Фармако-токсикологические свойства адаптогумина и его применение в птицеводстве

Диссертационная работа выполнялась в 2016–2020 гг. в отделе фармако- логии Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института – обособленного структурного подразделения Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Краснодарский научный центр по зоотех- нии и ветеринарии». Клинические исследования проведены в условиях КФХ «Деренченко А. В.» (Ейский район, Краснодарский край).
При постановке опытов использовались токсикологические, фармаколо- гические, физиологические, клинические, морфологические, биохимические, гистологические и другие методы исследований.
Объект исследований – кормовая добавка адаптогумин включает в масс%: гуминовые вещества – 20; бетаина гидрохлорид – 3; фумаровую кисло- ту – 1; бентонит – 76.
Выбор оптимального соотношения компонентов при фармацевтической разработке кормовой добавки проводили в опытах in vitro на модели с Parame- cium caudatum. Стабильность адаптогумина определяли методом ускоренного старения по ОФС.1.1.0009.15 «Сроки годности лекарственных средств».
Экспериментальное исследование токсических свойств адаптогумина проводили путем определения: общей токсичности на простейших, согласно ГОСТ 31674-2012 «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы опре- деления общей токсичности»; острой, субхронической и хронической токсич- ности в соответствии с «Методическими рекомендациями по токсико- экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренными секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998) и со- гласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению но- вых фармакологических веществ» (под общей редакцией профессора Р. У. Хаб- риева, 2005). При этом соблюдались правила, предусмотренные «Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, которые используются с экспе- риментальной и научной целью» (ETS No 123, Страсбург, 18.03.1986).
Острую токсичность адаптогумина изучали на лабораторных крысах и цыплятах-бройлерах. Образец кормовой добавки вводили животным индивиду- ально внутрь в виде водной взвеси в дозах – 7960 мг/кг массы тела (для крыс) и 8000 мг/кг массы тела (для цыплят).
Параметры субхронической токсичности кормовой добавки были опреде- лены на цыплятах-бройлерах, которым в течение 28 дней в корм вводился адап- тогумин в дозах, рассчитанных от максимально введенной в остром опыте: пер- вая опытная группа – 159 мг/кг массы тела; вторая опытная группа – 398 мг/кг массы тела; третья опытная группа – 796 мг/кг массы тела. Птица контрольной группы получала только корма основного рациона. Кровь для исследований от- бирали у пяти бройлеров в начале эксперимента, на 14 и 28 дни. В динамике оценивали массу тела, а по окончанию опыта проводили патологоанатомиче- ское вскрытие и взятие органов для гистологического исследования. В рамках эксперимента по определению субхронической токсичности адаптогумина бы- ла выполнена ветеринарно-санитарная экспертиза и оценка качества мяса брой-
леров. Для этого у пяти птиц из каждой группы была проведена декапитация с последующей оценкой ветеринарно-санитарных показателей мяса.
крысах, разделенных на четыре группы – три опытных и одну контрольную (по 10 особей в каждой). Животным опытных групп ежедневно натощак в течение 60 дней задавали кормовую добавку адаптогумин в форме болюсов и дозах, рассчитанных от максимально введенной в остром опыте: первая опытная группа (1/10) – 0,8 г/кг массы тела; вторая опытная группа (1/20) – 0,4 г/кг мас- сы тела; третья опытная группа (1/50) – 0,16 г/кг массы тела; четвертая кон- трольная группа животных получала болюсы, состоящие из вспомогательных веществ. За крысами на протяжении опыта осуществляли клиническое наблю- дение, обращали внимание на летальность, поведенческие реакции, аппетит и другие факторы. Исследование крови проводили в начале и по окончании экспе- римента у пяти животных из каждой группы. Взвешивание крыс осуществляли в
Хроническая токсичность адаптогумина определялась на 40 нелинейных
начале, на 30 и 60 день опыта. По завершении эксперимента проводили эвтаназию пяти крыс из каждой группы с дальнейшим патологоанатомическим вскрытием и взятием органов для гистологического исследования.
Лабораторные исследования крови проводили при помощи автоматизиро- ванных анализаторов – биохимического «Vitalab Flexor» и гематологического «Mythic 18 vet».
Макро- и микроструктуру внутренних органов изучали общепринятыми в патогистологии методами. Препараты фиксировали в 10 %-м растворе форма- лина, в качестве заливочной среды использовали парафин. Срезы органов гото- вили при помощи замораживающего микротома с парафиновой проводкой. Препараты окрашивали гематоксилин-эозином.
Возможное местно-раздражающее действие адаптогумина определяли на кроликах – конъюнктивальной пробой и морских свинках – методом накожных аппликаций.
Фармакодинамику адаптогумина изучали при выращивании перепелов, которых в суточном возрасте разделили на пять групп по 30 голов в каждой: первая контрольная группа, содержалась на основном рационе; вторая опытная группа получала кормовую добавку с содержанием 70–80 % гуминовых ве- ществ в дозировке 1,5 % к корму; в третьей, четвертой и пятой опытных груп- пах в корм вводили адаптогумин в дозировках – 0,5 %, 1 и 1,5 % соответствен- но. За птицей в течение всего периода эксперимента (42 дня) вели клиническое наблюдение, регистрируя сохранность поголовья и динамику массы тела. Взвешивание птицы проводили в начале опыта, затем на 28 и 42 дни. Для опреде- ления влияния адаптогумина на обменные процессы у пяти перепелов из каждой группы в эти сроки была взята кровь для лабораторных исследований.
При изучении влияния адаптогумина на организм птицы при кормовом стрессе было сформировано четыре группы цыплят-бройлеров по 20 голов в каждой. Птице скармливали корм, естественным образом контаминированный микотоксинами : Т-2 токсин – 0,075 мг/кг (МДУ – 0,1 мг/кг); (МДУ – 2,0 мг/кг). Пер- вой группе опытных цыплят в пораженные микотоксинами корма вводили
в пределах максимально допустимого уровня
зеараленон – 0,038 мг/кг
адаптогумин в объеме 1 % к массе корма, во второй опытной группе – 2 %, тре- тьей опытной группе применяли добавку-аналог, содержащую цеолит и гуми- новые кислоты в объеме 2 % к корму. Цыплята четвертой контрольной группы добавок не получали и содержались на кормах, контаминированных микоток- синами.
По окончании эксперимента у пяти птиц из каждой группы была взята кровь с це- лью выяснения влияния адаптогумина на биохимические показатели и интен- сивность перекисного окисления липидов. После эвтаназии птицы проводили
патоморфологическое исследование внутренних органов.
Концентрацию продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в крови
(ДК – диеновые конъюгаты, КД – кетодиены и МДА – малоновый диальдегид) изучали в соответствии с методическими рекомендациями ВНИВИПФиТ (2010) на спектрофотометре «Еcovien». Уровень эндогенной интоксикации определяли по методу Н. И. Габриэлян и В. И. Липатовой (1984), оценивая концентрацию в крови молекул средней массы (МСМ).
Влияние адаптогумина на организм птицы изучали при транспортном стрессе кур-несушек кросса Хайсекс Браун, со средней массой тела 953,2±5,4 г. Птицу разделили на три группы по 50 голов в каждой, ранжирование проводили с учетом возраста, массы тела и клинического статуса. Для моделирования ситу- ации стресса в течение 5 часов птицу перевозили автомобилем в закрытых от освещения клетках, при плотной посадке. В первой группе применяли адапто- гумин – 1 % к основному рациону, во второй группе – 2 %. Третья группа птиц служила интактным контролем. Режим дозирования кормовой добавки – в те- чение 5 дней до и после транспортировки (всего 10 дней). За птицей в течение эксперимента вели клиническое наблюдение, обращая внимание на аппетит, двигательную активность и сохранность. Птицу взвешивали в начале опыта, на 2 и 10 дни после транспортировки. В эти периоды у пяти птиц из каждой группы была отобрана кровь для исследования биохимических показателей и состояния перекисного окисления липидов. Влияние адаптогумина на содержание корти- костерона в сыворотке крови кур при транспортном стрессе оценивали по ре- зультатам иммуноферментного анализа с использованием наборов Chicken CORT(Corticosterone) ELISA Kit.
Научно-хозяйственный опыт по изучению влияния адаптогумина на ор- ганизм кур-несушек при технологическом стрессе проведен в условиях КФХ «Деренченко А. В.» (Ейский район, Краснодарский край). В цехе выращивания было сформировано три группы молодок кросса Хайсекс Браун 100-дневного возраста (по 500 голов в каждой). Молодняк первой контрольной группы полу- чал полнорационные комбикорма по периодам выращивания. Аналогам второй опытной группы в течение 45 дней, начиная с возраста от 100 до 145 дней, в со- став комбикорма вводили 1 % адаптогумина. В третьей опытной группе приме- няли 1 % кормовой добавки-аналога, содержащей цеолит и гуминовые кислоты. В возрасте 115 дней птицу переводили в цех взрослого стада, что сопровожда- лось внутримышечным вакцинированием. После двухнедельного применения кормовых добавок и через сутки после стрессирующего воздействия у пяти кур
Опыт проводили в течение 20 дней, в этот период отслеживали клини-
ческое состояние птицы, сохранность поголовья, динамику массы тела.
9

из каждой группы была взята кровь для определения биохимических показате- лей. Для оценки качества яиц отбор проводили на последней неделе экспери- ментального периода – по 20 штук из каждой группы. Изучали морфологиче- ские показатели – оценка массы яиц и скорлупы, расчет соотношения белка к желтку, а также измерение толщины скорлупы. Массу яйца и его составных ча- стей определяли путем взвешивания на электронных весах с точностью до 0,1 г, толщину скорлупы – с помощью прибора ПУД-1.
Полученные в опытах цифровые данные были подвергнуты биометриче- ской обработке с помощью программного обеспечения фирм Mikrosoft ® и CarlZeiss ®. Критерий достоверности определяли по таблице Стьюдента.
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Разработка и контроль качества кормовой добавки адаптогумин
Оптимальный состав адаптогумина установлен методом био
В контроле средняя продолжительность прекращения дви- жения парамеций после взаимодействия с пероксидом водорода составила 2,13±0,22 минут, в образцах с компонентами адаптогумина период стабилиза-
ции состояния простейших максимально увеличился до 5,16±0,54 минут. Адаптогумин – комплексная кормовая добавка, состоящая из гуминовых веществ – 20 %, бетаина гидрохлорида – 3 %, фумаровой кислоты – 1 % и бен- тонита – 76 %. По внешнему виду представляет собой мелкодисперсный поро- шок однородной консистенции, коричневого или светло-коричневого цвета, без
запаха. Размер частиц находится в пределах 1–2 мм.
Установленный срок годности адаптогумина составляет 2,5 года.
3.2 Токсикологическая оценка кормовой добавки адаптогумин
В результате изучения субхронической токсичности адаптогумина уста- новлено, что за период проведения опыта гибели птицы зарегистрировано не бы- ло. Общее клиническое состояние бройлеров во всех группах соответствовало норме. Применение адаптогумина в течение 28 дней положительно влияло на ряд биохимических показателей в пределах референсных значений: концентра- ция общего белка у птицы опытных групп была достоверно выше показателей контроля на 4,58–4,82 %; значение глюкозы увеличилось от фонового уровня
ческого скрининга на модели с Paramecium caudatum – за счет доказанного эф- фекта составляющих кормовой добавки увеличивать толерантность инфузорий
фармацевти-
к клеточным ядам.
При определении острой токсичности разработанной кормовой добавки установлено, что ее однократное пероральное введение в дозах 7960 мг/кг мас- сы тела лабораторным крысам и 8000 мг/кг массы тела цыплятам-бройлерам переносится ими без токсических последствий, что по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» позволяет отнести адаптогумин к IV классу опасности
(малоопасные вещества).
максимально в третьей опытной группе с разницей 27,7 %; содержание тригли- церидов на конец эксперимента в контрольной группе уменьшилось на 12,3 %, что связано с затратой энергетического потенциала организма в период интенсив- ного роста, а в опытных группах в среднем этот показатель увеличился на 2,7 %.
Ветеринарно-санитарной экспертизой зарегистрировано, что длительное применение адаптогумина цыплятам-бройлерам приводит к улучшению каче- ства продукции птицеводства.
Изучение хронической токсичности адаптогумина в ходе проведенного на лабораторных крысах опыта позволило выявить, что сохранность животных в группах была стопроцентной. Клинических симптомов интоксикации не выяв- лено, при этом зарегистрирована положительная динамика массы тела живот- ных, и наибольший показатель зафиксирован во второй опытной группе, где масса тела увеличилась на 3,6 %.
При исследовании показателей крови крыс зарегистрировано, что они со-
ответствовали параметрам нормы для животных этого вида и возраста. Дли- тельное применение адаптогумина повышало относительно контрольных ана- логов уровень общего белка на 4,1–6,9 %, глюкозы на 11,3–12,6 %, эритроцитов на 9,0–20,2 % и гемоглобина на 3,8–8,8 %. Результаты проведенных исследова- ний разработанной кормовой добавки свидетельствуют об отсутствии дополни- тельной нагрузки на органы и ткани при ее длительном применении в условно- токсических дозах и о ее хорошей переносимости лабораторными крысами.
Экспериментально доказано отсутствие у адаптогумина местно- раздражающего эффекта.
3.3 Фармакологические свойства адаптогумина
3.3.1 Изучение фармакодинамики кормовой добавки адаптогумин при выращивании перепелов
Изучение фармакодинамики адаптогумина при выращивании перепелов позволило выявить, что его применение в дозах 0,5 %, 1 и 1,5 % к корму повышает сохранность птицы на 6,7–13,4 %. Среднесуточный прирост массы тела в опытных группах был выше контрольных аналогов: во второй группе – на 2,11 %; в третьей – на 3,71 %; в четвертой – на 8,97 %; в пятой – на 9,11 %.
Фармакодинамика адаптогумина проявляется увеличением в крови птицы (в пределах нормы) концентрации эритроцитов на 9,5–10,8 % и гемоглобина на 5,1–6,3 %, а также улучшением показателей метаболизма при повышении уровня общего белка на 3,3–6,9 %, альбуминов на 9,1–14,5 %, глюкозы на 8,2– 9,3 % и кальция на 5,8–6,6 %.
В ходе проведенных исследований установлено, что в группах перепелов, получавших адаптогумин, отмечено снижение активности АлАТ, указывающее на оптимизацию состояния печени: в третьей опытной – на 21,5 % (р≤0,05); в четвертой опытной – на 26,8 % (р≤0,01); в пятой опытной – на 25,4 % (р≤0,05).
Использование адаптогумина способствует снижению продуктов перекисного окисления липидов и уровня эндогенной интоксикации организма с разницей относительно интактного контроля: МДА максимально в четвертой опытной группе – 10,4 %; МСМ (λ = 254 нм) во второй группе – менее 1 %, в третьей группе – 2,8 %, в четвертой группе – 5,7 % и в пятой группе – 5,3 %; МСМ (λ = 280 нм) во второй группе – 1,2 %, в третьей группе – 3,5 %, в четвертой группе – 9,9 % (р≤0,05) и в пятой группе – 8,4 % (р≤0,05).
Таким образом, результаты проведенного исследования показали, что фармакодинамические эффекты адаптогумина при его включении в рацион перепелов в разных дозах проявляются ростостимулирующим действием и оптимизирующим влиянием на эритропоэз и биохимический состав крови птицы, обуславливая повышение показателей белкового, углеводного и минерального обменов, а также способствуя стабилизации структуры гепатоцитов, снижению продуктов перекисного окисления липидов и уровня эндогенной интоксикации. Выявлено, что наиболее эффективной и экономически целесообразной является дозировка адаптогумина 1 % к корму.
3.3.2 Изучение фармакологических свойств адаптогумина при экспериментальном микотоксикозе у цыплят-бройлеров
Исследования проводили на цыплятах-бройлерах, которым
дней скармливали корм, контаминированный Т-2 токсином и . В пораженные микотоксинами корма соответственно по группам вводили адаптогумин в дозировках 1 и 2 % к корму и добавку, содержащую комплекс цеолита и гуминовых веществ в количестве 2 % к корму.
В результате проведенного опыта установлено, что у цыплят, получавших адаптогумин на фоне контаминированного микотоксинами корма, клинических симптомов интоксикации почти не отмечалось. Только, в первой опытной группе при дозировке адаптогумина в количестве 1 % к массе корма у бройле- ров к концу опыта было зарегистрировано незначительное снижение двига- тельной активности и увеличение объема потребляемой воды. В третьей опыт- ной группе (с добавкой-аналогом) клинические признаки интоксикации стали проявляться на 9–11 дни, а в контроле – с пятого дня применения пораженных кормов. К 10 суткам у пяти контрольных цыплят зарегистрировано выраженное угнетение, снижение аппетита, в последующие дни они погибали. Сохранность поголовья птиц в этой группе была самой низкой – 75 %, тогда как в первой и вто- рой опытных группах этот показатель равнялся 100 %, а в третьей группе – 90 %.
Адаптогенные свойства используемых добавок при кормовом стрессе проявились влиянием на увеличение массы тела цыплят, в сравнении с кон- трольными аналогами. Так, на завершающем этапе эксперимента среднесуточ- ный прирост в первой опытной группе был выше контроля на 21,7 %, во второй группе – на 23,3 %, в третьей группе – 16,9 %.
Введение в рацион птицы адаптогумина и добавки-аналога сопровожда- лось положительными изменениями биохимических показателей крови (табли- ца 1).
в течение 20
12
зеараленоном

Таблица 1 – Влияние адаптогумина на биохимические показатели крови цыплят-бройлеров при экспериментальном микотоксикозе (М±m; n=5)
Показатели
Мочевина, ммоль/л Глюкоза, ммоль/л Холестерин, ммоль/л АсАТ, Ед/л
АлАТ, Ед/л
Группы
1 опытная
4,2±0,23* 11,3±0,44* 4,5±0,15 331,7±5,3** 19,6±2,54*
2 опытная
4,1±0,18** 12,7±0,86* 4,6±0,09 329,1±6,3** 18,3±1,38**
3 опытная
3,8±0,13* 9,8±1,53 4,2±0,16 356,1±8,2* 22,7±1,19**
контроль
3,5±0,16 9,4±1,28 3,8±0,05 430,4±8,6 30,7±2,56
Общий белок, г/л
48,7±1,84* 50,3±1,55** 46,7±2,27
39,4±1,43
Примечание: различия достоверны (*p≤0,05; **p≤0,01) в сравнении с контролем
Оптимизирующее влияние на белковый обмен проявилось достоверным повышением относительно контрольной птицы: в первой опытной группе об- щего белка – на 23,6 % и мочевины – на 20 % (р≤0,05); во второй опытной груп- пе общего белка – на 27,7 % (р≤0,05) и мочевины – на 17,1 % (р≤0,01); в третьей опытной группе общего белка – на 18,5 % и мочевины – на 8,6 % (р≤0,05).
Показатели углеводного и жирового обмена в опытных группах птицы также улучшились, что реализовалось в более высокой концентрации глюкозы и холестерина в сравнении с их уровнем у контрольной птицы: глюкозы – на 20,2 % (первая группа), 35,1 % (вторая группа) и 4,2 % (третья группа); холесте- рина – на 18,4 % (первая группа), 21,1 % (вторая группа) и 10,5 % (третья группа).
Применение добавок оказало положительное действие на уровень гепато- индикаторных ферментов, что подтвердилось достоверным снижением актив- ности аминотрансфераз в сравнении с контролем: АсАТ – на 22,9 % (первая группа), 23,5 % (2 группа) и 17,3 % (третья группа); АлАТ – на 36,2 % (первая группа), 40,4 % (2 группа) и 26,1 % (третья группа).
Таблица 2 – Влияние адаптогумина на показатели перекисного окисления липидов крови цыплят-бройлеров при экспериментальном микотоксикозе (М±m; n=5)
Показатели
ДК (232) , ед. опт. пл. / мг липидов КД (273) , ед. опт. пл. / мг липидов
МДА (537), мкмоль/л
Группы
1 опытная 2 опытная 3 опытная контроль
0,327±0,011** 0,295±0,015** 0,390±0,022* 0,415±0,016
0,153±0,017* 0,148±0,012** 0,185±0,025 0,217±0,019
2,76±0,21* 2,54±0,19* 2,96±0,27 3,61±0,13
Примечание: различия достоверны (*p≤0,05; **p≤0,01) в сравнении с контролем
Проведенными экспериментами установлено, что применение адаптогу- мина эффективно влияет на индикаторные показатели стресса, отражающие процессы перекисного окисления липидов организма птицы (таблица 2).
Так, содержание ДК у птиц первой и второй опытных групп было досто- верно ниже значений бройлеров, получавших добавку-аналог на 16,2 и 24,4 %, а разница с группой без лечения составила 21,2 и 28,9 % соответственно.
У птицы, получавшей адаптогумин, относительно третьей группы кон- центрация КД была ниже на 17,3 % (первая группа) и на 20 % (вторая группа), МДА – на 6,75 и 14,2 % соответственно. Разница с контролем составила по КД – 29,5 % (первая группа) и 31,8 % (вторая группа), по МДА соответственно 23,5 и 29,6 %.
Результаты проведенного исследования показали, что применение адапто- гумина при кормовом стрессе птицы, обусловленном поступлением в организм микотоксинов, свидетельствует о наличии у него адаптогенных, антитоксиче- ских и антиоксидантных свойств, что подтверждается оптимизацией биохими- ческой картины крови (белкового и углеводного обменов, стабилизацией кле- точных структур гепатоцитов и перекисного окисления липидов), улучшением клинического статуса цыплят-бройлеров, а также увеличением прироста массы тела и сохранности поголовья.
Выявлено, что при микотоксикозах наиболее эффективной является дози- ровка адаптогумина – 2 % к корму.
3.3.3 Изучение фармакологических свойств адаптогумина при транспортном стрессе у кур-несушек
При оценке эффективности применения адаптогумина при транспортном стрессе у кур-несушек сразу после транспортировки наблюдалось угнетение, снижение объема потребляемого корма, у большинства птиц – взъерошенность перьевого покрова, у некоторых особей – мышечная дрожь.
Анализ динамики массы тела кур показал, что в результате перенесенного стресса ко 2 суткам их весовые показатели снизились: в первой опытной группе – на 4,2 %; во второй опытной группе – на 3,5 %; в контрольной – на 7,9 %. В дальнейшем состояние стабилизировалось, и в последующие 10 суток после транспортировки прирост по группам составил: в первой опытной – 123,8 г; во второй опытной – 128,3 г; в контрольной – 96 г. Следовательно, применение адаптогумина при моделировании транспортного стресса способствует сохра- нению основных энергетических ресурсов организма и повышению приростов массы тела птицы на 28,9–33,6 %.
В стрессовых условиях изменяются биохимические показатели крови и еѐ состав.
Из этих данных видно, что через два дня после воздействия стресс- факторов содержание глюкозы в крови птицы первой опытной группы снизи- лось на 12,9 %, во второй опытной группе – на 11,4 %, а в контрольной – на 22,1 %.
Результаты биохимического исследования, отражающего углеводный и
белковый метаболизм в организме кур, представлены в таблице 3.
Таблица 3 – Влияние адаптогумина на содержание глюкозы и общего белка в сыворотке крови кур при транспортном стрессе (М±m; n=5)
Показатель
1 опытная
7,18±0,48
6,36±0,12**
Группы
2 опытная 3 контрольная
7,14±0,74
6,41±0,15* 5,78±0,21
Перед транспортировкой
7,06±0,37
На второй день после транспортировки
Глюкоза, ммоль/л
На десятый день после транспортировки
7,22±0,45
46,7±2,5
45,8±2,5
7,18±0,17* 6,54±0,26
47,7±1,3
46,3±1,7 44,2±2,6
Перед транспортировкой
46,4±2,8
На второй день после транспортировки
Общий белок, г/л
На десятый день после транспортировки
49,3±2,4 51,2±1,5 47,8±2,7
Примечание: различия достоверны (*p≤0,05; **p≤0,01) в сравнении с контролем
Достоверная разница между курами, получавшими адаптогумин, и кон- трольными аналогами по концентрации глюкозы в крови в этот период соста- вила по первой опытной группе 10 % (p≤0,01) и по второй опытной группе – 11 % (p≤0,05). На 10 сутки после стресса содержание глюкозы в крови птицы контрольной группы было ниже исходного значения на 7,4 % при разнице к по- казателям опытных групп в среднем 10 %.
Анализ содержания общего белка в сыворотке крови птицы показал, что на 2 сутки после транспортировки была зарегистрирована тенденция к сниже- нию этого показателя во всех группах. К 10 суткам в первой опытной группе концентрация общего белка в крови по сравнению с фоновым значением увеличи- лась на 7,7 %, во второй опытной группе − на 4,2 % и в контрольной − на 3 %.
На вторые сутки после стрессового воздействия в крови кур возросло со- держание холестерина: в первой опытной группе – на 24 %, во второй опытной – на 10,1 % и в контрольной группе – на 46,9 %. Достоверная разница в биохи- мических показателях крови в этот период между птицей, получавшей адапто- гумин и контрольными аналогами по концентрации холестерина по первой опытной группе составила 18,1 % (p≤0,01) и по второй опытной группе – 20,9 % (p≤0,05). На 10 день от начала опыта уровень холестерина в крови кур-несушек практически вернулся к исходным значениям.
Разница в уровне ферментов между птицей, получавшей адаптогумин и интактным контролем на фоне транспортного стресса, составила: по АсАТ на второй день в первой опытной группе – 11 % и во второй опытной группе – 14,5 % (p≤0,05), на десятый день в первой опытной группе – 14,3 % (p≤0,01) и во второй опытной группе – 19,2 % (p≤0,01); по АлАТ – на второй день в пер- вой опытной группе – 14,3 % (p≤0,05) и во второй опытной группе – 8,3 %, на
десятый день в первой опытной группе – 25,7 % (p≤0,01) и во второй опытной группе – 20,9 % (p≤0,05).
При изучении динамики содержания кортикостерона в сыворотке крови кур при транспортном стрессе выявлено, что фоновые значения определялись на статистически близком уровне: первая опытная группа – 44,1±7,38 нмоль/л; вторая опытная группа – 47,3±5,26 нмоль/л; третья контрольная – 45,2±8,21 нмоль/л. На второй день после транспортного стресса у птицы заре- гистрировано повышение уровня кортикостерона в сыворотке крови: в первой опытной группе до 86,6±4,21 нмоль/л; во второй опытной группе до 78,3±6,46 нмоль/л; в контрольной группе у птицы в ответ на стресс происходи- ло резкое повышение этого показателя до 104,1±9,83 нмоль/л. При расчете раз- ница в уровне данного гормона между птицей, получавшей адаптогумин, и ин- тактным контролем ко вторым суткам после стрессирующего воздействия в 1 опытной группе составила 16,8 % и во второй опытной группе – 24,8 % (p≤0,05). К 10 дню в группах птиц с использованием фармакокоррекциии про- изошло снижение концентрации кортикостерона практически до исходного уровня с разницей между началом и завершающим этапом опыта в первой опытной группе – 12,2 % и во второй – 6,9 %. В контрольной группе уровень гормона превышал фоновые значения на 27,8 %.
Ко второму дню после транспортировки у птицы зарегистрировано зна- чительное повышение показателей ПОЛ в крови, выходящее за верхнюю гра- ницу референсных значений. Так, концентрация первичных продуктов увели- чилась следующим образом: ДК – в первой и во второй опытных группах – в среднем в 1,47 раза, а в контрольной группе – в 1,65 раза; КД – в первой опыт- ной группе – на 23,1 %, во второй опытной – на 12,8 % и в контрольной группе – на 46,5 %. Содержание вторичных продуктов ПОЛ, к которым относится МДА в этот период исследований повысилась в организме птицы первой опыт- ной группы на 22 %, во второй опытной – на 14,1 % и в контрольной группе – на 28,5 %. Разница между двумя опытными группами и контролем по содержа- нию продуктов ПОЛ в крови составила: по ДК – 9,9 и 11,6 % (p≤0,05); по КД – 22,9 % (p≤0,01) и 25,7 % (p≤0,05); по МДА – 7,7 и 11,5 % (p≤0,05) соответственно.
На десятый день опыта содержание первичных продуктов ПОЛ в крови птицы опытных групп было практически на фоновом уровне, а у интактной птицы превосходило исходные данные на 8,9 % (ДК) и 13 % (КД). Разница между двумя опытными группами и контролем составила: по ДК – 6,6 и 8,2 %; по КД – 17,6 % (p≤0,01) и 12,7 % (p≤0,05).
Применение адаптогумина при моделировании транспортного стресса по- зитивно отразилось на содержании вторичных продуктов ПОЛ, снижая к деся- тому дню опыта концентрацию МДА в крови кур-несушек с достоверной раз- ницей (p≤0,05) к контролю по первой опытной – 24,2 % и по второй опытной – 26,3 % группам.
Следовательно, анализ важнейших индикаторных показателей, отражаю- щих активность перекисного окисления липидов в организме птицы, подтвер- ждает, что наиболее оптимальные значения регистрируются в группах, где при
транспортном стрессе применяли адаптогумин, а наивысшие значения – у кур интактного контроля.
Таким образом, в результате проведенных экспериментов установили высокую фармакологическую эффективность кормовой добавки адаптогумин при транспортном стрессе у кур-несушек, что свидетельствует о наличии у нее адаптогенных и метаболических свойств, поскольку происходит нормализация показателей биохимии крови и активности перекисного окисления липидов организма птицы, а также увеличение приростов массы тела.
Выявлено, что при транспортном стрессе наиболее эффективной и экономически целесообразной является дозировка адаптогумина – 1 % к корму.
3.4Эффективность адаптогумина при технологическом стрессе у кур-несушек в производственных условиях
Одним из периодов индустриального выращивания птицы, сопровождае- мого развитием технологического стресса в организме, является перевод мо- лодняка в цех взрослого стада, когда изменяются не только факторы содержа- ния и кормления, но и проводится вакцинация поголовья. В условиях производ- ства проведен эксперимент по изучению эффективности адаптогумина (вторая опытная группа) в сравнении с добавкой-аналогом, содержащей цеолит и гуми- новые кислоты (третья опытная группа) при технологическом стрессе у кур- несушек. В первой контрольной группе птица была интактной.
В результате проведенных исследований установлено, что использование добавок в рационах птиц оказало положительное действие на биохимический статус крови кур, с приоритетными значениями в группе, получавшей адапто- гумин (таблица 4).
Таблица 4 – Влияние адаптогумина на биохимические показатели крови кур-несушек при технологическом стрессе (М±m; n=5)
Показатели
Общий белок, г/л Альбумины, г/л Креатинин, мкмоль/л Мочевина, ммоль/л
Глюкоза, ммоль/л Холестерин, ммоль/л Кальций, ммоль/л Фосфор, ммоль/л
1 контрольная 47,8±1,28 26,5±0,46 64,6±1,68 3,56±0,11 17,8±0,96 237,4±7,1 6,13±0,27 3,80±0,13 2,14±0,09 1,62±0,11
Группа
2 опытная 50,3±2,34 28,1±0,23* 55,4±0,76** 3,12±0,06** 14,6±1,18* 228,9±6,9 5,35±0,15* 3,72±0,24 2,56±0,02*** 1,83±0,04*
3 опытная 49,2±2,42 27,3±0,18 58,9±2,53 3,28±0,09* 16,1±1,24 231,5±8,3 5,47±0,18* 3,73±0,19 2,32±0,08* 1,72±0,07
АлАТ, Ед/л
АсАТ, Ед/л
Примечание: различия достоверны (*p≤0,05; **p≤0,01; ***p≤0,01) в сравнении с контролем
Так, во второй опытной группе у птиц содержание общего белка в сыво- ротке крови превышало значения контрольной группы на 5,2 %, в третьей опытной – на 2,2 %, альбуминов – на 8 % (р≤0,05) и на 2,9 % соответственно.
После стрессовой нагрузки уровень креатинина в сыворотке кур второй опытной группы на фоне применения адаптогенной добавки был ниже на 16,6 % (р≤0,01) относительно интактных аналогов, а с третьей опытной группой разница составила 6,3 %. Аналогичная ситуация прослеживается и по уровню мочевины – применение добавок обусловило снижение этого метаболита в кро- ви птицы с разницей к показателю контрольной группы во второй опытной – на 14,1 % (р≤0,01) и в третьей опытной – на 8,5 % (р≤0,05).
При изучении активности аминотрансфераз установлено, что содержание АлАТ в сыворотке крови птицы второй опытной группы было на 17,9 % (р≤0,05) ниже показателя контрольной птицы, а с третьей опытной группой разница составила 9,3 %. В уровне АсАТ изменения показателя были незначи- тельны, максимальные значения составили 3,6 % во второй опытной группе.
Концентрация глюкозы в крови контрольных кур относительно птицы второй и третьей опытных групп была выше на 14,5 % и 12,1 % соответственно (р≤0,05).
В сыворотке крови кур-несушек второй опытной группы показатель со- держания общего кальция был на уровне 2,56±0,02 ммоль/л, что превышало значение контроля на 19,6 % (р≤0,001), а в третьей опытной группе – 2,32±0,08 ммоль/л, с разницей в 8,4 %. Содержание фосфора в крови птицы второй опыт- ной группы было на уровне 1,83±0,04 ммоль/л, что превысило показатель кон- трольной птицы на 12,9 % (р≤0,05), а в третьей опытной группе – 1,72±0,07 ммоль/л, при разнице в 6,2 %.
Уровень кортикостерона в крови кур через сутки после воздействия стрессирующих факторов составил: в первой контрольной группе 128,7±14,27 нмоль/л; во второй опытной группе – 74,9±6,53 нмоль/л; в третьей опытной группе – 85,4±8,19 нмоль/л. Разница в уровне кортикостерона в крови птиц, получавшей адаптогенные добавки, и интактными курами составила 1,7 и 1,5 раза.
Клиническими исследованиями установлено, что птица опытных групп в меньшей степени подвергалась расклеву, так как этот показатель во второй опытной группе составил 5,2 % и в третьей опытной – 6,4 %, а в контрольной – 7,6 %. Продолжительность расклева в контрольной группе превышала таковую в опытных группах птиц в среднем на 5–7 дней. Травмированная птица после соответствующего лечения в дальнейшем также была задействована в экспери- менте. Сохранность поголовья за весь период исследований в первой контроль- ной группе была на уровне 96,0 %, во второй опытной группе – 99,2 % и в тре- тьей опытной группе – 98,0 %.
По результатам проведенного эксперимента установлено, что применение кормовой добавки адаптогумин положительно влияет на яйценоскость кур- несушек. Так, во второй опытной группе яйценоскость кур превышала показа- тели контрольной группы – на 23 % и в третьей опытной – на 15,3 %.
Оценка качества яиц показала, что масса желтка у кур опытных групп превышала показатель контроля на 6,4 и 4,8 % соответственно. При этом масса белка яиц кур второй опытной группы была выше значений у контрольной пти- цы на 3,8 %, а скорлупы – на 1,5 %. У кур, получавших адаптогумин, толщина скорлупы была максимальной и составляла в среднем 376,4±1,26 мкм, у ин- тактной птицы – 369,2±1,48 мкм, а в группе сравнения – 373,1±1,18 мкм.
Таким образом, введение кормовой добавки адаптогумин в рацион птицы в период планируемых манипуляций, сопровождающихся развитием техноло- гического стресса, позволяет увеличить адаптационные возможности организма кур-несушек, оптимизировать обменные процессы, а также повысить сохран- ность и продуктивность поголовья сельскохозяйственной птицы.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Расширение спектра фармакологических средств, повышающих адаптаци- онные возможности птицы к действию стресс-факторов и оказывающих норма- лизирующее влияние на обмен веществ в организме, является актуальным направлением ветеринарной науки. Проведенные исследования обосновывают применение разработанной кормовой добавки адаптогумин в качестве анти- стрессового, метаболического и ростостимулирующего средства в птицевод- стве. Полученные результаты позволили сформулировать следующие выводы и практические предложения:
Выводы
1. Разработана кормовая добавка адаптогумин, состоящая из гуминовых веществ – 20 %, бетаина гидрохлорида – 3 %, фумаровой кислоты – 1 % и бен- тонита – 76 %. По внешнему виду представляет собой мелкодисперсный поро- шок однородной консистенции, коричневого или светло-коричневого цвета, без запаха. Установленный срок годности адаптогумина составляет 2,5 года.
2. При проведении токсикологических исследований разработанной кормовой добавки установлено, что ее однократное пероральное введение в до- зах 7960 мг/кг массы тела лабораторным крысам и 8000 мг/кг массы тела цып- лятам-бройлерам переносится ими без токсических последствий, что по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» позволяет отнести адаптогумин к IV классу опасности (малоопасные вещества). В ходе длительного применения кормовой
добавки цыплятам-бройлерам и нелинейным крысам в дозах, составляющих 1/10, 1/20 и 1/50 от максимальной по острому опыту, ее токсическое действие на организм животных не выявлено. При этом адаптогумин оказывает положи- тельное влияние на ряд показателей крови, стимулируя эритропоэз, белковый, углеводный и минеральный обмены, проявляя ростостимулирующую эффек- тивность. Мясо птицы после применения кормовой добавки допускается исполь- зовать без ограничений. Экспериментально доказано отсутствие у адаптогумина местно-раздражающего эффекта.
3. Фармакодинамические эффекты адаптогумина при его включении в рацион перепелов в дозах от 0,5 до 1,5 % к корму проявляются: повышением сохранности поголовья птицы на 6,7–13,4 %; ростостимулирующим действием при увеличении приростов массы тела на 3,7–9,1 %; оптимизирующим влияни- ем на эритро- и гемопоэз при увеличении концентрации эритроцитов на 9,5– 10,8 % и гемоглобина на 5,1–6,3 %; улучшением показателей метаболизма, при повышении уровня общего белка на 3,3–6,9 %, альбуминов на 9,1–14,5 %, глю- козы на 8,2–9,3 % и кальция на 5,8–6,6 %. Использование адаптогумина способ- ствует снижению в крови продуктов перекисного окисления липидов и уровня эндогенной интоксикации при улучшении состояния печени перепелов. Выяв- лено, что наиболее фармакологически эффективной и экономически целесооб- разной является дозировка адаптогумина 1 % к корму.
4. Фармакологическая активность адаптогумина при кормовом стрессе, обусловленном поступлением в организм цыплят-бройлеров микотоксинов, ха-
рактеризуется снижением клинических проявлений интоксикации, повышением сохранности поголовья – на 25 % и приростов массы тела – на 21,6 %. Адапто- генные, антиоксидантные и антитоксические свойства кормовой добавки под- тверждаются оптимизацией биохимической картины крови (в показателях бел- кового, жирового, углеводного обменов и процессов липопероксидации), а так- же восстановлением структуры и функции печени. При микотоксикозах птицы наиболее эффективной является дозировка адаптогумина 2 % к корму.
5. Применение адаптогумина при экспериментальном транспортном стрессе кур-несушек способствует повышению приростов массы тела на 28,9– 33,6 %, нормализации биохимических показателей крови, снижению концен- трации кортикостерона в сыворотке на 15,6–20,9 %. Установлено, что процессы перекисного окисления липидов в организме птицы активируются в условиях транспортировки. Применение адаптогумина обеспечивает снижение отрица- тельных последствий стресса при достоверном уменьшении в крови содержа- ния диеновых конъюгатов на 8,9–11,6 %, кетодиенов – на 13–25,7 % и малоно- вого диальдегида – на 11,5–26,3 %.
6. Проведенный научно-хозяйственный опыт показал, что применение адаптогумина при технологических стрессах у кур-несушек позволяет оптими- зировать обменные процессы в организме птицы, повысить сохранность поголо- вья на 2 % и яйценоскость – на 23 %, а также улучшить качественные показатели яиц.
7. Экономическая эффективность в результате использования адаптогу- мина составляет 10,15 рублей на 1 рубль затрат.
Практические предложения
Для промышленного птицеводства и ветеринарной медицины предлагает- ся кормовая добавка адаптогумин, обладающая адаптогенным и метаболиче- ским действием.
Адаптогумин назначают птице с кормом при стрессовых состояниях (пе- ресадке, кормовых, технологических, транспортных стрессах и т. д.), а также с целью повышения показателей сохранности и продуктивности поголовья.
Дозы и способ применения:
– для повышения продуктивности и сохранности – 1 % к корму в течение 30- 45 дней (после 10-дневного перерыва возможен новый месячный курс);
технологических стрессов
сти) – 1 % к корму;
– при микотоксикозах – норма ввода может составлять (с учетом степени
контаминации) от 2 до 2,5 % к корму;
– при острых стрессах – за 3-5 дней до и 5 дней после воздействия стресс-
факторов из расчета 1 % к корму.
Разработана нормативная документация (инструкция по применению),
определяющая условия применения адаптогумина, рассмотренная и одобренная ученым советом ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и вете- ринарии» (протокол No 1 от 14 марта 2019 года).