базы цитирования, в 1 главе монографии и в 16 других сборниках тезисов докладов.
Основные результаты работы представлены в виде стендовых и устных докладов на 6-ой Международной конференции по наноматериалам «NANOCON 2014» (Брно, Чешская республика, 5-7 ноября 2014 г.), XXV Российской молодежной научной конференции, посвященной 95-летию основания Уральского университета (Екатеринбург, 22-24 апреля 2015 г.), III Международной конференции «Химия в Федеральных Университетах» (Екатеринбург, 1- 4 ноября 2015 г.), I Международной школе-конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Биомедицина, материалы и технологии XXI века» (Казань, 25-28 ноября 2015 г.), Зимней конференции молодых ученых по органической химии «WSOC2016» (Красновидово, 16-21 января 2016 г.), XX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Екатеринбург, 26-30 сентября 2016 г.), Первом русско-немецком междисциплинарном симпозиуме «Nanoscale interdisciplinary research: physics, chemistry, biology, mathematics» (Москва, 25-27 апреля 2017 г.).
Структура и объем работы. Материал диссертации изложен на 153 страницах и включает 20 схем, 17 таблиц, 47 рисунков. Работа состоит из введения, литературного обзора, обсуждения результатов, экспериментальной части и списка литературы из 159 наименований.