Разработка пробиотического средства для обработки сосков вымени у коров

Исследования проводили с 2018-го по 2020-й год на кафедре те- рапии и фармакологии Кубанского ГАУ, а также в хозяйствах края: ООО АФ «им. Ильича» Выселковского района Краснодарского края, ООО «Смоленское» Северского района Краснодарского края, ФГУП «Кореновское» Кореновского района Краснодарского края.
Для проведения доклинических и лабораторных исследований нами использовались мыши – 50 шт., крысы – 30 шт., кролики – 6 шт. Опыты по проведению клинических исследований проводились на коровах голштинской породы в количестве 500 голов. Исследо- вания по распространённости и сезонному распределению маститов крупного рогатого скота изучен на базе хозяйств ООО «Смолен- ское» Северского района Краснодарского края и ФГУП «Коренов- ское» Кореновского района Краснодарского края, находящихся в разных климатических зонах – предгорной и равнинной, в течение 2017-2019 года на 1030 головах дойного стада.
При изучении физико-химических свойств средства «Биома- стим» определяли: цвет, запах, консистенцию, рН (Piccolo plus).
Определение бактериологической чистоты проводили в соответ- ствии с ГОСТ 28085 «Средства биологические. Метод биологиче- ского контроля стерильности».
Для определения количества жизнеспособных микроорганизмов в течение срока хранения средства «Биомастим», были отобраны образцы средства в количестве 0,3 л. В течение срока хранения пе- риодически брались пробы средства для анализа: на момент выпус- ка средства, через 1 месяц от даты изготовления и через 2 и 3 меся- ца от даты изготовления. Анализ проводили путем подсчета жизне- способных микроорганизмов.
Противомикробную активность средства in vitro определяли по следующей методике: в чашки Петри наливали расплавленный и охлажденный до 450С лактобакагар, затем добавляли небольшое количество бульонной культуры штамма-пробионта. Перемешивали содержимое чашки и оставляли до остывания агара. Сразу после остывания агара удаляли из чашки половину агаровой пластинки с выросшим на ней пробионтом. В свободную часть чашки заливали 10 мл СПА. После застывания среды на нее сплошным газоном за- севали тест-микроб.
Определение острой токсичности средства «Биомастим» про- водили согласно Руководству по экспериментальному (доклиниче- скому) изучению новых фармакологических веществ – Хабриев Р. У. (2005) и ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 11. Исследования общетоксического действия ГОСТ Р ИСО 10993.10- 99 Изделия медицинские. Оценка биологического действия меди- цинских изделий. Часть 10.
Было сформировано 5 групп из белых мышей обоего пола, из них 4 опытных и 1 контрольная, по 10 голов в каждой. Масса тела животных составляла, в среднем, 25-30 г.
Средство вводили per os с помощью зонда в объеме 0,4; 0,6; 0,8; 1,7 мл. Контрольной группе вводили изотонический раствор натрия хлорида в дозе 1 мл/гол.
При определении параметров хронической токсичности средства «Биомастим» было сформировано 3 группы крыс-аналогов с массой тела 180-190 г (две опытные и одна контрольная) по 10 животных в каждой.
Исследуемый образец средства крысам первой группы задавали ежедневно в течение 28 суток с водой в дозе 600 мг/кг массы тела (1/10 от максимально-испытанной при изучении острой токсично- сти), во второй группе дозировка составила 300 мг/кг (1/20 от мак- симально испытанной). Третья группа служила биологическим кон- тролем.
Биохимические исследование крови проводились на анализаторе «SINNOWA»с использованием реагентов ДИАВЕТ.
Определение общего анализа крови осуществляли на фотоэлек- трическом анализаторе «Abacus».
Регистрацию и анализ поведенческих актов лабораторных жи- вотных проводили методом открытого поля. Автором метода явля- ется Hall C.S. (1934).
Исследования молока и смывов с сосков вымени для изучения его культурально-морфологических и биохимических свойств про- водили общепринятыми методиками бактериологического исследо- вания, по методике Н.Н. Михайлова, М.А. Лучко, З.С. Кононовой (1967).
Идентификацию выделенных микроорганизмов до вида прово- дили с использованием 23 биохимических тестов и «Определителя
бактерий Берджи» (М.,2001), «Определителя зоопатогенных микро- организмов» (М.А.Сидоров с со авт., 1995. Для определения чув- ствительности выделенных культур к антибиотикам использовали метод диффузии в агар (МУК 4.2.1890-04).
Исследование раздражающего действия средства «Биомастим» на слизистые оболочки глаз проводили на 6-ти кроликах породы «Калифорнийский», согласно ГОСТ Р ИСО 10993.10-99.
Воздействие изучаемого вещества на слизистые оболочки фик- сировали через 5 минут, 30 минут, 1, 3, 6, 24, 48 часов и оценивали по степени гиперемии, отечности, инъекции сосудов склеры и рого- вицы, ширине зрачка, состоянию век.
Кожно-резорбтивное действие «Биомастима» изучали на 5 кро- ликах в течение 21 суток. За сутки до начала эксперимента прово- дили депиляцию по обеим сторонам спины на участках площадью примерно 10 × 15 см. Опытным средством 0,5 мл смачивали марлю, которую наносили на кожу с каждой стороны и фиксировали повяз- кой.
Регистрацию состояния кожи в месте аппликации проводили че- рез 1 ч после удаления образца и непосредственно перед следую- щей аппликацией – разница во времени между нанесением образца была 12 часов.
После последней аппликации регистрировали состояние каждого участка через 1, 24, 48 и 72 ч после снятия образцов.
При изучении ранозаживляющего действия средства «Биома- стим» показатели заживления ран определяли методом вульногра- фии с использованием компьютерного наложения измерительной сетки, для масштабирования использовали линейку.
Для диагностики коров на скрытый мастит использовали подсчёт соматических клеток на анализаторе молока вискозиметрическом «Соматос Мини».
Проводили экспресс-диагностику скрытого мастита с использо- ванием средства Масттест на пластинке типа МКП-1.
Общую микробную обсеменённость кожи сосков вымени и сек- рета молочной железы до и после применения средства «Биома- стим» изучали на 12 клинически здоровых коровах. Животные были распределены на 2 группы по 6 коров. Доение коров проводилось в коровнике с линейной дойкой. Животным опытной группы на соски вымени сразу после доения наносили средство «Биомастим» при
помощи распрыскивателя типа «Росинка». Животным контрольной группы соски вымени обрабатывали средством после доения «HD UdderStabilizer» методом погружения соска в пластиковый стакан- чик со средством.
Перед дойкой 1 раз в неделю в течение 5 недель у коров опытной и контрольной группы брали смывы с поверхности кожи соска вы- мени, до обмывания вымени и после него, при помощи тупфера, для подсчета общей микробной обсемененности. Пробы секрета из всех долей вымени брали в стерильный контейнер для сбора биологиче- ских жидкостей.
Для проведения испытаний делали ряд последовательных деся- тикратных разведений пробы (смыва).
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Распространение и сезонность возникновения ма- ститов в хозяйствах Краснодарского края
При анализе заболеваемости коров маститом в Выселков- ском районе Краснодарского края за 2017 – 2019 год было выявлено 19778 случая заболевания коров маститом из 507141обследованных коров, что составляет 3,9%. Однако следует отметить, что в 12063 случаях заболевание является повторным, что составляет 61% от животных с установленным диагнозом.
В Тихорецком районе Краснодарского края за эти же годы из 4740 голов дойного стада заболело маститом 237 коров, из которых 137 случаев являются рецидивами (58%).
В Кореновском районе из 11400 коров мастит выявлен у 684, та- ким образом, заболеваемость коров маститом в данном районе со- ставила 6 %. При этом повторные случаи заболевания регистриро- вались в 478 случаях (70 %).
Проведенный анализ заболеваемости коров маститом в зависи- мости от времени года (помесячно), на базе хозяйства ФГУП «Ко- реновское» Кореновского района равнинной зоны и ООО «Смолен- ское» предгорно-климатической зоны Краснодарского края.
В результате в 2017-2019 годах пик заболеваемости клиническим маститом в этих хозяйствах приходился на осенне-зимние месяцы, а именно на период с сентября по январь (рисунок 1). Следует отме- тить, что средние показатели заболеваемости маститом по стаду в
хозяйстве Северского района значительно выше и составляют при- мерно 10,6 %. Коровы содержаться в корпусах, содержание беспри- вязное, моцион отсутствует. В хозяйстве отмечено резкое колебание заболеваемости маститом, что может быть также связано с неудо- влетворительными санитарными условиями и нарушением правил доения. Помимо этого, в хозяйстве отмечаются резкие перепады температуры в течение холодного времени года в разное время су- ток: от плюсовых до минусовых. В июне-июле отмечается заболе- ваемость маститом, что можно объяснить чрезмерным потреблени- ем животными воды, большим расплодом мух и недостаточной об- работкой вымени до и после доения. В хозяйствах центральной ча- сти края содержание коров привязное, коровы выпасаются в базах. В данном хозяйстве высокая заболеваемость маститом отмечена в апреле и сентябре, что можно связать с установлением большой разности ночных и дневных температур в сочетании с высокой влажностью воздуха.
В целом, заболеваемость маститом в хозяйстве ФГУП «Коренов- ское» существенно ниже, чем в ООО «Смоленское». Так средняя заболеваемость по стаду составила 2,2 %, отмечена меньшая ампли- туда колебаний заболеваемости коров в разное время года, макси- мальный процент заболеваемости составил 3,54%, а минимальный – 1,25%.
25,00% 20,00% 15,00% 10,00%
5,00% 0,00%
ООО “Смоленское”
ФГУП “Кореновское”
Рисунок 1 – Распределение клинических маститов по ме- сяцам года в хозяйствах ООО «Смоленское» и ФГУП «Коренов-
ское».
Январь Февраль Март Апрель Май Июнь Июль Август Сентябрь Октябрь Ноябрь Декабрь

Из 844 случаев клинического мастита, диагностированных в хо- зяйствах в течение 2018 года, имело место следующее распределе- ние клинических форм заболевания: 314 случаев (37,20%) приходи- лось на серозный мастит, в 419 (49,64%) случаях диагностировали катарально-гнойный мастит и в 111 случаях (13,15%) был диагно- стирован геморрагический мастит.
В зависимости от физиологического состояния животных, наиболее часто маститы диагностировали в период лактации (652 случая или 77,25%), реже – в период запуска (147 случаев или 17,42%) и наиболее редко в период сухостоя (45 случаев или 5,33%).
Исследования животных на скрытый мастит показали, что рас- пространение субклинических форм мастита не имело выраженной вариабельности в течение года и в целом колебалось в диапазоне от 7,50 до 12,55 процентов от дойного стада, при этом в хозяйстве ООО «Смоленское» также отмечалась более высокая заболевае- мость коров скрытым маститом. Соотношение клинических и суб- клинических форм маститов в данных хозяйствах отражено на ри- сунке 2.
Рисунок 2 – Сопоставление клинических и субклинических форм маститов в хозяйствах ООО «Смоленское» и ФГУП «Кореновское».
Как известно, в этиопатогенезе мастита основную роль играет условно-патогенная микрофлора, которая всегда присутствует на коже сосков вымени. Причем данная микрофлора способна вызвать заболевание маститом, проникая в сосковый канал во время доения.
11,3% 10,6%
8,3% 2,5%
9,8% 6,6%
В среднем по Клинический Субклинический
ООО ФГУП
«Смоленское» «Кореновское» хозяйствам
13

Нами было проведено исследование по определению динамики бактериального загрязнения резины доильных стаканов в зависимо- сти от количества выдоенных коров.
Анализ полученных результатов указывает, что бактериальное загрязнение сосковой резины доильных стаканов перед доением было в пределах 2,1-2,3 тыс. КОЕ/см2. После проведения машинно- го доения пяти и десяти голов коров, бактериальное загрязнение резины доильных стаканов у животных первой лактации увеличи- лось в 249,2 и 626,4, у животных второй лактации в 259,7 и 626,4 раз соответственно. Данные исследования указывают на возмож- ность перезаражения коров и передачи условно-патогенной микро- флоры от животного к животному при проведении машинного дое- ния. Поэтому использование средств как после доения, так и мою- щих средств перед доением должно быть обязательным технологи- ческим процессом в процессе машинного доения.
3.2 Состав и технология получения средства «Биомастим»
«Биомастим» является суспензией темно-зелёного цвета с кисловатым запахом.
Компонентный состав средства «Биомастим» имеет следующий вид: вода 65,9%, глицерин 20%, краситель хлорофиллин жидкий Е- 141 10%, кукурузный экстракт 2,2%, меласса свекловичная 1%, сы- воротка молочная 0,6%, пробиотические штаммы Bacillus subtilis B- 5225 и Enterococcus faecium СТФ 1/56 0,3%.
Для получения разрабатываемого средства культуры Enterococcus faecium СТФ 1/56 и Bacillus subtilis B-5225, а также глицерин совмещают в соотношении 4:4:2. К одной части получен- ной смеси добавляют 9% частей стерильной дистиллированной Н2О, смешанной в отношении 1:10 с медным комплексом Хлоро- филлина Е-141 (краситель).
Кислотность по Тернеру разрабатываемого нами средства «Био- мастим» колеблется в течение срока хранения. В первые 10 дней после выработки средства его кислотность составляет 1010Т, на 20- й день отмечается повышение кислотности средства до 121,20Т. Причем тенденция роста кислотности отмечается вплоть до оконча- ния срока годности средства (30 суток) и достигает 1330Т.
Следует отметить, что при увеличении кислотности разрабаты- ваемого средства пропорционально происходит снижение КОЕ микробных клеток в средстве.
Разрабатываемое нами средство «Биомастим» обладает свой- ством сохранять количество жизнеспособных клеток при хранении до 1 месяца, сохраняя достаточно устойчивые титры микробных клеток
3.3 Определение антимикробной активности средства «Биомастим»
Мы отмечаем, что зона задержки роста между штаммами Bacillus subtilis и Enteroccocus faecium, входящими в разрабатываемое сред- ство «Биомастим», и тест–культурами, округленно составляла 8,6 мм. Следует отметить, что максимальная ЗЗР регистрировалась между культурами-пробионтами и Kl. Рneumonia spp. Ozaenae; St. xylosus – 11,6 мм. Наивысшая зона отсутствия роста между культу- рами-пробионтами и C. freundii составила 8 мм, культурами- пробионтами и E. agglomerans – 7,3 мм.
Минимальная зона отсутствия роста тестируемых культур мик- роорганизмов при перпендикулярном посеве штрихом зарегистри- рована между Kl. Рneumonia spp. и средством «Биомастим» – 11,8 мм, относительно St. epidermidis и средства «Биомастим» – 12,6 мм, между средством «Биомастим» и E. coli, а также St. Aureus ЗЗР со- ставила 8,4 мм.
В следующем опыте мы провели определение антагонистическо- го действия средства «Биомастим» через 7, 14, 21 день от даты про- изводства средства.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что зона за- держки роста по отношению к тест–культурам, используемым в предыдущем опыте, отличались в незначительных показателях на разных сроках хранения средства. Так, зона задержки роста E.coli на 7, 14 и 21 день хранения средства составляла 8,3, 7,0, 8,0 мм со- ответственно. По отношению к S. aureus – 7,9, 7,9 и 7,6 мм. К K. pneumoniae – в среднем 11,2 мм, что свидетельствует о том, что средство «Биомастим» сохраняет свое антимикробное действие на протяжении всего срока хранения.
3.4 Определение острой и хронической токсичности средства «Биомастим»
О токсическом действии средства судили по клиническому со- стоянию лабораторных животных; специфике их поведения; энер- гичности и характеру проявляемой активности; реакции на тактиль-
ные, шумовые и оптические раздражители; состоянию шерстного и кожного покрова; окраске слизистых оболочек; потреблению корма и воды.
В результате проведенных исследований установлено, что при- менение средства «Биомастим» не вызывает клинических призна- ков интоксикации, а также дальнейшей гибели лабораторных жи- вотных. После применения средства клиническое состояние мышей оставалось удовлетворительным. Лабораторные животные в опыт- ных группах вполне соответствующе реагировали на факто- ры внешней среды, аппетит не нарушался. Слизистые оболочки ротовой полости, конъюнктива были розового цвета. Мыши обла- дали гладким, блестящим шерстным покровом, шерсть не слипалась и не взъерошивалась. Тургор кожи соответствовал физиологической норме. Ректальная температура тела была в пределах референсных интервалов, акт дефекации безболезнен.
Таким образом, при исследовании острой токсичности средства «Биомастим» установлено, что данное средство в соответствии с нормативами ГОСТ 12.1.007-76, относится к 4-му классу опасности – вещества малоопасные.
Анализ патоморфологических исследований дает возможность утверждать об отсутствии токсического воздействия тестируемого нами средства на органы и системы организма опытных крыс. Од- нако следует отметить цвет содержимого кишечника, который имел характерный для цвета средства зеленый цвет.
Проведённые морфо-биохимические исследования показателей крови при многократном применении средства «Биомастим» позво- ляют утверждать отсутствие различий между показателями у жи- вотных опытных и контрольной групп. Таким образом, длительное введение в рацион исследуемого образца средства «Биомастим» лабораторным животным не привело к развитию токсических явле- ний, и не позволило установить его негативное влияние на орга- низм.
При изучении хронической токсичности средства «Биомастим» на беспородных крысах гибели животных и изменения их локомо- торной активности не установлено. Масса тела подопытных живот- ных существенно не изменялась.
3.5 Изучение раздражающего и ранозаживляющего действия средства «Биомастим»
Исследование раздражающего действия средства «Биомастим» на слизистые оболочки проводили на 6-ти кроликах породы «Кали- форнийский».
Проведенные тесты со средством «Биомастим» позволяют утверждать, что он не обладает раздражающим действием, так как нам не удалось обнаружить патологических изменений. Клиниче- ское состояние животных находилось в физиологической норме. Температурный показатель тела, частота дыхания, пульса находи- лись в пределах референсных интервалов. Сосуды конъюнктивы были не кровенаполнены, состояние роговицы и век были сопоста- вимы с их состоянием у контрольных животных.
Нами также было проведено определение раздражающего дей- ствия средства «Биомастим» на кожные покровы.
Опыты проводились на 5 кроликах обоего пола (2 самца 3 самки) весом не менее 2 кг.
В результате проведенных исследований нами не было уста- новлено специфических кожных реакций у опытных кроликов в течение всего периода проведения опыта.
В связи с этим мы констатируем тот факт, что средство «Биома- стим» не обладает раздражающим действием как при применении на слизистые оболочки, так и при длительном использовании кон- центрата при накожных аппликациях.
Ранозаживляющее действие средства определяли на кролике по- роды «Калифорнийский», нанеся животному искусственное ране- ние в области правого подвздоха.
На основании проведенных опытов нами было установлено, что скорость заживления в сутки экспериментально нанесенной раны кролику при использовании средства «Биомастим» составляет 24,37%. В качестве средства-аналога нами использовалась мазь «Биосептин». Отмечено более медленное заживление раневой по- верхности, которое составило 21,42%. Таким образом, среднесуто- чная скорость заживления раневой поверхности у кролика при ис- пользовании опытного средства была выше на 2,94%. Следует от- метить, что полное заживление обоих ранений произошло одновре- менно – на 14-е сутки после нанесения ран и заживление происхо- дило по первичному натяжению.
Сохранность животных во время проведения опыта составила 100%.
3.6 Отработка метода нанесения средства на соски вымени коров
Нами было апробировано два метода применения относи- тельно разрабатываемого нами средства: метод окунания соска в стакан и метод обработки соска спреем. Для этого нами было ис- пользовано 40 клинически здоровых коров по 20 животных в груп- пе. Одним животным средство наносили методом окунания соска в стакан, а второй группе животных средство наносили на соски, ис- пользуя распылитель «Росинка». Опыт проводился в течение 30 дней.
При анализе проведённого эксперимента, нами было отмечено, что при применении средства «Биомастим» методом окунания сос- ка в стакан
расход средства был значительно выше, чем в группе,
где применяли «Биомастим» методом распыления на сосок. Этот факт мы связываем с тем, что средство, имея жидкое агрегатное со- стояние, довольно быстро стекает с соска, а образующаяся на
сфинктере капелька высыхает примерно в течение 5 минут.
При применении средства методом распыления, достаточно двух
нажатий на рычаг, чтобы средство полностью покрыло сосок. При этом нами отмечалось образование мелких капелек на соске, кото- рые медленно стекали к основанию соска вымени, образуя долго висящую каплю на сфинктере соска, которая медленно высыхала –
до 40-60 минут.
Если рассматривать эти два метода применения средства со сто-
роны терапевтической эффективности, то эффективность их была одинакова. Как в первом, так и во втором случае было зарегистри- ровано по одному случаю заболевания скрытым маститом в обеих
группах.
Таким образом, нами рекомендовано применение средства
«Биомастим» методом распыления на сосок главным образом для
достижения более экономичного расхода этого средства.
3.7 Бактериальная обсемененность сосков вымени и молока до и после применения средства «Биомастим»
Нами был проведен бактериальный анализ загрязнённости сос- ков вымени, а также и секрета молочных желез, как до, так и после применения «Биомастима».
В результате нами было отмечено, что в контрольной группе по- сле обработки сосков вымени бактериальная обсемененность кожи снижается до 2,1±0,9×106 с 3,6±3,4×1014 на 1 см2, при этом, в опыт- ной группе после обработки бактериальная загрязненность была в 10 раз выше по сравнению с группой контроля и составляла 1,4±1,2×107, в то время как до обработки она составляла 1,6±1,4×1015. Однако в начале опыта бактериальная загрязненность сосков кожи вымени находилась практически на одном уровне, как у опытных животных, так и у контрольных.
Но в течение обработки вымени средством «Биомастим» мы от- мечали увеличение бактериальной обсемененности кожи у этих ко- ров. Бактериологический анализ подтверждает присутствие на коже сосков животных опытной группы бактерий рода Bacillus и Enterococcus. Несмотря на увеличение общей обсемененности кож- ного покрова, у животных этой группы отмечалось снижение условно-патогенной микрофлоры.
3.8 Оценка переносимости завышенных доз средства «Био- мастим» после доения целевыми видами животных (коровы)
Так как производителем средства «Биомастим» ООО «Биоте- хагро», в виду экономической целесообразности, средство выпус- кается в качестве концентрата, который перед применением разво- дится в десять раз, нами было принято решение провести исследо- вание переносимости животными завышенных и заниженных доз средства и определить их профилактическую эффективность.
Апробация была проведена на клинически здоровых коровах в фазе лактации. Было сформировано 3 группы животных по 10 голов в каждой. Средство «Биомастим» в различных концентрациях нано- сили на соски вымени методом распыления в течение 60 дней.
По результатам исследований выявлено, что наиболее оптималь- ной концентрацией микроорганизмов штаммов-пробионтов в сред- стве считается концентрация 1,0х108 КОЕ/мл, так как при обработке
сосков средством с этой концентрацией клиническим маститом не заболело ни одно животное, а субклинический мастит был выявлен лишь у 1 коровы.
При обработке сосков средством с концентрацией 1,0х105 КОЕ/мл, клиническим маститом заболело 2 коровы, а субклиниче- ским – 4. Следует отметить, что пораженных долей вымени было значительно больше, у трех животных отмечали поражение двух
долей вымени. При обработке средством, содержащим 1,0х1010 КОЕ/мл штаммов-пробионтов, профилактическая эффективность сохранялась на уровне 90%.
Ежедневный клинический осмотр кожи сосков вымени у коров 3-й группы не выявил поражений кожи. У животных отмечали хо- роший аппетит, животные адекватно реагировали на визуальные и звуковые раздражители. Также не отмечали изменения у здоровых животных в количественных показателях удоя
3.9 Клинические испытания средства «Биомастим»
Исследование клинической эффективности средства «Биома- стим» проводилось на базе хозяйства ООО АФ «им. Ильича» Вы- селковского района Краснодарского края.
Обработки проводили после доения, два раза в день на протяже- нии 45 дней с помощью пульверизатора. Животных опытной груп- пы обрабатывали средством «Биомастим», животных контрольной группы – средством «HD Udder Stabilizer».
По результатам наблюдения за животными установлено, что к концу второй недели использования средства «Биомастим» количе- ство коров, больных клиническим маститом, составило 6,3%, в то время как в контрольной группе оно составляло 8,3%. На 45 день опыта процент коров, больных маститом, в опытной и контрольной группе снизился до 4,2%.
При анализе заболеваемости коров скрытым маститом, просле- живается явная тенденция к снижению заболеваемости в опытной группе, к 14 дню использования средства «Биомастим» заболевае- мость коров составила 10,4%, а в контрольной группе 12,5%. К 45 дню опыта коров, больных скрытым маститом, в опытной группе было на 2,1% меньше, чем в контрольной и составило 8,3% и 10,4% соответственно. Проведенные исследования состояния сосков вы- мени на наличие трещин показало, что на протяжении всего опыта у коров опытной группы данное заболевание уменьшалось и в сред- нем составило 18,03%, в то время как в группе, где применяли HD Udder Stabilizer, трещины сосков вымени встречались в 19,47% (таблица 1).
Таблица 1 – Сравнение профилактической эффективности сред- ства «Биомастим» и средства-аналога «HD Udder Stabilizer»
Клиниче- ский мастит
Скры- тый ма-
стит
Трещи- ны сосков
вымени
Группы
14-й 3 (n=48) 45-й 2
День ис- следования
перед нача- 0 лом опыта
гол.
% гол. % гол. % 0 0 0 12 25
6,3 5 10,4 10 20,8 4,2 48,348,3 3,5 3,0 6,23 8,67 18,03
0 0 0 14 29,2
8,3 6 12,5 9 18,8 4,2 5 10,4 5 10,4
Опытная
Кон- трольная
(n = 48)
Среднее зна- 1,67 чение
перед нача- 0 лом опыта
14-й 4
45-й 2
Среднее зна- 2,0 4,17 чение
3,67 7,63 9,33 19,47
При подсчёте соматических клеток в молоке, в ходе апробации профилактической эффективности «Биомастима», было установле- но, что на всем протяжении опыта этот показатель находился на физиологическом уровне, то есть за весь период исследований чис- ло соматических клеток в молоке животных опытной и контрольной групп находилось на уровне 230 – 300 клеток.
В результате было обнаружено, что в пробах, отобранных от жи- вотных опытной группы, присутствуют микроорганизмы рода En- terococcus, входящие в состав средства «Биомастим», что подтвер- ждает их жизнеспособность. Стрептококков, стафилококков, сине- гнойной и патогенной кишечной палочки в пробах от животных обеих групп выделено не было, что свидетельствует о достаточной эффективности обоих средств.
Для подтверждения эффективности средства «Биомастим» было проведено производственное испытание: обработку вымени коров проводили раствором средства «Биомастим» два раза в день после доения на протяжении 90 дней в опытной группе, а в контрольной группе – средством-аналогом «HD Udder Stabilizer». Эффективность применения средства «Биомастим» оценивали на 30-й, 60-й и 90-й день производственного испытания по следующим показателям:
частота возникновения клинических форм мастита, частота возник- новения субклинических форм мастита, частота образования тре- щин сосков вымени.
Было установлено, что профилактический эффект клинического мастита с использованием средства «Биомастим» составляет 94,6% за весь период опыта, как и эффект средства-аналога HD Udder Sta- bilizer. Однако профилактический эффект опытного средства отно- сительно скрытого мастита составил 83,3% и был выше средства- аналога на 2,7%. Анализируя пораженность сосков трещинами у коров, мы отмечаем явную динамику снижения данного заболева- ния как в первой, так и во второй группе. Но стоит отметить, что в опытной группе к концу опыта больных данной патологией коров было на 4% меньше, чем в контрольной группе.
Таким образом, средство «Биомастим» обладает высокой профи- лактической эффективностью при использовании его в условиях современной молочно-товарной фермы.
В начале и в конце производственного испытания у всех живот- ных были отобраны и исследованы на 5 основных показателей ка- чества пробы молока (белок, жир, плотность, СОМО, количество соматических клеток) (таблица 2).
Таблица 2 — Показатели качества молока на начало и конец производственного испытания
Показатель
Массовая доля жира, % Массовая доля белка, % Плотность, кг/м3 СОМО
Соматические клетки, тыс./см3
Начало опыта
4,2±0,178
3,5±0,171 28,3±0,712 8,1±0,107
286,1±2,583
Конец опыта
4,3± 0,122 3,6±0,099 28,4±0,633 8,2±0,108
211,6±4,70
Как видно из таблицы 2, применение средства «Биомастим» в условиях производственного испытания не привело к ухудшению товарных качеств молока.
Также нами был проведен широкий производственный опыт в Агрофирме «Россия» Тимашевского района Краснодарского края. В опыте было задействовано 104 животных голштино-фризской поро-
ды с молочной продуктивностью на момент проведения опыта 8387 кг молока.
ни.
Трещины сосков вымени нами отмечались у 34,4% коров – 36 животных.
Следует отметить, что на начало проведения опыта на ферме
скрытый мастит регистрировался в среднем у 16,3% коров. Однако, с учётом пораженных долей вымени, этот показатель составил 35,2% или 24 пораженных доли на 17 коров, больных скрытым ма-
ститом.
Клинический мастит диагностировали у 2-х коров – 1,9%. При-
чем у одной коровы мастит регистрировали в сразу 2-х долях выме-
Все животные были распределены на 2 группы по 52 коровы по
принципу пар-аналогов. Первой группе животных применяли сред- ство «Биомастим» по вышеописанной схеме, а второй группе сред-
ство «Дипал» согласно инструкции по применению.
По результатам наблюдения за животными установлено, что к
концу первого месяца использования средства «Биомастим» коли- чество коров, больных клиническим маститом, составило 5,7%, в то время как в контрольной группе он составлял 3,8%. На 60 день опыта процент коров, больных маститом, в первой группе снизился до 1,9%, а в контрольной поднялся до 5,7%. По итогам пятой неде- ли, животных, больных клиническим маститом, в опытной группе
не выявлено.
При анализе заболеваемости коров скрытым маститом, просле-
живается явная тенденция снижения заболеваемости в опытной группе. На 30 день использования средства «Биомастим» заболева- емость коров составила 7,7%. Однако стоит отметить, что в сово- купности поражено было только 6 долей вымени, а в контрольной группе – 13 долей вымени у 17,3% коров. На 60 день опыта коров, больных скрытым маститом, в опытной группе было на 2% меньше, чем в контрольной – 5,7% против 7,7% соответственно. В конце тре- тьего месяца в опытной группе количество животных, больных
скрытым маститом, составило 6 коров, а в контрольной – 8 коров.
Проведенные исследования состояния сосков вымени на наличие
трещин показало, что на протяжении всего опыта у коров опытной группы данное заболевание уменьшалось и в среднем составило
19,2%, в то время как в группе, где применяли «Дипал», трещины
сосков вымени встречались в 28,1%.
Полученные результаты показали, что через 1 месяц применения
пробиотических средств отмечается значительное улучшение со- стояния сосков вымени, а также снижается заболеваемость масти-
том коров.
Таким образом, применение средства «Биомастим» показано для
профилактики мастита у крупного рогатого скота.
4. Экономическое обоснование применения разработанной системы лечебно-профилактических мероприятий при масти-
тах у коров
Исходя из себестоимости средства «Биомастим» в 60 рублей за 1 литр и определённой оптимальной концентрации раствора в 10%, а также оптимальной профилактической дозы в 4 мл на одно живот- ное, затраты на одну головообработку средством «Биомастим» в ходе клинических испытаний составили 0,024 рубля, таким образом на двухкратную обработку одной коровы в день затрачивалось 0,048 рублей, на всех животных в день — 14,4 рубля, на всех жи- вотных за весь период опыта затрачено 1296 рублей, что говорит о высокой экономической эффективности испытуемого средства.
Выводы
1. Мастит у коров в хозяйствах Краснодарского края регистрируется в среднем от 1,25% до 19,6%, в зависимости от сезона года. Субклинический мастит регистрируется у 7,5% – 12,5% коров, больных маститом.
2. «Биомастим» представляет собой суспензию тёмно-зелёного цвета с кисловатым запахом. В состав его входят пробиотические культуры штаммов Bacillus subtilis – B-5225 и Enterococcus faecium СТФ 1/56, а в качестве красителя – комплекс Хлорофиллина Е-141.
3. В результате проведенных исследований нами установлено, что зона задержки роста между штаммами Bacillus subtilis и Enteroccocus faecium средства «Биомастим» и тест-микробами в среднем составила 8,6 мм.
4. «Биомастим» по степени воздействия на организм в соответствии с нормативами ГОСТ 12.1.007-76 относится к 4-му классу опасности – вещества малоопасные. Безвреден в терапевтической дозе для животных.
5. «Биомастим» не оказывает раздражающего воздействия на слизистые оболочки и обладает ранозаживляющим действием. Скорость заживления раны составляет 24,37%.
6. При применении «Биомастим» в течение 14 дней, количество коров, заболевших клиническим маститом, составило 6,3%, в то время как в контрольной группе оно составляло 8,3%. На 45 день опыта процент коров, больных маститом, в опытной и контрольной группе снизился до 4,2%. Анализ заболеваемости коров скрытым маститом указывает на тенденцию к снижению заболеваемости к 14 дню использования средства «Биомастим»: заболеваемость коров составила 10,4%, а в контрольной группе 12,5%. К 45 дню опыта коров, больных скрытым маститом, в опытной группе было на 2,1% меньше, чем в контрольной – 8,3% и 10,4% соответственно. Наличие трещин на сосках вымени у коров, которым применяли «Биомастим», составило 18,03%, в то время как в группе, где применяли «HD Udder Stabilizer», трещины сосков вымени встречались в 19,47%.
Предложения производству
 Для профилактики мастита проводить средством «Биомастим» обработку сосков вымени коров после каждого доения методом орошения;
 Сократить использование химиотерапевтических средств в схемах профилактики мастита;
 Научно-практические результаты рекомендуется использовать в учебном процессе студентов по специальности ветеринария, при проведении научно-исследовательских работ в НИИ и ВУЗах ветеринарного профиля, при написании монографий, учебников, учебных пособий.