Иммуногенные свойства иммунокомплексной вакцины против инфекционной бурсальной болезни

Исследование проводили в период с 2018 по 2021 годы на кафедре
эпизоотологии им. В.П. Урбана федерального государственного бюджетного
образовательного учреждения высшего образования «Санкт-Петербургский
государственный университет ветеринарной медицины» (ФГБОУ ВО
СПбГУВМ) Министерства сельского хозяйства Российской Федерации. Тема
диссертационной работы являлась составной частью научно-исследовательской
работы по гранту, предоставляемому Советом по грантам Президента
Российской Федерации №МД-2579.2021.5 «Изучение экспрессии генов
иммунитета сельскохозяйственной птицы при вакцинации иммунокомплексной
вакциной против инфекционной бурсальной болезни».
В работе использованы следующие методы исследований: клинический,
патологоанатомический, серологический, вирусологический, молекулярно-
генетический, биоинформационный и статистический.
Материалом для лабораторных исследований служили образцы сыворотки
крови птиц, а также ткани фабрициевой сумки и слепых отростков кишечника.
Лабораторные исследования проводили в Научно-исследовательском
консультационно-диагностическом центре по птицеводству ФГБОУ ВО «Санкт-
Петербургский государственный университет ветеринарной медицины».
2.1.1 Создание вакцины
Иммунокомплексная вакцина против инфекционной бурсальной болезни
из штамма “ВНИВИП” была приготовлена путем смешивания нативного вируса
инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” с полученной
специфической гипериммунной сывороткой. Производственный штамм
“ВНИВИП” вируса инфекционной бурсальной болезни освежали на
развивающихся куриных СПФ-эмбрионах 10-12-суточного возраста. Штамм
“ВНИВИП” был получен от компании “Кронвет”. Заражение эмбрионов
проводили на хориоаллантоисную оболочку в объеме 0,2 см3 производственного
штамма “ВНИВИП” вируса инфекционной бурсальной болезни, разведенного
1:100 стерильным физиологическим раствором.
Зараженные и контрольные эмбрионы инкубировали при (37,0±0,5) °С в
течение 5 суток. В процессе инкубации эмбрионы овоскопировали два раза в
сутки через 12 часов. Эмбрионы, погибшие в течение первых 48 часов после
заражения уничтожали, считая их гибель неспецифичной.
Через 5 суток инкубации все эмбрионы охлаждали при температуре 4-6°С
в течение 16-18 часов и вскрывали.
Перед вскрытием эмбрионов скорлупу над пугой дезинфицировали
спиртом и фламбировали. Вскрывали, собирали тушки эмбрионов и
хорионаллантоисные оболочки и готовили гомогенат на физиологическом
растворе в соотношении 1:1. Гомогенат центрифугировали в течение 30 мин. при
3000-5000g. Надосадок расфасовывали в стерильные пенициллиновые флаконы
и хранили их в низкотемпературном морозильнике при температуре -80оС.
Вычисление биологического титра проводили по методу Рида и Менча.
Вируссодержащий материал добавляли в гипериммунную сыворотку при
постоянном помешивании. Одна доза вакцины содержала не менее 10 3,0
ЭИД50/см3.
Контроль внешнего вида вакцины осуществляли по ГОСТ 33821-2016.
Контроль вакцины на стерильность и безвредность проводили по ГОСТ 28085-
2013.
Образцы тканей фабрициевой сумки для анализа экспрессии генов
отбирали от случайным образом выбранных птиц всех исследуемых групп (n=3)
через 5 недель после вакцинации (35 день опыта).
Образцы предварительно выдерживали при -20°С для транспортировки в
молекулярно-генетическую лабораторию.
Отбор крови у цыплят осуществлялся в возрасте 7, 14 и 35 суток.
Полученную сыворотку крови исследовали на базе Научно-исследовательского
консультационно-диагностического центра ФГБОУ ВО “СПбГУВМ” на
фотометре микропланшетного формата Multiskan FC в реакции диффузионной
преципитации и методом иммуноферментного анализа. Для проведения реакции
диффузионной преципитации использовали набор антигенов и сывороток для
выявления специфических антител и антигенов вируса инфекционной
бурсальной болезни в реакции диффузионной преципитации “БИОТЕСТ-РДП”.
Для постановки реакции использовался набор The Infectious Bursal Disease Virus
Antibody test kit производства компании BioChek согласно инструкции
производителя.

2.1.2 Метагеномные исследования
Метагеномные исследования выполняли методом NGS-секвенирования,
путём анализа гена прокариотической 16S-рибосомальной РНК (16S рРНК).
Тотальную ДНК из исследуемых образцов выделяли с использованием
набора «Genomic DNA Purification Kit» («Fermentas, Inc.», Литва) следуя
рекомендациям производителя. Метагеномное секвенирование осуществляли на
геномном секвенаторе MiSeq («Illumina, Inc.», США) с набором MiSeq Reagent
Kit v3 («Illumina, Inc.», США).

2.1.3 Анализ экспрессии генов
Анализ уровня относительной экспрессии генов иммунитета проводили
методом ПЦР в реальном времени (qPCR). Общая РНК из образцов была
выделена с использованием набора Aurum™ Total RNA Mini Kit (Bio-Rad) в
соответствии с инструкциями производителя. Расчет относительной экспрессии
был произведен при помощи метода 2 -∆∆Ct.

2.2 Результаты собственных исследований
2.2.1 Исследование сыворотки крови гипериммунизированных птиц в
реакциидиффузионнойпреципитациидлясоздания
иммунокомплексной вакцины.
Положительную сыворотку крови получали путем иммунизации СПФ-кур
вирусом ИББ по стандартной методике. Для иммунизации использовали живую
вакцину против инфекционной бурсальной болезни птиц из штамма “ВНИВИП”.
Вакцинацию осуществляли двукратно: интраназально и интраокулярно по 1
капле вакцины на голову. Затем через 2 недели после второй иммунизации
проводили ревакцинацию инактивированной вакциной против инфекционной
бурсальной болезни птиц в дозе 0,5 мл подкожно. Спустя 3 недели отбирали у
птицы сыворотка крови с соблюдением правил асептики и антисептики.
Активность полученной сыворотки составила 10000 – 30000 в ИФА.
2.2.2 Комбинация вируссодержащего материала с полученной
гипериммунной сывороткой для создания вакцины.
Иммунокомплексная вакцина против инфекционной бурсальной болезни
из штамма “ВНИВИП” была приготовлена путем смешивания нативного вируса
инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” с полученной
вышеописанным образом специфической гипериммунной сывороткой.
Вируссодержащий материал добавляли в гипериммунную сыворотку при
постоянном помешивании.
Рисунок 1 – Пробирка объёмом 15 мл с опытной партией иммунокомплексной
вакцины против инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” (светло-розовый
цвет, однородная жидкость, хранение при -80 оС)

2.2.3 Подготовка проекта нормативно-технической документации для
изготовления, контроля и применения иммунокомплексной вакцины
против инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП”.

2.2.3.1 Контроль изготовленной серии вакцины.
В процессе производства опытных партий вакцины для обоих опытов (на
цыплятах кросса Ломан Уайт и цыплятах кросса Росс-308) был проведен
контроль вакцины на стерильность и безвредность.
1. Контроль внешнего вида вакцины.
Внешний вид вакцины оценивали по ГОСТ 33821-2016. Внешний вид
вакцины удовлетворяет предьявляемым в ГОСТе требованиям.
2. Контроль вакцины на стерильность.
Определение стерильности 2-х лабораторных серий вакцины проводили по
ГОСТ 28085-2013. Установлено, что высевы 2-х лабораторных серий вакцины
были свободны от контаминации аэробными и анаэробными бактериями,
грибами и микоплазмами.
3. Контроль вакцины на безвредность проводили по ГОСТ 28085-2013. Все
куры, участвовавшие в определении безвредности вакцины, остались живыми,
без видимых клинических признаков переболевания и в месте введения вакцины
отсутствовали следы воспалительной реакции.
2.2.3.2 Исследование антигенной активности иммунокомплексной
вакцины.
Поскольку при иммунизации организма вакцинами против инфекционной
бурсальной болезни иммуногенность напрямую коррелирует со значением титра
антител,былипроведеныиспытанияантигеннойактивности
иммунокомплексной вакциной против инфекционной бурсальной болезни из
штамма “ВНИВИП”. Организм птицы считается защищенным от полевого
штамма вируса инфекционной бурсальной болезни при титре антител большем
либо равным 500 в иммуноферментном анализе, и при цельном титре антител в
реакции диффузионной преципитации.
2.2.3.3 Титр антител титра антител в крови цыплят кросса Ломан
Уайт после введения иммунокомплексной вакцины в суточном возрасте.
Основным эффектом вакцинации иммунокомплексной вакциной против
инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” является
формирование защитного титра антител у птиц в момент снижения у птицы
титра материнских антител до достаточных значений, чтобы вакцинный вирус
инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” смог проникнуть в
клетки-мишени, располагающиеся главным образом в фабрициевой сумке и
слепых отростках кишечника.
Рисунок 2 демонстрирует, что на 35 сутки жизни уровень иммунитета
цыплят кросса Ломан Уайт к вирусу инфекционной бурсальной болезни сильно
разнится. Можно видеть, что в иммуноферментном анализе показатель титра
антител к вирусу инфекционной бурсальной болезни в среднем составляет 68
(контрольная группа цыплят) и 514 (вакцинированная группа цыплят). В реакции
диффузионной преципитации антитела обнаруживались в цельном титре
(таблица 1).
Результатысерологическихисследованийсыворотоккрови
вакцинированной группы является положительным согласно инструкции к
набору The Infectious Bursal Disease Virus Antibody test kit. Данный уровень
антител свидетельствует об активности вакцинного вируса в иммунных клетках-
мишенях организма цыплят кросса Ломан Уайт. Также данный уровень антител
способен защитить организм цыплят от полевых штаммов вируса инфекционной
бурсальной болезни.

7056,66953
8000

6000
32813395
4000

200068514
1 сутки14 сутки35 сутки

Контрольная группаВакцинированная группа
Рисунок 2 – Титр антител в крови цыплят кросса Ломан Уайт, ИФА, обратные значения
(n=50).
Таблица 1 – Титр антител в крови цыплят кросса Ломан Уайт, РДП (n=50)
Разведение
Группа птиц/возраст
Ц248163264128
группа цыплят цыплят кросса Ломан
Вакцинированная Контрольная группа

1 сутки++++—-
Уайт

14 сутки+++—–

35 сутки——–
кросса Ломан Уайт

1 сутки++++—-

14 сутки+++—–

35 сутки+——-

2.2.3.4 Титр антител в крови цыплят кросса Росс-308 после введения
иммунокомплексной вакцины в суточном возрасте.
В возрасте 35 суток, на момент окончания опыта, результаты ИФА и РДП
показали, что уровень антител у двух групп цыплятах кросса Росс-308 сильно
разнится. В контрольной группе в иммуноферментном анализе был обнаружен
титр 47, а реакция диффузной преципитации дала отрицательные результаты.
Это говорит о том, что материнские антитела полностью разрушены и контакта
с полевым либо вакцинным вирусом у птиц контрольной группы не произошло.
При исследовании сыворотки крови птиц вакцинированной группы было
обнаружено, что в иммуноферментном анализе средний титр антител против
вируса инфекционной бурсальной болезни составил 3240 (рисунок 3), а в
реакции диффузионной преципитации – 1:4 (таблица 2). Данный уровень антител
никак не может являться материнским, поскольку по прошествии 35 суток
материнские антитела не могут сохраниться в организме птицы. Также,
обнаруженный уровень антител превышает уровень антител, обнаруженный в
ИФА и РДП на 14-е сутки после вылупления, что означает, что данный результат
может являться только следствием действия иммунокомплексной вакцины.
5692,755851
6000
5000
40003240,3
300019582014
2000
100047,2
1 сутки14 сутки35 сутки

Контрольная группаВакцинированная группа
Рисунок 3 – Титр антител в крови цыплят-бройлеров, ИФА, обратные значения (n=30)

Таблица 2 – Титр антител в крови цыплятах кросса Росс-308, РДП (n=30)
Разведение
Группа птиц/возраст
Ц248163264128
Вакцинированная Контрольная группа
цыплятах кросса

1 сутки++++—-
Росс-308

14 сутки++——

35 сутки——–
группа цыплятах

1 сутки
кросса Росс-308

++++—-

14 сутки++——

35 сутки+++—–

На сегодняшний день на некоторых российских птицефабриках
используется схема вакцинации, которая включает в себя применение
зарубежных иммунокомплексных вакцин. Наиболее близким аналогом является
вакцина Poulvac® Bursaplex® производства компании Zoetis, США. Согласно
опубликованным исследованиям, проведенным Sedeik M.E. с соавторами,
обратный титр антител при применении данной вакцины составляет от 1000 до
3500 на 35 сутки жизни бройлеров. Таким образом, иммунокомплексная вакцина
против инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” обладает
антигенной активностью, равной антигенной активности зарубежных
импортных коммерческих вакцин.
Вышеперечисленные результаты контроля внешнего вида вакцины,
контроля стерильности и безвредности вакцины, оценки антигенной активности
вакцины, стали основой для разработанного проекта нормативно-технической
документации для изготовления, контроля и применения иммунокомплексной
вакцины против инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП”
(Технологического регламента, Стандарта организации (СТО) по контролю
иммунокомплекснойвакцины,Инструкциипоприменению
иммунокомплексной вакцины).

2.2.4 Зоотехнические показатели подопытных птиц
Таблица 3 демонстрирует, что иммунокомплексная вакцина против
инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” не оказала
существенного влияния на зоотехнические показатели цыплят кросса Ломан
Уайт, поскольку разница в весе между обеими группами была в пределах 10-20
грамм, что не является достоверным отличием.
Как видно из таблицы 4, в начале эксперимента средняя масса тела
цыплятах кросса Росс-308 в обеих группах составляла 38 г. Однако уже на 7
сутки птицы, получившие дозу иммунокомплексной вакцины в суточном
возрасте, превосходили средний вес контрольной птицы на 20 г. К концу опыта
этот показатель в опытной и контрольной группах был равен 2341,25±155 г и
2056,3±184 г соответственно, что составляет разницу практически в 300 г. Таким
образом можно сделать вывод, что иммунокомплексная вакцина против
инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” позитивно влияет на
привесы цыплят-бройлеров.
Таблица 3 – Показатели живой массы цыплят кросса Ломан Уайт, г (M±m, n=50)
14-21-28-35-
Суточные 7-суточные
До заражениясуточные суточные суточные суточные
цыплятацыплята
цыплята цыплятацыплятацыплята

Контрольная группа
цыплят кросса36±0,8120,7±1,12204±2,26290±3,4415±4,8523±6,3
Ломан Уайт

Вакцинированная
цыплят кросса36±1,1*125,7±2,4227±2,12280,4±3,8396,8±4,3* 512,25±5,9
Ломан Уайт

*-при сравнении групп контрольной и вакцинированной групп, p≤0,05
Таблица 4 – Показатели живой массы цыплятах кросса Росс-308, г (M±m, n=30)
14-21-28-35-
Суточные 7-суточные
До заражениясуточные суточныесуточныесуточные
цыплятацыплята
цыплятацыплятацыплятацыплята

Контрольная
группа цыплятах38±1,5154,9±1,9379±2,4894,1±1041468±2332056,3±184
кросса Росс-308

Вакцинированная
группа цыплятах38±1,85*175,9±2,4481,7±811056,8±54 1703,9±231* 2341,25±155
кросса Росс-308

*-при сравнении групп контрольной и вакцинированной групп, p≤0,05

2.2.5 Морфологические изменения в организме птиц при введении
иммунокомплексной вакцины против инфекционной бурсальной
болезни из штамма “ВНИВИП”

Рисунок 4 – Отсутствие кровоизлияний на слизистой оболочке вскрытой фабрициевой
сумки цыплят кросса Ломан Уайт, вакцинированная группа, 35 день эксперимента

На рисунках №4-5 видно, что Фабрициева сумка у цыплят кросса Ломан
Уайт не подверглась дегенеративным изменениям, характерно возникающим
после применения живых вакцин против инфекционной бурсальной болезни.
Стенка фабрициевой сумки гладкая, напряжена, розового цвета. Складчатость
внутренней поверхности ровная, без кровоизлияний, наложений и
пролиферативных включений. В качестве обнаруженных изменений можно
отметить усиленное кровенаполнение сосудов фабрициевой сумки, что может
свидетельствовать о неких внутренних воспалительных процессах, являющихся
следствием действия вакцинного вируса. Прочие внутренние органы также не
подверглись патологическим и дегенеративным изменениям.

Рисунок 5 – Отсутствие кровоизлияний на слизистой оболочке вскрытой фабрициевой
сумки цыплят кросса Росс-308, вакцинированная группа, 35 день эксперимента

Из результатов патоморфологического осмотра фабрициевой сумки
цыплятах кросса Росс-308 можно сделать вывод о более интенсивном характере
влияния иммунокомплексной вакцины против инфекционной бурсальной
болезни из штамма “ВНИВИП” на Фабрициеву сумку, по сравнению с таковыми
у цыплят кросса Ломан Уайт. Наибольшие изменения закономерно коснулись
фабрициевой сумки, как наиболее таргетного органа для вакцинного штамма
вируса инфекционной бурсальной болезни. Капсула фабрициевой сумки
дряблая, овальной формы (в норме – ровный шар), с проступающими снаружи
складками.
При вскрытии был отмечен след жизнедеятельности вакцинного вируса
инфекционной бурсальной болезни. Отчетлива видна гиперемия складчатых
стенок фабрициевой сумки, наличие точечных кровоизлияний в подслизистой
основе стенок фабрициевой сумки. Складки дряблые и ненапряжены.
Таким образом данные патоморфологического осмотра подтверждают
данные по формированию антител и экспрессии иммунокомпетентных генов – в
организме цыплят кросса Ломан Уайт вакцинный вирус оказал менее
интенсивное влияние на ткани-мишени по сравнению с организмом цыплятах
кросса Росс-308.
2.2.6 Влияние иммунокомплексной вакцины против инфекционной
бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” на патогенные и условно-
патогенные микроорганизмы кишечника птиц.
При помощи модифицированного метода NGS-секвенирования был
проведён сравнительный анализ бактериальных сообществ в вакцинированной и
контрольной группах. Данный метод подтвердил результаты анализа экспрессии
иммунокомпетентных генов.
0,4
0,35
0,3Fusobacterium
0,25Campylobacter
0,2Streptococcus
0,15Staphylococcus
0,1Peptococcus
0,05Escherichia/Shigella
Контрольная группаВакцинированная группа
Рисунок 6 – Процентное соотношение патогенных и условно-патогенных родов
микроорганизмов в исследованных образцах цыплят кросса Ломан Уайт, %

Рис. 6 отражает относительное содержание патогенных и условно-
патогенных микроорганизмов в слепых отростках желудочно-кишечного тракта
цыплят кросса Ломан Уайт на 35 день. Род Staphylococcus был представлен в
основном бактериями Staphylococcus warneri и Staphylococcus cohnii,
выявляющимися при процессах снижения иммунитета и являющимися
участниками патогенных процессов. Также есть данные о способности
Staphylococcus cohnii к развитию антибиотикорезистентности. Прочие
патогенные и условно-патогенные микроорганизмы также были подобраны для
сравнения у групп птиц по своим патогенным свойствам, либо способности к
проявлению таковых при снижении иммунитета. Из данных NGS-
секвенирования видно, что относительное содержание патогенных и условно-
патогенных микроорганизмов в кишечнике цыплят вакцинированной группы на
0,25% меньше, нежели в кишечнике контрольной группы. Данное явление
связано с активацией местного иммунитета и усилением неспецифических
иммунных реакций в слепых отростках кишечника, в состав ткани которых
также входят разрозненные иммунные клетки, поражаемые вакцинным вирусом.
Эти данные подтверждаются также анализом экспрессии иммунокомпетентных
генов в клетках ткани фабрициевой сумки, имеющих одну природу с иммунными
клетками, входящими в состав тканей слепых отростков кишечника.
0,2
Salmonella
Fusobacterium
0,15
Campylobacter
0,1Streptococcus
Staphylococcus
0,05Peptococcus
Mycoplasma
Escherichia/Shigella
Контрольная группаВакцинированная группа
Рисунок 7 – Процентное соотношение патогенных и условно-патогенных родов
микроорганизмов в исследованных образцах цыплятах кросса Росс-308, %
Как можно наблюдать на рисунке 7, количество патогенных
микроорганизмов в слепых отростках желудочно-кишечного тракта цыплят
вакцинированной группы было существенно ниже, чем в кишечнике цыплят
контрольной группы. В данном случае, основное различие было обусловлено
содержанием микроорганизмов родов Mycoplasma и Streptococcus. Основными
представителями рода Mycoplasma являлись такие условно-патогенные виды,
как Mycoplasma conjunctivae, Mycoplasma dispar, Mycoplasma canadense и
прочие. Основными представителями рода Streptococcus являлись такие
микроорганизмы, как Streptococcus salivarius, Streptococcus sanguinis,
Streptococcus cristatus и прочие, способные участвовать в септических процессах,
обсеменять органы и ткани, а также активно размножающиеся при снижении
иммунитета у птицы.
2.2.7 Влияние иммунокомплексной вакцины на экспрессию генов,
участвующих в иммунном ответе птиц.
В работах некоторых авторов показано, что наиболее выраженные
изменения в уровне экспрессии генов, связанных с иммунитетом, отмечаются
именно в органах, в которых вирус реплицируется наиболее интенсивно. В связи
с этим степень реакции в ответ на вакцинацию птицы через экспрессию генов
была исследована в конце опыта в возрасте 35 дней. Были выбраны некоторые
ключевые гены, связанные с иммунитетом (AvBD-9, AvBD-10, IL6, IL8L2, PTGS2,
IRF7) у цыплят кросса Ломан Уайт (рис. 8) и цыплят кросса Росс-308 (рис. 9).
для оценки действия вакцинного вируса на фабрициеву сумку.

3026,60
21,61
2015,63
1010,08
01,66
3,17

Контрольная группаВакцинированная группа
Рисунок 8 – Экспрессия генов иммунитета в фабрициевой сумке цыплят кросса Ломан Уайт
20000
1500016009,79
10000
5000523,974492,60
88,441,18
1382,76

Контрольная группаВакцинированная группа
Рисунок 9 – Экспрессия генов иммунитета в фабрициевой сумке цыплятах кросса Росс-
Анализируя действие иммунокомплексной вакцины против инфекционной
бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” на активацию генов иммунитета,
можно заключить, что вакцина вызывает существенную стимуляцию
иммунокомпетентных генов. В особенности, наиболее активно данные
иммунные реакции протекают в организме вакцинированных бройлеров,
поскольку отличия от экспрессии в клетках фабрициевой сумки
вакцинированных цыплят кросса Ломан Уайт составляли от нескольких десятков
до нескольких тысяч раз.
Данные результаты коррелируют с данными по образовавшемуся титру
антител и анализу патоморфологических изменений на вскрытии. Данные
методы исследований показали, что контакт вакцины с организмом цыплят
кросса Росс-308 был значительно сильнее, нежели с организмом цыплят кросса
Ломан Уайт.
Имеются литературные данные, описывающие характер экспрессии
иммунокомпетентных генов IL6, IL8L2, IRF7 и прочих под влиянием вакцинации
либо заражения вирусом инфекционной бурсальной болезни. Так, по данным
различных исследований, экспрессия данных иммунокомпетентных генов под
влиянием зарубежных вакцин имеет характер от 2- до 25-кратного превышения
над уровнем экспрессии данных генов в группе контроля. Экспрессия генов,
наблюдаемая нами при вакцинации птицы иммунокомплексной вакциной против
инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” существенно
превосходит все результаты, ранее полученные при схожих исследованиях.
2.2.8 Планируемая экономическая эффективность внедрения
иммунокомплексной вакцины против инфекционной бурсальной
болезни из штамма “ВНИВИП”
Внедрение иммунокомплексной вакцины против инфекционной
бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” для профилактики болезни Гамборо
экономически оправдано. Затраты для производства 100 тысяч доз
иммунокомплексной вакцины против инфекционной бурсальной болезни из
штамма “ВНИВИП” в лабораторных условиях представлены в таблице 5.

Таблица 5 – Расчет себестоимости иммунокомплексной вакцины против инфекционной
бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП”, 100 тысяч доз
НаименованиеЕд. изм. КоличествоЦена
Материалыруб.18 798,25
Заработная плата
сотрудниковруб.56 39,48
лаборатории
Налоговые начисления
%27,11 528,30
на заработную плату
Накладные расходы%205 193,21
ИТОГОруб.31 159,24

Как показали расчеты, исходя из закупочных цен на компоненты
иммунокомплексной вакцины, себестоимость ее составит 31 159 рублей 24
копейки за 100 тысяч доз или 311 рублей 59 копеек за 1 тысячу доз. Рыночная
цена вакцины Poulvac® Bursaplex® производства компании Zoetis, США
(наиболее близкий аналог иммунокомплексной вакцины против инфекционной
бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП”) составляет от 889 рублей за 1
тысячудоз.ТехническаявозможностьНаучно-исследовательского
консультационно-диагностического центра ФГБОУ ВО “СПбГУВМ” позволяет
выпускать не менее 100,0 тыс. доз вакцины в месяц и, следовательно, 1200,0 тыс.
доз вакцины в год. Планируемый годовой экономический эффект методом
преимущества в цене определялся по формуле:
Эг = ∆Ц×ОР
Где ∆Ц – преимущество в цене (руб.)
ОР – объем реализации продукции в натуральном выражении
Эг = (889 рублей – 312 руб.) * 1200 тыс. доз = 692 400 руб.
Таким образом, планируемый годовой экономический эффект при
применении иммунокомплексной вакцины против инфекционной бурсальной
болезни из штамма “ВНИВИП” в количестве 1200 тыс. доз в год составляет 692
400 рублей.
Ориентировочная потребность российского рынка в наиболее
востребованных живых вакцинах от инфекционной бурсальной болезни для
цыплят-бройлеров и кур-несушек родительских и промышленных стад
составляет 6,8-7,0 млрд доз в год. Соответственно, при старте промышленного
производства иммунокомплексной вакцины против инфекционной бурсальной
болезни из штамма “ВНИВИП” планируемый годовой экономический эффект
может быть существенно увеличен.
3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Разработана иммунокомплексная вакцина против инфекционной
бурсальной болезни из штамма «ВНИВИП», представляющая собой живой
вирус инфекционной бурсальной болезни штамма “ВНИВИП” в обьединении с
иммуноглобулинами класса G против белка VP2 вируса инфекционной
бурсальной болезни.
2. Подготовлен проект нормативно-технической документации для
изготовления, контроля и применения иммунокомплексной вакцины против
инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП”.
3. Иммунокомплексная вакцина против инфекционной бурсальной
болезни из штамма “ВНИВИП” вызывает выработку вируснейтрализующих
антител в организме цыплят яйценоских кроссов (средний титр до 514 в
иммуноферментном анализе, цельный титр в реакции диффузионной
преципитации) и цыплят мясных кроссов (средний титр до 3240 в
иммуноферментном анализе и 1:4 в реакции диффузионной преципитации).
4. Иммунокомплексная вакцина против инфекционной бурсальной
болезни из штамма “ВНИВИП” вызывает в Фабрициевой сумке сильный ответ
неспецифических факторов иммунной защиты (простагландин, галлинацины,
интерлейкины) в сравнении с контролем.
5. Иммунокомплексная вакцина против инфекционной бурсальной
болезни из штамма “ВНИВИП” не вызывает патологоанатомических изменений
в иммунокомпетентных органах цыплят, а также не вызывает у них
иммунодефицита и поражений внутренних органов вследствие размножения
вторичной микрофлоры.
6. Под влиянием иммунокомплексной вакцины против инфекционной
бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” в организме цыплят яйценоских
кроссов представленность патогенных и условно-патогенных родов
микроорганизмов сокращается более чем в 3 раза, а в организме цыплят мясных
кроссов – в 1,3 раза.
7. Планируемый годовой экономический эффект при применении
иммунокомплексной вакцины против инфекционной бурсальной болезни из
штамма “ВНИВИП” в количестве 1200 тыс. доз в год составляет 692 400 рублей.
4 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
Основные научные положения работы и ее практические результаты
предлагается использовать на современных птицеводческих предприятиях
ветеринарными специалистами, а также в процессе обучения студентов,
аспирантов и слушателей курса повышения квалификации.
Также предлагается к применению патент на изобретение RU №2761566 –
Вакцина иммунокомплексная против инфекционной бурсальной болезни птиц из
штамма “ВНИВИП”, зарегистрированный в Государственном реестре РФ 10
декабря 2021 г.
5 ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ
На основании вышеизложенного можно выделить следующие
перспективы дальнейшей разработки темы:
– дальнейшееизучениеиммунокомплекснойвакциныпротив
инфекционной бурсальной болезни из штамма “ВНИВИП” и изучение ее
иммуногенных свойств при введении в организм цыплят яйценоских кроссов;
– разработка и изучение иммунокомплексных вакцин против прочих
вирусных и бактериальных болезней сельскохозяйственной птицы
(инфекционнойанемиицыплят, инфекционногоэнцефаломиелита,
реовирусного теносиновита и прочих);
– дальнейшее изучение и сравнение влияния вакцинных и полевых вирусов
на микробиом и экспрессию иммунокомпетентных генов сельскохозяйственной
птицы.