Фармакологические свойства новых производных 2-оксиндола

Бесплатно
Работа доступна по лицензии Creative Commons:«Attribution» 4.0
Клочков Владлен Геннадиевич
Бесплатно
Работа доступна по лицензии Creative Commons:«Attribution» 4.0

ВВЕДЕНИЕ …………………………………………………………………………………………………………………………… 4
ГЛАВА 1. Фармакологические свойства производных 2-оксиндола ……………………………………… 11
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ………………………………………………….. 27
ГЛАВА 3. Поиск производных 2-оксиндола, ингибирующих киназу гликогенсинтазы типа 3
бета (GSK3B) ………………………………………………………………………………………………………………………. 58
3.1. Поиск ингибиторов GSK3B среди новых производных 2-оксиндола …………………………… 58
3.1.1. Зависимость ингибирующей активности от структуры новых производных 2-
оксиндола …………………………………………………………………………………………………………………….. 60
3.1.2. Построение модели связывания in silico соединений К-167 и К-248………………………. 63
3.1.3. Цитотоксичность соединений К-167 и К-248 ………………………………………………………… 66
3.1.4. Заключение …………………………………………………………………………………………………………. 69
3.2. Антидиабетическая активность соединения К-167 ……………………………………………………… 69
3.2.1. Влияние на утилизацию глюкозы фибробластами крыс ………………………………………… 70
3.2.2. Влияние на уровень постпрандиальной гипергликемии в пероральном тесте
толерантности к глюкозе ………………………………………………………………………………………………. 70
3.2.3. Антидиабетическая активность при курсовом введении ……………………………………….. 72
3.2.4. Влияние на воспалительный статус животных с моделью сахарного диабета 2-го
типа ……………………………………………………………………………………………………………………………… 79
3.2.5. Влияние на поведенческую активность животных с моделью сахарного диабета 2-го
типа ……………………………………………………………………………………………………………………………… 82
3.3. Противовоспалительные свойства соединения К-167 ………………………………………………….. 84
3.4. Антиагрегантная и антитромботическая активность соединения К-167 ……………………….. 96
3.4.1. Антиагрегантная активность in vitro …………………………………………………………………….. 96
3.4.2. Антитромботическая активность in vivo ………………………………………………………………. 98
3.5. Оценка лекарственного подобия основных фармакокинетических и токсикологических
свойств соединения К-167 по показателям ADMET ………………………………………………………….. 99
3.6. Острая токсичность при пероральном введении белым мышам …………………………………. 100
3.7. Заключение ……………………………………………………………………………………………………………… 101
3.8. Антидиабетическая активность соединения К-248 ……………………………………………………. 102
3.8.1. Влияние на утилизацию глюкозы фибробластами крыс ………………………………………. 102
3.8.2. Антидиабетическая активность при курсовом введении ……………………………………… 103
3.8.3. Влияние на воспалительный статус животных с моделью сахарного диабета 2-го
типа ……………………………………………………………………………………………………………………………. 110
3.8.4. Влияние на поведенческую активность животных с моделью сахарного диабета 2-го
типа ……………………………………………………………………………………………………………………………. 113
3.9. Противовоспалительные свойства соединения К-248 ………………………………………………… 114
3.10. Антиагрегантная активность соединения K-248 ………………………………………………………. 126
3.11. Оценка лекарственного подобия, основных фармакокинетических и токсикологических
свойств соединения К-248 по показателям ADMET ………………………………………………………… 128
3.12. Заключение ……………………………………………………………………………………………………………. 129
ГЛАВА 4. Поиск производных 2-оксиндола, ингибирующих α-глюкозидазу ……………………… 131
4.1. Влияние новых производных 2-оксиндола на активность α-глюкозидазы ………………….. 131
4.1.1. Зависимость ингибирующей активности от структуры новых производных 2-
оксиндола …………………………………………………………………………………………………………………… 133
4.1.2. Построение модели связывания соединения К-170(1) с α-глюкозидазой in silico …. 137
4.1.3. Цитотоксичность соединения К-170(1)……………………………………………………………….. 139
Заключение ……………………………………………………………………………………………………………………. 140
4.2. Антигипергликемическая активность соединения К-170(1)……………………………………….. 141
4.2.1. Влияние на уровень постпрандиальной гипергликемии в пероральном тесте
толерантности к дисахаридам …………………………………………………………………………………………. 141
4.2.2. Влияние на уровень постпрандиальной гипергликемии в пероральном тесте
толерантности к глюкозе …………………………………………………………………………………………….. 143
4.3. Оценка лекарственного подобия, основных фармакокинетических и токсикологических
свойств соединения К-170(1) по показателям ADMET …………………………………………………….. 144
Заключение ……………………………………………………………………………………………………………………. 146
Глава 5. Обсуждение результатов ………………………………………………………………………………………. 147
Заключение ……………………………………………………………………………………………………………………….. 159
ВЫВОДЫ ………………………………………………………………………………………………………………………….. 161
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ……………………………………………………………………………….. 163
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ………………………………………….. 164
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ …………………………………………………………………………………………………… 165

В первой главе показана проблематика вопроса фармакотерапии и развития
сахарного диабета 2 типа. Описаны основные характерные для 2-оксиндольного
скаффолда фармакологические свойства. Выявлено вероятное влияние изучаемых
производных на активность киназы гликогенсинтазы типа 3 бета и альфа-глюкозидазу.
Для данных ферментов систематизированы основные функции в организме человека и
эффекты, вызываемые их ингибиторами.
Во второй главе диссертации описаны материалы и методы работы. Изучено 27
новых производных под лабораторными шифрами «K» и «OIP», 20 из которых
относится к производным 3-арилиден-2-оксиндола, 7 соединений – к производным 3,3-
дизамещённых-2-оксиндолов*.
3-арилиден-2-оксиндолы3,3-дизамещённые-2-оксиндолы

Описан in vitro поиск ингибиторов киназы гликогенсинтазы типа 3 в методиках
изучения влияния на активность человеческого рекомбинантного фермента и синтез
оксида азота перитонеальными макрофагами мышей под влиянием липополисахарида, а
также поиск ингибиторов альфа-глюкозидазы в методике изучения влияния на
активность альфа-гюкозидазы S. cerevisiae. Определена зависимость активности
изучаемых соединений от химической структуры. Для выявленных соединений-лидеров
построены модели связывания с ферментами, определены активные центры и ключевые
аминокислоты, а также определена их цитотоксичность на первичных клеточных линиях
животных в МТТ- и ЛДГ-тестах, оценено лекарственное подобие, основные
фармакокинетические и токсикологические свойства in silico.
Для соединений, ингибирующих активность GSK3B, изучена их
антидиабетическая активность в методиках определения влияния на утилизацию
глюкозы фибробластами крыс, на уровень постпрандиальной гипергликемии в
пероральном тесте толерантности к глюкозе при однократном введении и на показатели
углеводного обмена, воспалительный статус и поведенческую активность животных с
моделированным сахарным диабетом 2 типа; противовоспалительная активность в
методиках изучения влияния на липополисахаридиндуцированный отек задней лапы
крыс,активацию,фагоцитарнуюактивностьизимозанопосредованную
хемилюминисценцию перитонеальных макрофагов; антиагрегантная активность in vitro
с использованием АДФ и коллагена в качестве индукторов агрегации тромбоцитов;
антитромботическая активность в методике изучения влияния соединений на время
окклюзии сонной артерии индуцированного аппликацией 50%-го раствора хлорида
железа (III) интактным крысам.

*
Выражаем глубокую признательность сотруднику кафедры медицинской химии
и тонкого органического синтеза Московского государственного университета имени М.
В. Ломоносова (МГУ) доценту, канд. хим. наук Н. А. Лозинской за синтез и
предоставление субстанций веществ для данной работы.
Соединение, ингибирующее альфа-глюкозидазу, изучено на наличиее
антигипергликемической активности в пероральном тесте толерантности к дисахаридам
(млаьтоза, сахароза) и моносахаридам (глюкоза) на интактных крысах.
В третьей главе приведены результаты in vitro исследования влияния 16 новых
производных 2-оксиндола на активность киназы гликогенсинтазы типа 3 бета человека.
Выявлено одно производное (К-167), оказывающее большее ингибирующее GSK3B
действие в конечной концентрации 10 мкМ, чем вещество сравнения SB-21673; 4
соединения проявили активность выше 50% (К-165, К-167, К-248, OIP-NO2-2). Вещество
К-167 (IC50 4,2 нМ) в два раза превосходит по активности вещество сравнения (IC50 8,4
нМ).
% ингибирования GSK3B

100SB-216763
IC508,4 нМ
80Соединение K-167
IC504,2 нМ
Соединение K-165
40IC50 155,4 нМ

20Соединение K-248
IC50 4343,0 нМ
-11-10-9-8-7-6-5-4-3 C, lg(M)

Рисунок 1. Влияние соединений K-167, K-165, K-248 и SB-216763 в зависимости от
концентрации на активность GSK3B

В предварительно проведенных исследованиях по изучению влияния на
липополисахаридиндуцированный синтез оксида азота перитонеальными макрофагами
мышей выявлено соединение К-248, оказывающее наибольший противовоспалительный
эффект в ряду исследованных производных 2-оксиндола (IC50 8,78 мкМ).
Липополисахарид является специфическим активатором Tlr4 рецепторов. GSK3B
задействована как в Myd88-зависимом (Tlr4/Myd88/IRAK/TRAF6/TAK1/…/GSK3B), так
и в Myd88-независимом (Tlr4/TRIF/TRAF3/…/GSK3B) сигнальном каскаде (Beurel, Jope,
2009), в связи с чем данная методика может быть использована для поиска ингибиторов
GSK3B, способных проникать внутрь клеток.
Проведен анализ зависимости ингибирующей активности от структуры новых
производных 2-оксиндола. Выявлено, что производные 3-арилиден-2-оксиндола
оказались более перспективными и активными в сравнении с 3,3-дизамещенными-2-
оксиндолами. Возможным объяснением служит наличие ароматического радикала в
положении С3 у производных 3-арилиден-2-оксиндола, в связи с чем образуется
расширенная система π-π сопряжения, электронные системы находятся в одной
плоскости, образуя плоский σ-скелет. При анализе заместителей в положении С3 (R1)
показано, что наличие шестичленного ароматического цикла с гетероатомом в орто-
положении или гидроксильной группой в пара-положении повышало ингибирующую
GSK3B активность.
Вещества К-167 и К-248 были выбраны для углубленного изучения
фармакологических свойств.
Соединение К-167. Проведено in silico исследование механизма действия
вещества, обнаружено, что взаимодействие происходит в АТФ-связывающем сайте
фермента. По данным (An и др., 2010) установлено, что такое же взаимодействие
характерно для вещества сравнения. Выявлены ключевые аминокислоты,
обуславливающие взаимодействие изучаемого соединения, и вещества сравнения с
активным центром фермента: VAL70, ALA83, CYS199 и LEU188.

Рисунок2. Межмолекулярные
взаимодействия соединения К-167
и АТФ-связывающего центра GSK3B

Исследована цитотоксичность, на перитонеальных макрофагах мышей
производное К-167 не вызывало гибель клеток вплоть до конечной концентрации 7
мкМ, при этом в концентрации 50 мкМ наблюдалась значительная токсичность; в
концентрации 20 мкМ у линии неонатальных фибробластов сердца крыс
цитотоксический эффект отсутствовал.
Вещество К-167 улучшает захват глюкозы из среды неонатальными
фибробластами сердца крыс на 237,80 ± 27,82%. Выявленное влияние на захват глюкозы
быстро пролиферирующими клетками подтверждает предположение о наличии
антидиабетического действия.
Активность в наномолярном диапазоне концентраций при цитотоксичности в
микромолярном диапазоне позволяет сделать вывод о широком терапевтическом
индексе вещества.
под кривой “Глюкоза-Время”
% Снижения площади

30Рисунок 3. Влияние соединения K-167
(10, 20 и 30 мг/кг) и вилдаглиптина (10
мг/кг) на площадь под кривой «Глюкоза
10– Время» при пероральной нагрузке
глюкозой (2 г/кг) у животных с
моделированным сахарным диабетом
г)

г)

г)
н
ти

(M ± m)
мг

мг

мг
п
ли
аг

(1

(2

(3
лд
16
Ви

K-

K-

K-
ие

ие

ие
н

н

н
не

не

не
ди

ди

ди
ое

ое

ое
С

С

С
Изучено влияние вещества К-167 на уровень постпрандиальной гипергликемии в
пероральном тесте толерантности к глюкозе при однократном введении крысам с
моделированным СД2. Данное производное испытывалось в 3 дозах: 10, 20 и 30 мг/кг.
Показано, что доза 30 мг/кг по эффективности (ΔAUC 29,30 ± 3,88%, p<0,001) соответствует препарату сравнения вилдаглиптину в дозе 10 мг/кг (ΔAUC 26,60 ± 3,20%, p<0,001). Она была выбрана для проведения дальнейших исследований как наиболее эффективная. Изучено влияние соединения при курсовом пероральном введении в течение 90 дней мышам линии c57bl6j с развитым СД2. В качестве препарата сравнения использовался метформин (100 мг/кг). Выявлено, что соединение К-167 оказывает выраженную антидиабетическую активность, начиная с первого дня курсового введения. Данный эффект сохранялся в течение всех трех месяцев введения и был сопоставим с препаратом сравнения. Производное К-167 улучшает гликемический контроль у животных, что подтверждается снижением уровня глюкозы плазмы крови натощак во всех исследованных временных точках на 19,3%, 10,3% и 20,4% (p<0,001) относительно группы ВЖД. Вещество К-167 снижает уровень глюкозы (на 29,1%, p<0,05) и инсулина (на 78,3%, p<0,0001) плазмы крови относительно группы ВЖД, благодаря чему не было выявлено признаков инсулинорезистентности у опытной группы животных (снижение индекса инсулинорезистентности на 71,2%, p<0,001). АБВ 1050001.0 ### 84000 ### 0.8 Глюкоза, мМ HOMA-IR, у.е. Инсулин, пкг * 6* *30000.6 ** 20000.4 *** 2********* 1000****0.2 ен00.0 Д)67 тн ыЖми1 орK-еД)н е н Д) во(В67 ыми ми ы е Ж тн афЖ1 тн жиететниорK- K- ор (В (В во во единее ф М ие таф а и жи ныдиетни ет ет ая +ж н те Дне не оеди М е ди ак е вМ ы роВЖы ди ди нт + С тн + ая тн ая жи Д Дое ое + Иак ак ов в ВЖ Д коВЖ ро С нтС нт соВЖир и + И И+ ож ож Д ВыД ВЖ к к ВЖ со со Вы #1-way ANOVA к Интактным животным, посттест Данета Вы *1-way ANOVA к группе ВЖД, посттест Данета#1-way ANOVA к Интактным животным, посттест Данета #1-way ANOVA к Интактным животным, посттест Данета *1-way ANOVA к группе ВЖД, посттест Данета *1-way ANOVA к группе ВЖД, посттест Данета Рисунок 4. Влияние соединения K-167 (30 мг/кг) и метформина (100 мг/кг) на уровень глюкозы (А) и инсулина (Б) плазмы крови, а также рассчитанный показатель инсулинорезистентности HOMA-IR (В) животных с СД2 (M ± m) Соединение К-167 не влияет на вес животных, при этом в морфометрическом анализе жировой ткани показано снижение всех типов абдоминальных жировых отложений до уровня интактных животных (мезентериальных на 33,54%, эпидидимальных на 34,9% и ретроперитонеальных на 36,9% относительно группы ВЖД; p<0,01). Исследуемое вещество нормализовало уровень триглицеридов печени (снижение на 24,1% от группы ВЖД, p<0,05). Производное К-167 оказывало противовоспалительное действие, что выражалось в нормализации показателей лейкоцитарной формулы крови (снижение количества сегментоядерных нейтрофилов на 38% и повышение числа лимфоцитов на 21,5% от группы ВЖД, p<0,0001), а также уровней ранних медиаторов воспаления (ФНО-α на 39,4% и оксида азота на 59,3% относительно группы ВЖД, p<0,05); оказывало благоприятное влияние на антирадикальную систему организма: снижение уровня ТБК- активных продуктов печени (на 71% от группы ВЖД, p<0,05) и увеличение количества восстановленного глутатиона в 3,4 раза от группы ВЖД (p<0,01) и на 97% от группы интактных животных (p<0,05). от общего времени изучения объектов Уровень интереса к новому объекту, % вермени изучения нового объекта *** * # 40Рисунок 5. Влияние соединения K-167 (30 мг/кг) и метформина (100 мг/кг) на 20уровень интереса к новому объекту в тесте «Распознавание нового объекта» у 0животныхсСД2(M ± m) еД)н67 тн ыЖми1 во(ВорK- жи а ет фие етен едиМ ин тныаяД +д аковое нтирВЖ+ С ИжД ко соВЖ Вы #1-way ANOVA к Интактным животным, посттест Дана *1-way ANOVA группе ВЖД, посттест Дана Соединение К-167 препятствовало развитию поведенческих изменений под воздействием ВЖД, что показано по нормализации результатов тестов «Открытое поле» и «Распознавание нового объекта». Совокупность выявленных эффектов при курсовом введении соединения К-167 позволяет сделать вывод о наличии у него большого спектра плейотропных эффектов (антидиабетический, противовоспалительный, антиоксидантный, антирадикальный), позволяющих достоверно корректировать проявления моделированной патологии. Эффективность исследуемого производного сопоставима с препаратом сравнения метформином. На клеточной модели in vitro в биохимических исследованиях выявлено, что производное К-167 в наномолярных концентрациях предотвращает индуцированную липополисахаридом и неопсонизированным зимозаном (специфический лиганд Tlr3 рецепторов) активацию макрофагов. В морфологическом исследовании подтверждено наличие данной активности (коэффициент распластанности макрофагов: 0,310 ± 0,059, в концентрации 3 нМ, p<0,0001; группа контроля 2,290 ± 0,126). Обнаружено отсутствие влияния вещества на фагоцитарный ответ перитонеальных макрофагов в конечной концентрации 7 мкМ и перитонеальных нейтрофилов в концентрации 20 мкМ. Выявлено, что вещество К-167 препятствует выработке ИЛ-6 под воздействием липополисахарида (IC50 18,51 ± 14,80 мкМ). Отсутствие чрезмерной поляризации макрофагов и влияния на врожденный бактериальный ответ говорит о благоприятном иммунотропномдействиисоединения.Наживотныхвмодели липополисахаридиндуцированного отека задней лапы крыс (100 мкг/лапа) производное К-167 в дозе 30 мг/кг при пероральном введении оказало выраженную противовоспалительную активность. Выявлено достоверное снижение веществом К-167 объема отека задней лапы животных в течение 24 часов (ΔAUC 63,2% от группы ЛПС, p<0,05), достоверное снижение выработки ФНО-α (на 90,9% от группы ЛПС, p<0,05) и оксида азота (на 57,1% от группы ЛПС, p<0,01) в плазме крови. По результатам исследований подтверждено влияние соединения на сигнальный путь Toll-рецепторов, что может быть использовано для предотвращения прогрессирования подострого воспаления и инсулинорезистентности при СД2. 40**** сонной артерии, мин Время окклюзии Рисунок 6. Влияние соединения К-167 20и ацетилсалициловой кислоты на время окклюзиисоннойартерии, индуцированной аппликацией 50%-м 0растворомхлоридажелеза(III) ль/к г /к г /к гинтактнымживотным(M ± m) ромгмгмг о нт005030 К117 КК АСАС16 К- е ни не ди ое С 1-way ANOVA к группе Контроль, посттест Данета Для изучения антиагрегантной активности использовались две методики, различающиеся индукторами агрегации. В методике с использованием АДФ (5 мкМ) соединение проявило высокий уровень активности (IC50 21 мкМ соответственно) относительно препарата сравнения кислоты ацетилсалициловой (IC50 104 мкМ). При использовании в качестве индуктора агрегации коллагена (15 мкг/мл) вещество К-167 в 16 раз активнее препятствовало агрегации тромбоцитов (IC50 3,02 мкМ), чем ацетилсалициловая кислота (IC50 49,3 мкМ). Наличие антитромботической активности у производного К-167 определялось по влиянию на время окклюзии сонной артерии крыс, индуцированной аппликацией 50%-ы раствором хлорида железа (III). Исследуемое вещество вводилось перорально в дозе 30 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовалась кислота ацетилсалициловая в различных дозировках. Вещество К-167 пролонгировало время окклюзии сонной артерии на 78,5% (p<0,0001) от группы контроля. Соответствующий уровень активности для препарата сравнения (68,4%, p<0,0001) показан в дозе 150 мг/кг. Полученные результаты позволяют сделать вывод о возможности коррекции поздних осложнений СД2 исследуемым веществом, что окажет дополнительноепротекторноедействиенаорганизм. Проведенаоценкалекарственногоподобия,расчетосновных фармакокинетических и токсикологических свойств производного К-167. Выявлено, что исследуемое производное имеет благоприятный фармакокинетический профиль, относится к соединениям 4-го класса токсичности (малотоксичные). На основании прогнозирования возможно наличие гепато- и иммунотоксичности, а также мутагенности в тесте Эймса, что дает основания при планировании доклинического изучения вещества особое внимание уделить функциональной активности печени и мутагенным свойствам, а также определению порога доз, при которых проявляются данные эффекты. Изучаемое вещество К-167 при пероральном введении мышам не проявило признаков острой токсичности в дозе 2 г/кг, выживаемость животных через 2 недели после введения составила 100%, значимых изменений в весе животных не обнаружено. Полученные данные позволяют сделать вывод о его принадлежности к соединениям 5- го класса токсичности (нетоксичные). Соединение К-248. На первом этапе проведено in silico изучение механизма связывания производного с GSK3B. Сайт-связывания соответствует активному центру связывания препарата сравнения, описанного по данным (An и др., 2010). Выявлены ключевые аминокислоты, обуславливающие взаимодействие изучаемого соединения и вещества сравнения с активным центром фермента: VAL70, ALA83, CYS199 и LEU188. РисунокМежмолекулярные 7. взаимодействиясоединения К-248 и АТФ-связывающего центра GSK3B Соединения К-248 в конечной концентрации 7 мкМ не влияет, а в концентрации 50 мкМ оказывает цитотоксическое действие на линию перитонеальных макрофагов мышей. В концентрации 20 мкМ на линии неонатальных фибробластов сердца крыс гибель клеток отсутствовала. Производное К-248 в конечной концентрации 20 мкМ улучшает захват глюкозы неонатальными фибробластами сердца крыс на 272,8 ± 48,76%. Выявленное влияние на захват глюкозы быстро пролиферирующими клетками и наличие высокой противовоспалительной активности предполагают наличие антидиабетического действия у вещества. Изучаемое соединение ингибирует GSK3B, способно проникать внутрь клеток, а также не вызывает цитотоксичности вплоть до высоких микромолярных концентраций, в связи с чем взято для проведения углубленного изучения фармакологических свойств. АБВ 1050001.0 ### 84000 ### 0.8 Глюкоза, мМ HOMA-IR, у.е. Инсулин, пкг * 6** *30000.6 ** 20000.4 *** 2****** 1000***0.2 00.0 е ин Д) ы Ж м тн е ин Д) K- ор е ин Д) (В ы во ы Ж м ф тн Ж ие м тн а K- жи ор K- (В ет ор ет (В во н во не ф ие М ди е ф а ие жи а ы жи ет ет ди ет + ет н тн н ая не М ди Д е не ое М ди е ак в ы ВЖ ы ди + ро ди С тн + нт ая тн ая Д ое и + Д ак И ое в ВЖ ак ож в ВЖ Д ро С нт ро С ВЖ нт к и + со И и + И ож Д ож Вы Д ВЖ к ВЖ к со со #1-way ANOVA к Интактным животным, посттест Данета Вы Вы *1-way ANOVA к группе ВЖД, посттест Данета#1-way ANOVA к Интактным животным, посттест Данета #1-way ANOVA к Интактным животным, посттест Данета *1-way ANOVA к группе ВЖД, посттест Данета *1-way ANOVA к группе ВЖД, посттест Данета Рисунок 8. Влияние соединения K-248 (30 мг/кг) и метформина (100 мг/кг) на уровень глюкозы (А) и инсулина (Б) плазмы крови, а также рассчитанный показатель инсулинорезистентности HOMA-IR (В) животных с СД2 (M ± m) Изучено влияние соединения К-248 при курсовом пероральном введении в течение 90 дней в дозе 30 мг/кг мышам линии c57bl6j с развитым СД2. В качестве препарата сравнения использовался метформин (100 мг/кг). В отличие от производного 2-оксиндола К-167, вещество К-248 не оказало влияния на уровень постпрандиальной гипергликемии при первичном однократном введении вещества (ΔAUC 5,6%), однако значимо снижало его в тестах на 45-й и 90-й дни курсового введения (ΔAUC 21,6 и 14% соответственно, p<0,0001). Выявлено, что соединение К-248 значимо снижает уровень глюкозы плазмы крови натощак во всех исследованных временных точках на 24%, 7,8% и 12,5% (p<0,0001; 0,05; 0,001). Изучаемое производное снижает уровень глюкозы плазмы крови на -44,4% (p<0,05) и инсулина на 73,5% (p<0,001) от группы ВЖД, что позволило предотвратить развитие инсулинорезистентности (снижение индекса инсулинорезистентности на 51,6%, p<0,05). Вещество не влияет на массу животных, однако показано значимое снижение массывсехисследованныхтиповабдоминальныхжировыхотложений: мезентериальных на 34,3%, ретроперитониальных на 39,1% и эпидедимальных на 44,6% (p<0,001). Снижение массы ретроперитонеальных и эпидидимальных жировых отложений недостоверно превышало таковое при введении вещества К-167. Вещество К-248 снижает уровень триглицеридов печени на 15,1% (p<0,05). Соединение К-248 оказывало более выраженное противовоспалительное действие, чем производное К-167, что выражалось во влиянии на выработку ранних медиаторов воспаления (снижение уровня ФНО-α на 46,6% и оксида азота на 25,8% от группы ВЖД, p<0,05) и показатели лейкоцитарной формулы крови животных (снижение количества сегментоядерных нейтрофилов на 46,6% и повышение числа лимфоцитов на 25,8% от группы ВЖД, p<0,0001), что позволяет сделать вывод о предотвращении развития хронического подострого воспаления, характерного для патогенеза СД2. Также обнаружено снижение уровня ТБК-активных продуктов печени на 70,7% (p<0,05) от группы ВЖД, при отсутствии достоверного влияния на количество восстановленного глутатиона печени в отличие от соединения К-167. Производное К-248 на клеточной модели in vitro в конечной концентрации 3 нМ предотвращает индуцированную липополисахаридом и неопсонизированным зимозаном активацию макрофагов. В морфологическом исследовании подтверждено наличие данной активности (коэффициент распластанности макрофагов: 0,570 ± 0,086, p<0,0001). Выявлено отсутствие влияния производного К-248 на фагоцитарный ответ перитонеальных макрофагов в конечной концентрации 7 мкМ и перитонеальных нейтрофилов в концентрации 20 мкМ. Производное К-248 препятствует выработке ИЛ-6 под воздействием липополисахарида (IC50 17,60 ± 18,63 мкМ).Препятствование чрезмерной поляризации макрофагов, отсутствие влияния на врожденный бактериальный ответ подтверждают наличие благоприятного иммунотропного действия соединения. На животной модели липополисахаридиндуцированного отека задней лапы крыс (100 мкг/лапа) вещество К-248 в дозе 30 мг/кг при пероральном введении оказывало выраженную противовоспалительную активность. Изучаемое соединение предотвращало увеличение объема отека задней лапы животных в течение 24 часов (ΔAUC 77,4% от группы ЛПС, p<0,001) и достоверно снижало выработку ФНО-α (на 79,5% от группы ЛПС, p<0,05) и оксида азота (на 49,6% от группы ЛПС, p<0,01) в плазме крови. 0.25ЛПС 0.20IC50 8,78 мкМ OD550 0.15 ДМСО 0.10 0.010.11101001000 С, мкМ Рисунок 9. Влияние соединения К-248 на выработку оксида азота и ИЛ-6 40ЛПСперитонеальными макрофагами под воздействиемлипополисахарида. ИЛ-6, пкг/мл IC50 17.6018,63 мкМ ДМСО 0.010.11101001000 С, мкМ Изучено влияние соединения К-248 на процесс агрегации тромбоцитов с использованием индукторов агрегации раствора АДФ (5 мкМ) и раствора коллагена (15 мкг/мл). Вещество К-248 оказывает высокую антиагрегантную активность в обеих методиках (IC50 10 и 0,79 мкМ соответственно), превосходя препарат сравнения «Кислота ацетилсалициловая» по активности (IC50 104 и 49,3 мкМ) и производное К-167 в 2 раза. Оценено лекарственное подобие, расчет основных фармакокинетических и токсикологических свойств соединения. По результатам прогноза, производное К-248 имеет благоприятный фармакокинетический профиль, доступно перорально и проникает внутрь клеток. Рассчитано, что изучаемое вещество относится к 4-му классу токсичности (малотоксичные). На основании прогнозирования возможно наличие гепатотоксичности и мутагенности, что дает основания при планировании доклинического изучения соединения особое внимание уделить функциональной активности печени и мутагенным свойствам, а также определению порога доз, при которых проявляются данные эффекты. В результате проведенного исследования выявлены производные 3-арилиден-2- оксиндола К-167 и К-248, перорально доступные ингибиторы GSK3B. Соединение К- 167 оказывает выраженный антидиабетический эффект при однократном введении, влияет на многие звенья патогенеза СД2, в том числе корректирует хроническое подострое воспаление и может быть использовано для корректировки его осложнений (антиагрегантная и антитромботическая активности). Вещество К-248 имеет более выраженную противовоспалительную активность, за счет которой реализуется его антидиабетическая активность, при этом он в 2 раза активнее производного К-167 на in vitro моделях агрегации тромбоцитов. В четвертой главе приведены результаты In vitro изучения влияние 24 новых производных 2-оксиндола на активность альфа-глюкозидазы S.cerevisiae. Выявлено 6 производных (К-127, К-165, К-170(1), К-237, К-246, К-248), оказывающих большее ингибирующее влияние на альфа-глюкозидазу в конечной концентрации 100 мкМ, чем препарат сравнения «Акарбоза». Соединение К-170(1) (IC50 6,78 мкМ) превосходит препарат сравнения по активности (IC50 436,7 мкМ). % ингибирования -глюкозидазы Соединение K-170(1) 80IC50 6,78 мкМ Акарбоза IC50 436,70 мкМ -8-7-6-5-4-3-2 C, lg(M) Рисунок 10. Влияние соединения K-170(1) и акарбозы в зависимости от концентрации на активность α-глюкозидазы Анализ зависимости ингибирующей активности от структуры новых производных 2-оксиндола показал, что производные 3-арилиден-2-оксиндола оказались более перспективными и активными в сравнении с 3,3-дизамещенными-2-оксиндолами. При анализе заместителей в положении С3 (R1) выявлено, что гетероциклические радикалы снижали, а карбоциклические радикалы с заместителем в пара-положении увеличивали ингибирующую альфа-глюкозидазу активность. Наличие амидной группировки в положении С5 (R2 для 3-арил-2-оксиндолов и в положении R3 для 3,3-дизамещенных-2- оксиндолов) увеличивало активность соединений. Соединение К-170(1) взаимодействует с альфа-глюкозидазой в отличном от акарбозы центре связывания, что выявлено методом молекулярного докинга in silico. Для соединения К-170(1) выявлены ключевые аминокислоты, описывающие его связывание с аллостерическим центром фермента: ASP649, ARG653, GLU767, ARG643, PRO676, LYS765, GLU767. Рисунок 11. Расположение сайтов связывания акарбозы и соединения К-170(1) с α- глюкозидазой. Производное К-170(1) в конечной концентрации 20 мкМ не вызывает гибель перитонеальных макрофагов мышей и неонатальных фибробластов крыс. Рисунок 9. Влияние соединения K-170(1) и акарбозы на уровень глюкозы плазмы крови при пероральной нагрузке мальтозой (А) и на площадь под кривой «Глюкоза – Время» (Б) (M ± m) В методике перорального теста толерантности к дисахаридам (мальтоза и сахароза) производное 2-оксиндола К-170(1) вводилось перорально в дозе 5 мг/кг, в качестве препарата сравнения использовалась акарбоза (5 мг/кг, перорально). Соединение оказывает значимый антигипергликемический эффект (ΔAUC: мальтоза 42,1%; сахароза 28,8%; p<0,001), сопоставимый с препаратом сравнения (ΔAUC: мальтоза 37,2%; сахароза 17,9%; p<0,001). При использовании мальтозной углеводной нагрузки отмечается более выраженный эффект вещества, чем при использовании сахарозы, что может быть связано с большим влиянием исследуемого соединения на мальтазу, чем на сахаразу. Вещество К-170(1) не вызывало гипогликемического эффекта в обоих тестах. Производное К-170(1) не оказало достоверного влияния на уровень постпрандиальной гипергликемии (ΔAUC 12,3%) в пероральном тесте толерантности к глюкозе. Согласно полученным результатам, можно сделать вывод, что вещество К- 170(1) оказывает выраженную антигипергликемическую активность в тестах с дисахаридами, что объясняется его механизмом действия. Оценено лекарственное подобие и рассчитаны основные фармакокинетических и токсикологических свойства исследуемого соединения в сравнении с применяемым в клинической практике препаратом «Акарбозой» – ингибитором альфа-глюкозидазы. По результатам прогноза можно сделать вывод, что вещество К-170(1) имеет схожий показатель лекарственного подобия с препаратом сравнения, но в отличие от акарбозы способно хорошо абсорбироваться в ЖКТ, что относит вещество К-170(1) к классу всасываемых ингибиторов α-глюкозидазы. Для данного класса отмечается меньшая частота возникновения характерных для ингибиторов альфа-глюкозидазы побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта (Kawamori и др., 2009). На основании прогнозирования возможно наличие гепатотоксичности и мутагенности в тесте Эймса, что дает основания при планировании доклинического изучения соединения особое внимание уделить функциональной активности печени и мутагенным свойствам, а также определению порога доз, при которых проявляются данные эффекты. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Согласно результатам исследования, производные 3-арил-2-оксиндола обладают рядом фармакологически изученных эффектов: ингибирование киназы гликогенсинтазы типа 3 бета или альфа-глюкозидазы, влияние на выделение провоспалительных цитокиновприактивациимакрофаговлипополисахаридом,атакже противовоспалительной активностью. Выявлены новые ингибиторы киназы гликогенсинтазы типа 3 бета (GSK3B) и альфа-глюкозидазы в ряду производных 2-оксиндола. При поиске производных, влияющих на активность GSK3B, из изученных 16 новых производных 2-оксиндола показано 4 соединения с активностью более 50% и одно превосходящее вещество сравнения. Установлено, что уровень ингибирующей GSK3B активности увеличивался при наличии 3-арилиден-2-оксиндольного скаффолда и шестичленного ароматического цикла с гетероатомом в орто-положении или гидроксильной группой в пара-положении у С3 (R1). По результатам проведенного изучения цитотоксичности, влияния на захват глюкозы быстропролиферирующими клетками, механизма взаимодействия соединений с ферментом и исследованных ранее противовоспалительных свойств, выявлены вещества К-167 и К-248 для проведения углубленного фармакологического изучения. Соединение К-167 – наномолярный ингибитор GSK3B, по активности превосходящий вещество сравнения в 2 раза. На животных с моделированным СД2 вещество при однократном пероральном введении в дозе 30 мг/кг оказывает выраженный антидиабетический эффект. Данная дозировка выбрана для проведения углубленного изучения активности при курсовом введении. Соединение проявляет выраженный антидиабетический эффект с первого дня курсового введения; корректирует уровни глюкозы, инсулина, массу жировых отложений, триглицеридов, ранних медиаторов воспаления, показатели лейкоцитарной формулы крови и поведенческую активность животных. В концентрации 3 нМ исследуемое вещество предотвращает индуцированную липополисахаридом активацию макрофагов, при отсутствии влияния на фагоцитарную активность в концентрации 20 мкМ. В дозе 30 мг/кг соединение К-167 снижет объем индуцированного липополисахаридом отека задней лапы крыс, выработку ФНО-α и оксида азота. Производное 2-оксиндола К-167 подавляет индуцированную АДФ и коллагеном агрегацию тромбоцитов in vitro, при этом in vivo в дозе 30 мг/кг пролонгирует время окклюзии сонной артерии, индуцированной аппликацией 50%-го раствора хлорида железа (III), что может быть использовано для предотвращения осложнений СД2. На основании теста острой токсичности относится к нетоксичным. Соединение К-248 ингибирует GSK3B в микромолярных концентрациях, оказывает выраженную противовоспалительную активность, улучшает захват глюкозы неонатальными фибробластами сердца. При курсовом пероральном введении (30 мг/кг) вешество проявляет увеличивающийся со временем антидиабетический эффект, что может быть связано с высоким уровнем противовоспалительной активности; недостоверно превосходит соединение К-167 по влиянию на показатели, характеризующие развивающееся хроническое подострое воспаление (уровень ФНО-α и лейкоцитарную формулу крови); снижает уровень глюкозы, инсулина, триглицеридов, массу висцеральных жировых отложений и нормализует поведенческую активность животных на уровне вещества К-167. В конечной концентрации 3 нМ вещество К-248 препятствует индуцированной липополисахаридом активации макрофагов, при отсутствии влияния на фагоцитарную активность в концентрации 20 мкМ. При однократном пероральном введении (30 мг/кг) производное 2-оксиндола К-248 предотвращает увеличение объема, индуцированного липополисахаридом отека задней лапы крыс (ΔAUC 77,4%), снижает выработку ФНО-α и оксида азота. Производное К- 248 в 2 раза превосходит соединение К-167 по уровню антиагрегантной активности на изученных моделях агрегации тромбоцитов. При поиске соединений, влияющих на активность альфа-глюкозидазы, из изученных 24 новых производных 2-оксиндола выявлено 6 производных, превосходящих препарат сравнения по активности. Установлено, что уровень, ингибирующий альфа-глюкозидазу, повышается при наличии 3-арилиден-2- оксиндольного скаффолда, карбоциклических радикалов с заместителем в пара- положении и амидной группировкой в положении С5 (R2 для 3-арил-2-оксиндолов и в положении R3 для 3,3-дизамещенных-2-оксиндолов), а гетероциклические радикалы в положении С3 (R1) снижают активность. По результатам проведенного изучения цитотоксичности и механизма взаимодействия соединений с ферментом, выявлено соединение-лидер К-170(1) для проведения углубленного фармакологического изучения. Соединение К-170(1) – микромолярный ингибитор альфа-глюкозидазы (IC50 6,78 мкМ). При однократном пероральном введении (5 мг/кг) вещество оказывает выраженную антигипергликемическую активность в тесте толерантности к дисахаридам, сопоставимую с препаратом сравнения. Производное К-170(1) не активно в тесте с глюкозой, что подтверждает выявленный механизм действия. При оценке основных токсикологических, фармакокинетических и фармакодинамических показателей in silico показан хороший фармакокинетический профиль применения пероральных форм введения соединения, что относит его к классу всасываемых ингибиторов альфа-глюкозидазы, обладающих меньшей частотой возникновения побочных эффектов. ВЫВОДЫ 1.Новые производные 3-арилиден-2-оксиндола ингибируют киназу гликогенсинтазы типа 3 бета (GSK3B) и альфа-глюкозидазу. Из изученных 16 новых производных 2-оксиндола в концентрации 10 мкМ выявлено 4 производных с ингибирующей GSK3B активностью более 50% и одно соединение, превосходящее вещество сравнения SB-21673. На наличие ингибирующей альфа-глюкозидазу активности изучено 24 производных 2-оксиндола в концентрации 100 мкМ, выявлено 6 веществ, превосходящих препарат сравнения акарбозу. 2.Соединения, содержащие 3-арилиден-2-оксиндольный скаффолд, были более активными в сравнении с 3,3-дизамещенным-2-оксиндольным скаффолдом при поиске ингибиторов GSK3B. Шестичленный ароматический цикл с гетероатомом в орто-положении или гидроксильной группой в пара-положении у С3 (R1) увеличивал активность веществ. 3.Производные 3-арилиден-2-оксиндола – более активные ингибиторы альфа-глюкозидазывсравнениис3,3-дизамещенным-2-оксиндолами. Гетероциклические радикалы в положении С3 (R1) снижали, а карбоциклические радикалы с заместителем в пара-положении увеличивали ингибирующую альфа- глюкозидазу активность. Амидная группировка в положении С5 (R2 для 3-арил-2- оксиндолов и в положении R3 для 3,3-дизамещенных-2-оксиндолов) увеличивала активность соединений. 4.Соединение К-167 является ингибитором GSK3B (IC50 4,2 ± 0,7 нМ), по уровню активности превосходит вещество сравнения SB-216763 в 2 раза (IC50 8,4 ± 2,0 нМ). Вещество улучшает захват глюкозы неонатальными фибробластами сердца крыс в конечной концентрации 20 мкМ; при однократном пероральном введении (30 мг/кг) эквивалентно по эффективности препарату сравнения вилдаглиптину (10 мг/кг); при курсовом пероральном введении (30 мг/кг) оказывает выраженное антидиабетическое действие, начиная с первого дня введения; снижает уровни глюкозы, инсулина, триглицеридов, ранних медиаторов воспаления (ФНО-α и оксида азота), а также массу висцеральных жировых отложений; нормализует показатели лейкоцитарной формулы крови, а также поведенческую активность животных. 5.Вещество К-167 предотвращает индуцированную липополисахоридом активацию макрофагов в концентрации 3 нМ; не влияет на фагоцитарную активность до конечной концентрации 20 мкМ. При однократном пероральном введении (30 мг/кг) снижает объем индуцированного липополисахоридом отека задней лапы в течение 24 ч, выработку ФНО-α и оксида азота в плазме крови. 6.Производное 2-оксиндола К-167 подавляет индуцированную АДФ (5 мкМ) и коллагеном (15 мкг/мл) агрегацию тромбоцитов (IC50 21 и 3,02 мкМ); при пероральном введении (30 мг/кг) пролонгирует время окклюзии сонной артерии (78,51 ± 19,48%), индуцированной аппликацией 50%-го раствора хлорида железа (III). 7.Соединение К-248 ингибирует GSK3B (4,34 ± 0,21 мкМ) и оказывает выраженнуюпротивовоспалительнуюактивностьнамодели липополисахаридиндуцированной активации перитонеальных макрофагов; улучшает захват глюкозы из среды неонатальными фибробластами сердца в конечной концентрации 20 мкМ. Изучаемое производное при курсовом пероральном введении (30 мг/кг) оказывает увеличивающийся со временем антидиабетический эффект, что может быть связано с высоким уровнем противовоспалительной активности. Соединение К-248 недостоверно превосходит производное К-167 по влиянию на показатели, характеризующие развивающееся хроническое подострое воспаление (уровень ФНО-α и лейкоцитарную формулы крови); при этом снижая уровень глюкозы, инсулина, триглицеридов, массу висцеральных жировых отложений и нормализуя поведенческую активность животных на уровне соединения К-167. 8.Производное 2-оксиндола К-248 в концентрации 3 нМ препятствует индуцированной липополисахаридом активации макрофагов, не влияет на фагоцитарную активность до конечной концентрации 20 мкМ; при однократном пероральном введении (30 мг/кг) препятствует увеличению объема, индуцированного липополисахаридом отека задней лапы в течение 24 ч, снижает выработку ФНО-α и оксида азота. 9.Вещество К-248 в 2 раза превосходит соединение К-167 по уровню антиагрегантной активности на моделях агрегации тромбоцитов, индуцируемых АДФ (5 мкМ) и коллагеном (15 мкг/мл) (IC50 10 и 0,79 мкМ). 10.Производное К-170(1) ингибирует альфа-глюкозидазу (IC50 6,78 мкМ). Установлена антигипергликемическая активность (5 мг/кг), сопоставимая с препаратом сравнения «Акарбозой» (5 мг/кг). 11.Изученные соединения К-167, К-170(1) и К-248 не вызывали гибели неонатальных фибробластов сердца крыс в конечной концентрации 20 мкМ и первичных перитонеальных макрофагов мышей в конечной концентрации 7 мкМ. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1.3-арилиден-2-оксиндол является перспективным скаффолдом для поиска соединений, влияющих на активность киназы гликогенсинтазы типа 3 бета, альфа- глюкозидазы. 2.Новые производные 2-оксиндола, вещества К-167 и К-248, подавляют индуцированный липополисахаридом синтез оксида азота и интерлейкина-6. 3.Необходимо проведение расширенных доклинических исследований ингибиторов GSK3B производных К-167 и К-248, а также ингибитора альфа- глюкозидазы соединения К-170(1).

Актуальность темы исследования
Сахарный диабет 2-го типа (СД2) является глобальной медико-социальной проблемой
21-го века, имея темпы роста распространённости, соизмеримые с масштабами мировой
пандемии. По данным мировой ассоциации диабета, на 2019 год около 463 миллионов человек
подвержено данному заболеванию (1 из 11 от населения Земли) [Cho и др., 2019]. При этом
половина из них имеют недиагностированный или скрытый СД2. Заболевание характеризуется
прогрессивным течением инсулинорезистентности [Tkachuk, Vorotnikov, 2014] и развитием
ряда острых (диабетический кетоацидоз, гиперосмолярная кома, гипогликемия [Дедов и др.,
2020]) и поздних осложнений (атеросклероз, инфаркт миокарда и инсульт, ретинопатия,
нефропатия, сенсорная нейропатия, оппортунистические инфекции [Shestakova и др., 2020]),
зачастую приводя к временной потере трудоспособности, инвалидизации и ранней смерти, в
первую очередь из-за высокого сердечно-сосудистого риска [Петров В. И., Спасов А. А.,
Чепляева Н. И., 2016]. При этом большое разнообразие разработанных классов
противодиабетических препаратов, к сожалению, не обеспечивает все необходимые
потребности [Аметов А. С., 2020]: наличие большого количества побочных эффектов,
недостаточная корректировка постпрандиальной гипергликемии, отсутствие влияния на
поздние осложнения сахарного диабета или развивающееся вялотекущее хроническое
воспаление [Cheng, Fantus, 2005]. В связи с этим большое значение имеет разработка новых
классов противодиабетических средств [Середенин С. Б., Островская Р. У., Воронина Т. А. и
др., 2016; Тюренков И. Н. и др., 2020] согласно подходам медицинской химии [Зефирова О. Н.,
Зефиров Н. С., 2000].
2-оксиндольный скаффолд является высокоактивным для поиска новых соединений,
проявляющих антидиабетические [Khan и др., 2014], противовоспалительные и иммунотропные
[Rudrangi и др., 2011], антиоксидантные [Kaminska и др., 2016] и противоопухолевые
[Lozinskaya и др., 2019] свойства.
Перспективными направлениями поиска новых антидиабетических средств среди
изучаемых производных 2-оксиндола являются ингибирование киназы гликогенсинтазы типа 3
бета- и альфа-глюкозидазы, а также изучение противовоспалительных и иммунотропных
свойств.
Киназа гликогенсинтазы типа 3-бета (GSK3B) – фермент класса серин/треониновых
протеинкиназ, участвующий во множестве внутриклеточных процессов [Meijer, Flajolet,
Greengard, 2004]. Для соединений, ингибирующих ее активность, показано большое количество
фармакологических эффектов: антидиабетический, противовоспалительный, иммунотропный,
антиоксидантый, антитромботический и антиагрегантный [Liu, Yao, 2016]. Выявленные
эффекты позволяют сделать вывод, что данный класс средств является перспективным для
разработки новых антидиабетических средств. При этом наличие большого спектра
плейотропных активностей показывает их эффективность при отдаленных осложнениях СД2.
Большую роль в патогенезе СД2 играют не только нарушения углеводного и жирового обменов,
но и каскад реакций, связанный с иммуновоспалительным процессом, в который вовлечен
сигнальный каскад Nf-kB [Zyuz’kov G. N., Zdanov V. V. и др., 2015]. Учитывая, что для
производных 2-оксиндола характерно наличие противовоспалительных свойств [Rudrangi и др.,
2011], данный аспект является важным при изучении новых соединений, проявляющих
антидиабетогенные свойства.
Ингибиторы альфа-глюкозидазы – применяемый в настоящее время класс
противодиабетических препаратов, имеющий широкий спектр антидиабетических эффектов,
влияющий на развивающиеся осложнения СД2, при отсутствии риска гипергликемии [Furman,
2007; Ghani, 2015]. Однако ограничением его применения служит большая частота побочных
эффектов, возникающих при этом [Dabhi, Bhatt, Shah, 2013], что показывает важность поиска
новых препаратов с обозначенной активностью.
В связи с этим перспективным направлением является разработка новых
противодиабетических препаратов, влияющих как на звенья патогенеза заболевания, так и на
возникающие осложнения.

Заказать новую

Лучшие эксперты сервиса ждут твоего задания

от 5 000 ₽

Не подошла эта работа?
Закажи новую работу, сделанную по твоим требованиям

    Нажимая на кнопку, я соглашаюсь на обработку персональных данных и с правилами пользования Платформой

    Читать

    Читать «Фармакологические свойства новых производных 2-оксиндола»

    Публикации автора в научных журналах

    Новые ингибиторы α-глюкозидазыфенилхроменового ряда
    Материалы Всероссийской научной конференции молодыхученых, посвященной 95-летию со дня рождения профессора А.А. Никулина"Достижения современной фармакологической науки – 2– С. 59
    База данных референсных лигандов сигнальных белков AGE-рецепторов
    Материалы 76-й международной научно-практической конференциимолодых ученых и студентов
    Оценка антигипергликемической и противовоспалительной активности нового ингибитора GSK3B
    XXIV Региональная конференция молодыхученых и исследователей Волгоградской области: Материалы докладов– 2–С.99-101

    Помогаем с подготовкой сопроводительных документов

    Совместно разработаем индивидуальный план и выберем тему работы Подробнее
    Помощь в подготовке к кандидатскому экзамену и допуске к нему Подробнее
    Поможем в написании научных статей для публикации в журналах ВАК Подробнее
    Структурируем работу и напишем автореферат Подробнее

    Хочешь уникальную работу?

    Больше 3 000 экспертов уже готовы начать работу над твоим проектом!

    Сергей Н.
    4.8 (40 отзывов)
    Практический стаж работы в финансово - банковской сфере составил более 30 лет. За последние 13 лет, мной написано 7 диссертаций и более 450 дипломных работ и научных с... Читать все
    Практический стаж работы в финансово - банковской сфере составил более 30 лет. За последние 13 лет, мной написано 7 диссертаций и более 450 дипломных работ и научных статей в области экономики.
    #Кандидатские #Магистерские
    56 Выполненных работ
    Дарья С. Томский государственный университет 2010, Юридический, в...
    4.8 (13 отзывов)
    Практикую гражданское, семейное право. Преподаю указанные дисциплины в ВУЗе. Выполняла работы на заказ в течение двух лет. Обучалась в аспирантуре, подготовила диссерт... Читать все
    Практикую гражданское, семейное право. Преподаю указанные дисциплины в ВУЗе. Выполняла работы на заказ в течение двух лет. Обучалась в аспирантуре, подготовила диссертационное исследование, которое сейчас находится на рассмотрении в совете.
    #Кандидатские #Магистерские
    18 Выполненных работ
    Рима С.
    5 (18 отзывов)
    Берусь за решение юридических задач, за написание серьезных научных статей, магистерских диссертаций и дипломных работ. Окончила Кемеровский государственный универси... Читать все
    Берусь за решение юридических задач, за написание серьезных научных статей, магистерских диссертаций и дипломных работ. Окончила Кемеровский государственный университет, являюсь бакалавром, магистром юриспруденции (с отличием)
    #Кандидатские #Магистерские
    38 Выполненных работ
    Екатерина П. студент
    5 (18 отзывов)
    Работы пишу исключительно сама на основании действующих нормативных правовых актов, монографий, канд. и докт. диссертаций, авторефератов, научных статей. Дополнительно... Читать все
    Работы пишу исключительно сама на основании действующих нормативных правовых актов, монографий, канд. и докт. диссертаций, авторефератов, научных статей. Дополнительно занимаюсь английским языком, уровень владения - Upper-Intermediate.
    #Кандидатские #Магистерские
    39 Выполненных работ
    Виктор В. Смоленская государственная медицинская академия 1997, Леч...
    4.7 (46 отзывов)
    Имеют опыт грамотного написания диссертационных работ по медицине, а также отдельных ее частей (литературный обзор, цели и задачи исследования, материалы и методы, выв... Читать все
    Имеют опыт грамотного написания диссертационных работ по медицине, а также отдельных ее частей (литературный обзор, цели и задачи исследования, материалы и методы, выводы).Пишу статьи в РИНЦ, ВАК.Оформление патентов от идеи до регистрации.
    #Кандидатские #Магистерские
    100 Выполненных работ
    Лидия К.
    4.5 (330 отзывов)
    Образование высшее (2009 год) педагог-психолог (УрГПУ). В 2013 году получено образование магистр психологии. Опыт преподавательской деятельности в области психологии ... Читать все
    Образование высшее (2009 год) педагог-психолог (УрГПУ). В 2013 году получено образование магистр психологии. Опыт преподавательской деятельности в области психологии и педагогики. Написание диссертаций, ВКР, курсовых и иных видов работ.
    #Кандидатские #Магистерские
    592 Выполненных работы
    user1250010 Омский государственный университет, 2010, преподаватель,...
    4 (15 отзывов)
    Пишу качественные выпускные квалификационные работы и магистерские диссертации. Опыт написания работ - более восьми лет. Всегда на связи.
    Пишу качественные выпускные квалификационные работы и магистерские диссертации. Опыт написания работ - более восьми лет. Всегда на связи.
    #Кандидатские #Магистерские
    21 Выполненная работа
    Дмитрий К. преподаватель, кандидат наук
    5 (1241 отзыв)
    Окончил КазГУ с красным дипломом в 1985 г., после окончания работал в Институте Ядерной Физики, защитил кандидатскую диссертацию в 1991 г. Работы для студентов выполня... Читать все
    Окончил КазГУ с красным дипломом в 1985 г., после окончания работал в Институте Ядерной Физики, защитил кандидатскую диссертацию в 1991 г. Работы для студентов выполняю уже 30 лет.
    #Кандидатские #Магистерские
    2271 Выполненная работа
    Катерина М. кандидат наук, доцент
    4.9 (522 отзыва)
    Кандидат технических наук. Специализируюсь на выполнении работ по метрологии и стандартизации
    Кандидат технических наук. Специализируюсь на выполнении работ по метрологии и стандартизации
    #Кандидатские #Магистерские
    836 Выполненных работ

    Последние выполненные заказы

    Другие учебные работы по предмету

    Рациональная фармакологическая коррекция синдрома диабетической стопы
    📅 2021 год
    🏢 ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
    Экспериментальное изучение эмоциогенных эффектов пептидов группы кисспептина
    📅 2022 год
    🏢 ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации
    Фармакоэпидемиологический и фармакоэкономический анализ выбора антимикробных препаратов для амбулаторного лечения пациентов с внебольничной бактериальной пневмонией
    📅 2022 год
    🏢 ФГБОУ ВО «Московский государственный медико-стоматологический университет имени А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации