Криптоспоридиоз поросят в условиях Нечерноземной зоны Северо-Западного региона РФ
ВВЕДЕНИЕ ………………………………………………………………………………………………………. 4
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ …………………………………………………………………………………. 12
1.1 Эпизоотология криптоспоридиоза поросят ……………………………………………… 12
1.1.1 Жизненный цикл криптоспоридий ……………………………………………………. 12
1.1.2 Распространение криптоспоридиоза …………………………………………………. 13
1.2 Патогенез и клиническая картина при криптоспоридиозе поросят…………… 23
1.3 Патологоморфологическая картина при криптоспоридиозе …………………….. 28
1.4 Терапия и профилактика криптоспоридиоза ……………………………………………. 33
2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ …………………………………… 41
2.1 Материалы и методы исследований ………………………………………………………… 41
2.2 Эпизоотология криптоспоридиоза поросят ……………………………………………… 49
2.2.1 Распространение криптоспоридиоза поросят в свиноводческих
хозяйствах Вологодской области ……………………………………………………………… 49
2.2.2 Сезонная динамика инвазированности поросят криптоспоридиями в
условиях Вологодской области ………………………………………………………………… 53
2.2.3 Возрастная динамика криптоспоридиоза поросят в хозяйствах
Вологодской области ……………………………………………………………………………….. 56
2.2.4 Контаминация объектов внешней среды ооцистами криптоспоридий на
свинокомплексе ……………………………………………………………………………………….. 60
2.2.5 Инвазированность поросят раннего возраста ассоциациями желудочно-
кишечных простейших …………………………………………………………………………….. 61
2.2.6 Влияние численности грызунов и их инвазированности
криптоспоридиями на распространение криптоспоридиоза среди поросят … 65
2.2.7 Заключение ……………………………………………………………………………………… 71
2.3 Клиническая картина при криптоспоридиозе поросят в условиях
Вологодской области …………………………………………………………………………………… 75
2.3.1 Симптоматические признаки при криптоспоридиозе поросят …………… 75
2.3.2 Показатели крови больных криптоспоридиозом поросят в зависимости
от интенсивности инвазии ………………………………………………………………………… 81
2.3.3 Заключение ……………………………………………………………………………………… 90
2.4 Меры борьбы с криптоспоридиозом поросят в условиях Вологодской
области………………………………………………………………………………………………………… 94
2.4.1 Результаты испытания терапевтических препаратов при
криптоспоридиозе поросят ……………………………………………………………………….. 94
2.4.2 Дезинвазия объектов внешней среды против экзогенных стадий
криптоспоридий……………………………………………………………………………………… 104
2.4.3 Теоретическое обоснование и разработка мероприятий по борьбе с
криптоспоридиозом поросят …………………………………………………………………… 106
2.4.4 Заключение ……………………………………………………………………………………. 108
ОПЫТ ОЗДОРОВЛЕНИЯ ХОЗЯЙСТВ ОТ КРИПТОСПОРИДИОЗА …………….. 110
ОБСУЖДЕНИЕ …………………………………………………………………………………………….. 112
ЗАКЛЮЧЕНИЕ …………………………………………………………………………………………….. 121
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ ……………………………………………………………… 124
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ …………………………………………………………………………….. 125
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………………………………………. 126
ПРИЛОЖЕНИЕ …………………………………………………………………………………………….. 157
В данной главе проведен ретроспективный анализ литературных источников по эпизоотологии криптоспоридиоза поросят в нашей стране и за рубежом. Описан жиз- ненный цикл криптоспоридий и распространение болезни по результатам исследова- ний отечественных и иностранных авторов. Представлены уже имеющиеся к настоя- щему времени данные по патогенезу, клинической картине и патологоморфологиче- ских изменениях при криптоспоридиозе поросят, а также по терапии и профилактике изучаемой инвазии.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Материалы и методы исследований
Изучение распространения криптоспоридиоза поросят проводили в 5 хозяйствах общественного и частного секторов Вологодского (СПК «Агрофирма Красная Звезда», Грязовецкого (Вологодский филиал АО «Шувалово»), Череповецкого (ЗАО «Ботово», ЗАО «Уломское») и Сокольского (АУ СО ВО «Психоневрологический интернат «Сос- новая роща») районов Вологодской области. Для этого в период 2013–2014 гг. провели обследование 128 поросят (в возрасте до 1 месяца) с признаками диареи.
Исследования фекалий на наличие ооцист криптоспоридий проводили по следу- ющим методикам. Предварительно подготовленный нативный препарат просматрива- ли под микроскопом при увеличении в 400–900 раз. При сильно засоренном препарате добавляли капельку раствора метиленовой сини или же окрашивали нативный мазок по методике Циля-Нильсена. В отрицательных случаях препарат готовили по центри- фужно-флотационному методу с использованием раствора по Бреза (M. Breza, 1957).
Интенсивность выделения ооцист в фекалиях определяли с применением мето- дики И. Павласека (I. Pavlasek, 1999).
Предположительный видовой состав криптоспоридий определяли методом мик- роскопии по ооцистам, описанным И. Павласеком (I. Pavlasek, 1999), «Определителю паразитических простейших» (М.В. Крылов, 1996), по публикациям (Т.В.Бейер, Н.В. Сидоренко, 1988), при консультации с д.в.н. Кряжевым А.Л.
Диагноз на криптоспоридиоз поросят ставили с учетом эпизоотического состоя- ния хозяйства, проводимых в нем профилактических мероприятий и результатов диа- гностических исследований в ветеринарных лабораториях на вирусные и бактериаль- ные инфекции: колибактериоз, сальмонеллез, рота-, корона-, парво-, аденовирусы и др. (А.Л. Кряжев, 2005).
Работу по изучению сезонной динамики инвазированности поросят криптоспо- ридиями проводили в 2014 г. на базе крупных свиноводческих комплексов Вологод- ского (СПК «Агрофирма Красная Звезда»), Череповецкого (ЗАО «Ботово»). Данные хозяйства были подобраны с учетом аналогов в плане природно-климатического зони- рования, технологии содержания и породного состава свиней. Ежемесячно исследова- ли фекалии поросят сосунов по 20–25 голов до месячного возраста, преимущественно, с клиническими признаками диареи различной степени тяжести. Исследование фека- лий на наличие ооцист криптоспоридий, определение экстенсивности и интенсивности криптоспоридиозной инвазии, идентификацию ооцист проводили по вышеописанным методикам. Всего по данному разделу исследованию подверглись 282 животных.
Далее нас интересовали данные по интенсивности выделения ооцист криптоспо- ридий поросятами разного возраста. Для этого в период 2014 г. в тех же хозяйствах исследовали животных с рождения и до 6-месячного возраста. Их разделяли на группы
по 20–25 голов в каждой. В первую группу включили поросят с первого по третий дни жизни для установления длительности препатентного периода. Вторую группу соста- вили животные в возрасте 4–10 дней, третью – 11–15 дней, четвертую – 16–20 дней, пятую – 21–25 дней, шестую – 26–30 дней. В опыт брали животных, преимущественно с клиникой проявления диареи. Также нас интересовала степень инвазированности криптоспоридиями молодняка и более старших возрастов, для этого дополнительным исследованиям подвергли поросят отъёмышей в возрасте 2–3 месяцев и ремонтный молодняк в возрасте 4–6 месяцев. Всего по изучению возрастной динамики инвазиро- ванности криптоспоридиями было исследовано 191 поросят от рождения и до 6- месячного возраста.
Контаминацию объектов окружающей среды экзогенными стадиями криптоспо- ридий изучали на базе промышленного свинокомплекса ЗАО «Ботово» Череповецкого района в 2014–2015 гг. Исследования проводили в свинарнике-маточнике на 120 го- лов, разделенном на 2 сектора, а также в свинарнике для поросят отъемышей и сви- нарнике-откормочнике на 1500 и 2000 голов соответственно. Для этого брали соскобы с полов станков, проходов, стен кормушек и исследовали их при помощи центрифуж- но-флотационного метода с раствором по Бреза (M.Breza, 1957). С каждого объекта в свинарниках брали по 40 проб. Из полученной взвеси приготавливали мазки и окра- шивали их по методике Циля-Нильсена с последующим микроскопированием при увеличении в 400–900 раз.
Для установления паразитирования ассоциаций различных простейших у поросят раннего возраста в условиях Вологодской области проводили исследования в то же время, в тех же хозяйствах. Копроскопическими методиками обследовали поросят в возрасте до двух месяцев. В результате опыта было исследовано 117 поросят.
Для изучения влияния численности грызунов и их инвазированности криптоспо- ридиями на распространение криптоспоридиоза среди поросят опыт проводили в под- собных хозяйствах соседних Сокольского (АУ СО ВО ПНИ «Сосновая роща» – условно «хозяйствоNo1») и Вологодского (АУ СО ВО «Мосейковский ПНИ» – условно «хозяйствоNo2») районов Вологодской области в 2013–2015 гг.
Первоначально определяли плотность популяции крыс в свинарниках по методи- ке, описанной А.Л. Кряжевым (А.Л. Кряжев, 2005, А.Л. Кряжев, П.А. Лемехов, 2010).
Осенью, в период максимального расплода и миграции грызунов (А.Л. Кряжев, 2005, А.Л. Кряжев, П.А. Лемехов, 2010) на территории данных животноводческих объектов механическими методами отлавливали на подопытных свинарниках по 10–15 серых крыс (Rattus norvegicus), их усыпляли и после вскрытия исследовали содержи- мое заднего отрезка толстого и тонкого кишечника, а также соскобы-отпечатки слизи- стой оболочки подвздошной кишки на наличие ооцист криптоспоридий и их развива- ющихся стадий. Одновременно обследовали по 25 поросят на зараженность крипто- споридиями по вышеуказанной методике. Результаты подсчитывали в сравнительном аспекте с математической статистической обработкой.
Для изучения патогенеза и клинической картины при криптоспоридиозе поросят проводили следующие исследования.
По принципу аналогов нами были подобраны 2 опытные и 1 контрольная группы по 10 новорожденных поросят в каждой, спонтанно инвазированных ооцистами крип- тоспоридий.
При исследовании клинических признаков определяли общее состояние живот- ных, видимых слизистых оболочек и кожного покрова; измеряли температуру, пульс и дыхание; проверяли состояние пищеварительного тракта и работу сердца. Для кон- троля ежедневно исследовали фекалии на наличие ооцист криптоспоридий.
Трупы павших по причине криптоспоридиоза поросят вскрывали по стандарти-
зированной методике для установления основных визуальных патологических изме- нений. Помимо визуального осмотра проводили микроскопические исследования пре- паратов из тонкого и толстого отделов кишечника.
Для изучения влияния болезни на продуктивность животных формировали две группы поросят (опытную и контрольную) по 10 животных в каждой. В опытную группу входили поросята до 1-месячного возраста с клиническими признаками сред- ней и тяжелой степени расстройства пищеварения, которых предварительно исследо- вали на наличие ооцист криптоспоридий. Контролем служили здоровые поросята, по- добранные по принципу аналогов в отношении возраста, технологии содержания и кормления.
Поросят обеих групп подвергали ежедневному взвешиванию в течение 14 дней, результаты взвешивания использовали для установления среднесуточных приростов в обеих группах.
Гематологические и биохимические исследования крови в зависимости от сте- пени криптоспоридиозной инвазии выполняли на базе крупного свиноводческого комплекса «ЗАО Ботово» Череповецкого района Вологодской области в 2015 году. Предварительно диагноз на криптоспоридиоз ставили методом нативного мазка с по- следующим окрашиванием по Цилю-Нильсену. Интенсивность выделения ооцист в фекалиях определяли с применением методики И. Павласека (I. Pavlasek, 1999). Да- лее по принципу аналогов подбирали группы животных: две опытные и одну кон- трольную. В первую опытную группу входили 10 поросят, спонтанно инвазирован- ных криптоспоридиями со средней и высокой степенью инвазированности (++, +++). Во вторую опытную группу входили 10 поросят с низкой степенью инвазированно- сти криптоспоридиями (+). Исследования гематологических и биохимических пока- зателей крови проводили на 1, 5, 10 и 15 дни проявления клинических признаков бо- лезни. В контрольную группу входили 10 клинически здоровых животных, у которых определяли те же показатели. Сравнение показателей крови больных поросят прово- дили с учетом показателей контрольной группы животных. Для гематологических и биохимических исследований использовали следующую аппаратуру: полуавтомати- ческий биохимический анализатор Clima MC–15 (RAL, Испания) со стандартным набором реактивов, гематологический анализатор Mindray BC–2800Vet (Китай). Для определения лейкоцитарной формулы и абсолютного содержания лейкоцитов ис- пользовали счетную камеру Горяева, в окрашенном по методу Романовского в моди- фикации Филипсона мазке крови подсчитывали не менее 100 клеток.
Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использова- нием компьютерных программ STATISTICA, 2012 и Microsoft Office Excel, 2013.
При изучении терапии и профилактики криптоспоридиоза поросят в условиях изучаемого региона, проведя ретроспективный анализ отечественных и зарубежных литературных источников, мы сделали вывод, что для успешного лечения криптоспо- ридиоза необходимо применять препараты различных фармакологических групп. Так же очевиден тот факт, что наиболее рациональным является применение химиотера- певтических препаратов, начиная с первых дней жизни поросят с целью профилактики болезни.
Исследования по данному разделу проводились на базе крупного промышленно- го свиноводческого комплекса «Вологодский филиал АО Шувалово» Грязовецкого рай- она Вологодской области в 2016 году. Для изучения терапевтической эффективности препаратов нами были подобраны четыре группы поросят, спонтанно зараженных крип- тоспоридиями: три опытные и одна контрольная, по 15 голов в каждой в возрасте от 4 до 11 дней. Подопытных животных отбирали по принципу аналогов с учетом веса, воз- раста, физиологического состояния и интенсивности криптоспоридиозной инвазии.
Поросята первой опытной группы получали перорально препарат Кокциваль 5% (толтразурил) в дозе 0,4 мл на 1 кг массы (20 мг/кг по ДВ) однократно.
Поросята второй опытной группы получали перорально препарат Уникокцид (диклазурил) в дозе 2 мл на 1 кг массы животного (5 мг/кг по ДВ) однократно.
Поросята третьей опытной группы получали внутримышечно препарат Азитро- нит (азитромицин) в дозе 1 мл на 20 кг массы животного (5 мг/кг по ДВ) 1 раз в сутки в течение 2 дней.
Поросята контрольной группы получали внутримышечно препарат Амоксицил- лин 15% в дозе 1 мл на 10 кг массы животного (15мг/кг по ДВ) двукратно с интерва- лом 48 часов (базовая схема лечения, практикуемая в хозяйстве).
Для определения эффективности применяемых терапевтических средств еже- дневно исследовали фекалии поросят на выявление ооцист криптоспоридий, начиная с первого дня опытов.
Далее производили расчеты экономической эффективности ветеринарных меро- приятий по методике Р.Т. Сафиуллина (Р.Т. Сафиуллин и др., 2005) в ценах 2018 года.
В дальнейшем на базе этого же свиноводческого комплекса были проведены производственные испытания двух наиболее эффективных химиотерапевтических средств (Кокциваль 5% (толтразурил) и Уникокцид (диклазурил)) на 220 поросятах, больных криптоспоридиозом.
Изучение эффективности дезинвазии объектов внешней среды против экзоген- ных стадий криптоспоридий проводили на базе промышленного свинокомплекса ЗАО «Ботово» Череповецкого района. Исследование проводилось в свинарнике-маточнике на 120 голов, разделенном на 2 сектора.
Изначально определяли контаминацию объектов внешней среды в данном сви- нарнике. Затем, после перевода поросят в секцию доращивания, который осуществля- ется на данном предприятии в месячном возрасте, освобожденный свинарник- маточник подвергали дезинвазии. Один сектор обрабатывали современным средством «Кенококс» в дозе 0,5 л на 1м2 с экспозицией 2 часа, а другой сектор с использовани- ем базового средства, используемого в хозяйстве – горячего 4% раствора гидроксида натрия (едкий натр) из расчета 1 л на 1 м2 с экспозицией 3 часа. Через 1 сутки после проведенной обработки и подготовке свинарника-маточника повторно изучали конта- минацию ооцистами криптоспоридий объектов внешней среды в обоих секторах.
Результаты исследований вошли в разработанные комплексные мероприятия по терапии и профилактике криптоспоридиоза поросят.
Эпизоотология криптоспоридиоза поросят
Распространение криптоспоридиоза поросят в свиноводческих хозяйствах Вологодской области
В результате проведенных исследований на территории Вологодской области нами впервые был поставлен диагноз криптоспоридиоз поросят, который подтвердил- ся во всех подопытных свиноводческих хозяйствах.
В свиноводческом хозяйстве Вологодского района экстенсивность криптоспори- диозной инвазии составила 40% при интенсивности от сильной (+++) – 4% до слабой (+) – 12%, преимущественно присутствовала средняя (++) – 24% интенсивность инва- зии.
В свиноводческих хозяйствах Череповецкого района ЭИ варьировала в пределах от 48,3 до 57,7% при интенсивности от сильной (+++) – 6,9% и 15,4% до слабой (+) – 17,25% и 11,5%, с преобладанием средней интенсивности инвазии (++) в свиноком- плексах 3 и 4–24,15%, и 30,8% соответственно.
В свиноводческом хозяйстве Грязовецкого района ЭИ составила 29,6%, при этом интенсивность выделения ооцист варьировала от слабой (+) – 18,5% до средней (++) –
11,1%, поросят с сильной (+++) ИИ выявлено не было.
В свиноводческом хозяйстве Сокольского района экстенсивность криптоспори-
диозной инвазии составила 23,8%. Сильная интенсивность инвазии (+++) была зафик- сирована у 4,75%, средняя (++) ИИ у 4,75% и слабая (+) ИИ у 14,3% больных живот- ных.
По нашим наблюдениям степень инвазированности поросят криптоспоридиями в крупных свиноводческих предприятиях была выше, чем в свиноводческих хозяйствах с небольшим поголовьем.
Сезонная динамика инвазированности поросят криптоспоридиями в условиях Вологодской области
В результате проведенных исследований на территории Вологодской области нами впервые были обнаружены ооцисты криптоспоридий у поросят во всех подопыт- ных хозяйствах. Ооцистами криптоспоридий поросята опытной группы были зараже- ны во все сезоны года. Экстенсивность инвазии в различные месяцы варьировала в пределах 30,4–62,5%. Общая зараженность Cryptosporidium sp. составляла 45,7 %. Наибольшее количество инвазированных поросят с признаками диареи регистрирова- ли в весенний период (март – апрель), экстенсинвазированность в эти месяцы состав- ляла 52–62,5%. Далее отмечали постепенное снижение инвазии в течение лета с 52 до 30,4%. Следующий подъем инвазии регистрировали осенью, в сентябре ЭИ составила 45,8%, достигая пика 58,3% в ноябре, а в декабре отмечалось постепенное снижение инвазированности до 45,5%.
Следует отметить, что при увеличении численности инвазированных криптоспо- ридиями поросят, увеличивалась и интенсивность выделения ооцист Cryptosporidium sp. и наоборот.
Возрастная динамика криптоспоридиоза поросят в хозяйствах Вологодской области
При обследовании поросят различного возраста на обнаружение у них ооцист криптоспоридий получили следующие данные.
Инвазированность криптоспоридиями выявлялась в то или иное время из всех групп поросят до 2-х месячного возраста. Экстенсивность выделения ооцист Cryptosporidium sp. была в пределах от 8,7 до 72%, средняя экстенсинвазированность составила 38,7%.
Впервые ооцисты криптоспоридий в фекалиях инвазированных поросят обнару- живали с 3-х суток от рождения. С этого же времени появились и первые признаки расстройства пищеварения.
Наибольшая зараженность поросят криптоспоридиями отмечалась в возрастных группах 4–10 и 11–15 дней, экстенсинвазированность составила 72 и 60,9%, соответ- ственно.
С повышением возраста поросят экстенсивность криптоспоридиоза постепенно снижалась. В группе 16–20-дневных снизилась в 2 раза по сравнению с предыдущей возрастной группой и составила 36%, и продолжалось в других группах – 21–25 и 26– 30-дневных. ЭИ в них составила 33,3% и 24%, соответственно.
Молодняк 2–3 месяцев (поросята отъёмыши) и 4–6-месячного возраста (ремонт- ный) был инвазирован криптоспоридиями, но в незначительной степени – ЭИ состав- ляла 16,6% и 8,7%, с редкими случаями слабой диареи.
Выделение ооцист криптоспоридий с редкими случаями слабой диареи с интен- сивностью (+) было продолжительным, ее обнаруживали у поросят всех исследуемых
возрастных групп. Преимущественно, данную степень инвазии регистрировали у по- росят в трехдневном возрасте, а также в возрастных группах 21–25 и 26–30 дней. Так- же следует отметить, что исключительно слабая степень криптоспоридиозной инвазии преобладает в опытных группах поросят 2–3 и 4–6 мес.
Сильная (+++) и средняя (++) интенсивность выделения ооцист криптоспоридий отмечалась в наиболее короткий период, у поросят от 5 до 15-дневного возраста.
Контаминация объектов внешней среды ооцистами криптоспоридий на свинокомплексе
Исследования по контаминации объектов внешней среды экзогенными стадиями криптоспоридий показали следующую картину.
Наибольшее количество ооцист криптоспоридий обнаружено в свинарнике- маточнике, они присутствовали на всех исследованных поверхностях в разных коли- чествах. Из 160 проб, взятых в данном помещении, 31 (19,4%) оказались положитель- ными. Наиболее контаминированы возбудителем инвазии полы станков и проходов. В меньшей степени загрязнены стены станков и кормушки данного технологического помещения. Так при исследовании 40 проб соскобов с пола станков, ооцисты крипто- споридий выявлены в 13 (32,5%). При исследовании того же количества проб с пола проходов ооцисты криптоспоридий были найдены в 9 пробах (22,5%). При исследова- нии по 40 проб со стен станков и кормушек ооцисты были обнаружены в 5 (12,5%) и 4 (10%) пробах соответственно.
В свинарнике для поросят отъемышей поверхности контаминированы ооцистами криптоспоридий в меньшей степени, чем в свинарнике-маточнике. Из 160 проб – 16 (10%) оказались положительными. Наибольшее количество ооцист также было обна- ружено на полах станков и проходов, стены станков и проходов менее загрязнены ин- вазионными элементами. При исследовании 40 проб соскобов с пола станков конта- минация ооцистами криптоспоридий была выявлена в 7 случаях (17,5%). Обследова- ние 40 проб соскобов с пола проходов показало наличие 4 положительных проб (10%). При исследовании 40 проб соскобов со стен станков ооцисты криптоспоридий обна- ружены в 3 случаях (7,5%), в соскобах с кормушек – в 2 (5%).
Наименьшую контаминацию ооцистами криптоспоридий регистрировали в сви- нарнике-откормочнике. Из 160 проб в 4 (2,5%) обнаружены ооцисты криптоспоридий. При исследовании 40 проб соскобов с пола станков ооцисты криптоспоридий были выявлены в 3 случаях (7,5%). Обследование 40 проб соскобов с пола проходов показа- ло наличие 1 положительной пробы (2,5%). В пробах со стен станков и кормушек воз- будителей криптоспоридиозной инвазии не обнаруживали
Инвазированность поросят раннего возраста ассоциациями желудочно-кишечных простейших
При обследовании поросят возрастом до 2-х месяцев с проявлением клинической картины расстройства пищеварения мы установили, что они были инвазированы воз- будителями желудочно-кишечных простейших. В частности, экстенсинвазированность Cryptosporidium sp. составила 27,4%, Isospora suis – 9,4%, Balantidium coli – 19,6% и Eimeria sp. – 15,3%.
Микстинвазии были представлены следующим образом: у поросят до 1 – месяч- ного возраста (криптоспоридиоз + изоспороз + балантидиоз – 18,7%), старше 1 месяца (криптоспоридиоз + балантидиоз – 6,7%; балантидиоз + эймериоз – 14,2%).
Влияние численности грызунов и их инвазированности криптоспоридиями на распространение криптоспоридиоза среди поросят
В результате проведенных исследований в течение трех лет были получены сле- дующие данные.
Осенью 2013 г. в хозяйстве No 1 ЭИ у поросят достигла 52%. У отловленных крыс в данном хозяйстве ЭИ составила 40%. Среднесуточная поедаемость пробной приман- ки на 100 м2 площади помещения – 0,3 кг. Количество посещаемых нор на этой же площади – 6. Степень заселенности грызунами этого объекта – высокая.
В хозяйстве No 2 ЭИ у поросят составила 16%. У отловленных крыс ЭИ равня- лась 10%. Среднесуточная поедаемость приманки на 100 м2 площади помещения – 0,04 кг. Число посещаемых грызунами нор на этой же площади – 2. Степень заселен- ности грызунами этого объекта – низкая.
Осенью 2014 года в хозяйстве No 1 экстенсинвазированность криптоспоридиоза поросят составила 56%. У отловленных на данной территории крыс ЭИ – 46,7%. Сред- несуточная поедаемость приманки на 100 м2 площади помещения – 0,25 кг. Количе- ство посещаемых нор на этой площади – 5. Степень заселенности данной фермы гры- зунами – высокая.
В хозяйстве No 2 экстенсивность криптоспоридиозной инвазии у поросят была равна 24%. ЭИ отловленных на территории крыс – 20%. Среднесуточная поедаемость приманки на 100 м2 площади помещения – 0,05 кг. Количество нор на этой площади – 2. Степень заселенности данной фермы грызунами – низкая.
Осенью 2015 года в хозяйстве No 1 экстенсивность криптоспоридиоза поросят до- стигла 48%. У крыс, отловленных на территории объекта ЭИ – 33,3%. Среднесуточная поедаемость приманки на 100 м2 площади помещения – 0,3 кг. Количество посещае- мых нор на этой площади – 5. Степень заселенности данной фермы грызунами – высо- кая.
В хозяйстве No 2 ЭИ у поросят была на уровне 20%. ЭИ у крыс в этом хозяйстве составила 20%. Среднесуточная поедаемость приманки на 100 м2 площади помещения – 0,04 кг. Количество нор на этой площади – 2. Степень заселенности данной фермы грызунами – низкая.
Таким образом, средняя инвазированоость поросят криптоспоридиями в опытном хозяйстве No1 составила 52±4,0%, а инвазированность крыс в этом хозяйстве – 40,0±6,7%, среднесуточная поедаемость приманки – 0,28±0,03 кг, количество нор – 5,3±0,6, степень заселенности грызунами определена, как высокая.
В хозяйстве No2 средняя экстенсинвазированность поросят ооцистами крипто- споридий составила 20±4,0%, инвазированность крыс – 16,7±5,7%, среднесуточная по- едаемость приманки составила 0,04±0,006 кг, количество нор – 2, степень заселенно- сти данного объекта грызунами оценивается, как низкая
Сравнительные данные дисперсионного анализа с учетом критерия Фишера по- казали достоверность полученных данных на уровне 95 %. Коэффициент корреляции (r), рассчитанный по методу Пирсона составил 0,97, что говорит о высокой степени корреляционной зависимости анализируемых показателей.
Клиническая картина при криптоспоридиозе поросят
в условиях Вологодской области Симптоматические признаки при криптоспоридиозе поросят
Установили, что одним из самых основных специфических симптомов крипто- споридиоза является диарея – следствие нарушения всасывательной функции кишеч- ника, преимущественно тощей и подвздошной кишок, по причине поражения эпители- ального их покрова. Диарея начиналась с 3– 4 дня жизни поросят, в эти же дни обна-
руживали ооцисты криптоспоридий в фекалиях, что опять же подтверждает мини- мальную длительность препатентного периода – 72 часа. Диарея приводит к дегидра- тации организма больных животных, что, в свою очередь, является одной из причин нарушения процессов пищеварения и нормального метаболизма в целом. Также отме- чали и ряд других клинических признаков заболевания, свидетельствующих о нару- шении нормального функционирования органов и систем больного организма. У трех опытных поросят болезнь закончилась летальным исходом.
Патологоанатомические изменения при криптоспоридиозе поросят представля- ются на наш взгляд малоспецифичными и визуально характеризуются, в основном, ка- тарально-геморрагическим воспалением тощего и подвздошного отделов кишечника. Наиболее выраженные патологоанатомические изменения наблюдали в подвздошной кишке, т.е., в месте основной локализации и развития эндогенных стадий криптоспо- ридий.
Криптоспоридиозная инвазия является причиной снижения мясной продуктивно- сти животных. Установили, что среднесуточные приросты массы больных криптоспо- ридиозом поросят начали снижаться с первых дней проявления клинических призна- ков. Потери массы продолжались вплоть до окончания диареи. Среднесуточный при- рост в опытной группе за 14 дней составил 0,05 кг по сравнению с приростом 0,16 кг в контрольной. Таким образом, поросята в опытной группе в конце периода исследова- ний весили в среднем 2,16 ± 0,19 кг, в то время как средний вес поросят контрольной группы составлял 3,57 ± 0,18 кг (p ≤ 0,05).
Показатели крови больных криптоспоридиозом поросят в зависимости от интенсивности инвазии
В результате эксперимента, установили достоверные изменения ряда биохимиче- ских и гематологических показателей.
У поросят, спонтанно инвазированных Cryptosporidium sp., со средней и высокой ИИ (++, +++) наблюдали снижение общего количества белка в крови по сравнению с контрольной группой. На 5-е сутки количество общего белка снизилось на 1,04 г% с 6,93±0,25 до 5,89±0,2.
Содержание сахара в крови при спонтанном заражении поросят с 1-х суток и по 15-е сутки снижалось с 77,74±1,58 по 71,87±1,46 мг%.
Во время развития болезни наблюдались сдвиги в белковой формуле крови, так количество альбуминов при спонтанном заражении постепенно снижалось. На первые сутки показатель составил 36,75±1,22% больных поросят против 38,93±1,28% здоро- вых поросят, а на 10-е сутки 33,86±0,79% против 39,31±1,04%.
- и - глобулины у поросят при спонтанном заражении были слегка повышены, чем у поросят здоровой группы, но не существенно. Так, -глобулины у поросят зара- женных криптоспоридиями на 5-е сутки составили 16,79±0,41% против 12,91±0,43% у здоровых поросят. -глобулины у больных поросят на 5-е сутки составляли 15,28±0,36% против 12,13±0,9%.
И наоборот картина менялась в отношении -глобулинов. В начале болезни со- держание -глобулинов составляло 35,45±1,91%. На 1-е сутки появления диареи пока- затель составил 32,64±1,28%, на 5-е сутки 32,27±1,34%, на 10-е сутки 34,2±1,13%. На 15-е сутки -глобулины так и не достигли величины, как у здоровых поросят и были все на том же низком уровне 33,08±2,04%.
Данные изменения свидетельствуют о развитии воспалительных процессов в ор- ганизме, нарушении белкового обмена, обусловленного в первую очередь нарушением функции печени, которая участвует в процессах дезаминирования и переаминирования
аминокислот в организме, а также с плохим усвоением протеина вследствие наруше- ния деятельности пищеварительного тракта и недостатка сахара (гипогликемии).
Изменения активности щелочной фосфатазы наступили на 5-е сутки после зара- жения с 35,5±2,27 до 172,08±5,67 мкмоль/л. На 10-е сутки уровень щелочной фосфата- зы составил 461,94±,9,54 мкмоль/л, а на 15-е сутки отмечено значительное уменьше- ние этого фермента в крови до 280,95±10,95 мкмоль/л. Причиной повышенной актив- ности данного фермента являются продукты жизнедеятельности, выделяемые возбу- дителем, которые оказывают стимулирующее действие на клетки печени.
Уровень холестерина в сыворотке крови больных поросят на 5-е сутки достиг 85,94±3,49 мг%, а на 1-е сутки составлял 65,84±1,6 мг%. У здоровых поросят этот по- казатель был примерно на одном уровне.
Содержание билирубина у больных поросят на 1-е сутки составляло 8,67±0,58 мкмоль/л, в дальнейшем этот показатель увеличивался и наибольшей величины достиг на 5-е сутки 12,54±0,69 мкмоль/л, на 10-е сутки 11,2±0,44 мкмоль/л, а на 15-е сутки снизился почти до нормы и составил 8,8±0,4 мкмоль/л. У здоровых поросят этот пока- зать был почти на одном уровне, на 5-е сутки у здоровых поросят он составил 8,2±0,43 мкмоль/л. Причиной гипербилирубинемии может быть усиленное разрушение эритро- цитов и повышенное поступление билирубина в гепатоциты, а также нарушение до- ставки билирубина в печень при нарушенном печеночном кровотоке, причиной кото- рого может быть эндотоксемия.
Мочевина у больных поросят на 5-е сутки достигла максимальной величины в сравнении с 1-ми, 10-ми и 15-ми сутками наблюдения и составила 26,44±0,98 мг%, у здоровых поросят показатель на 5-е сутки 21,95±1,46 мг%.
Содержание креатинина в сыворотке крови больных поросят на 1, 5, 10, 15-е сут- ки был выше, чем у контрольной группы и составило 62,95±0,82, 89,30±2,17, 84,0±4,0, 67,13±1,46 мкмоль/л. У контрольной группы показатель был почти на одном уровне, к примеру, на 5-е сутки составил 61,61±1,45 мкмоль/л.
В начале опыта (на первые сутки появления диареи) уровень АЛТ находился в пределе 25,05±2,32 Ед/л, с 5-х суток по 10-е он увеличивался с 29,4±2,78 до 32,29±1,68 Ед/л, а на 15-е сутки наблюдалось снижение до 27,38±2,58 Ед/л. В контрольной группе показатель АЛТ находился в пределах 22,79±1,17 и 23,56±1,8 Ед/л.
В первые сутки проявления заболевания показатель АСТ находился в пределах 31,9±1,99 Ед/л, с 5-х суток по 10-е он увеличивался с 38,5±2,05 до 39,03±1,68 Ед/л, а на 15-е сутки наблюдалось снижение до 34,79±1,68 Ед/л. В контрольной группе показа- тель находился в пределах 30,92±1,24 и 32,2±1,49 Ед/л.
Содержание Са у зараженных поросят в крови было меньше, чем в контрольной группе. Так на 5-е сутки у больных поросят содержание Са составляло 9,08±0,43 мг%, у здоровых 11,83±0,25 мг%. На 10-е сутки показатель был еще ниже и составил 8,84±0,59 мг% (в контрольной группе 11,74±0,35 мг%), что происходит за счет потери связанного с белком Ca, как следствие развившейся в этот же период гипопротеинемии.
Такая же картина наблюдается и с P, который у больных поросят на 1-е, 5-е, 10-е и 15-е сутки составляет 4,3±0,12, 4,08±0,14, 4,13±0,15 и соответственно 4,23±0,13 мг%, а у контрольной группы на 5-е сутки составляет 5,01±0,25 мг%, на 10-х сутках 5,06±0,26 мг% и на 15-х сутках 5,01±0,28 мг%.
Соотношение Са/Р у зараженных поросят составляет 2,68±0,12 на 1-е сутки, 2,23±0,09 на 5-е сутки и 2,14±0,19 на 10-е сутки, у контрольной группы 2,54±0,12 на 1- е сутки, 2,36±0,11 на 5-е сутки и 2,33±0,18 на 10-е соответственно.
Установили, что у поросят, спонтанно инвазированных Cryptosporidium sp., уже при низкой ИИ (+) наблюдаются достоверные изменения биохимических показателей крови по сравнению с контрольной группой, которые преимущественно регистрирова-
лись на 5-е сутки после начала клинических проявлений болезни и свидетельствовали о развитии вышеописанных патологических процессов.
Таким образом, регистрировали снижение уровня сахара до 73,17±1,28 мг%, об- щего количества белка до 6,74±0.24 г%, альбуминов до 35,78±1,92%. Содержание - глобулинов повысилось до 13,96±0,65%, -глобулинов – до 38,07±1,76%. Активность щелочной фосфатазы снизилась до 80,29±6,69 мкмоль/л. Уровень билирубина повы- шался до 8,68±0,21 мкмоль/л., содержание креатинина – до 70,6±3,20 мкмоль/л. Ак- тивность АЛТ повышалась до 25,71±1,56 Ед/л, АСТ – до 36,02±1,69 Ед/л.
Гематологические исследования крови больных поросят со средней и высокой интенсивностью криптоспоридиозной инвазии (++, +++) показали достоверное пони- жение содержания гемоглобина у зараженных криптоспоридиями поросят, особенно значительное на 5-е и 10-е сутки болезни (92,44±1,9г/л и 89,66±1,65г/л против 109,46±2,94г/л и 108,22±1,83г/л у здоровых поросят соответственно), что соответству- ет и снижению общего количества эритроцитов в данные периоды наблюдения. К началу массового выделения ооцист – на 1-е, 5-е, 10-е сутки наблюдали снижение их числа соответственно до 5,5±0,25, 4,32±0,2 и 4,67±0,18*1012/л против 6,42±0,36, 6,5±0,27 и 6,71±0,31*1012/л у здоровых поросят.
К 15-м суткам болезни количество эритроцитов значительно выросло и начало приближаться к уровню контрольной группы 5,86±0,3*1012/л, что указывает на воз- можную компенсаторную реакцию красного костного мозга, но гемоглобин так и остался ниже, чем у животных контрольной группы. Это характеризует эритроциты как гипохромные и является маркером развития железодефицитной анемии.
Высокое, по сравнению с контролем, содержание лейкоцитов свидетельствует о развитии воспалительного процесса у поросят при криптоспоридиозе. Наиболее высо- ких значений этот показатель достиг к 5-м суткам болезни и составил 13,11±0,44*109/л против 8,67±0,54*109/л в контрольной группе.
Отмечали значимое увеличение количества эозинофилов и базофилов. Самое вы- сокое их содержание у больных поросят отмечалось на 5-е сутки и составило 0,13±0,04*109/л и 1,32±0,1*109/л соответственно, при нулевом показателе базофилов и 0,41±0,04*109/л эозинофилов в крови поросят контрольной группы.
Отмечалось также увеличение количества нейтрофилов со сдвигом влево у боль- ных животных по сравнению с контрольной группой, достигающее максимального значения на 5-е сутки после предполагаемого заражения (5,82±0,57*109/л сегменто- ядерных нейтрофилов против 2,56±0,27*109/л в контроле; 0,58±0,05*109/л палочко- ядерных нейтрофилов против 0,19±0,04*109/л в контроле).
Кроме воспалительной нейтрофилии в крови зараженных криптоспоридиями по- росят наблюдалось снижение количества лимфоцитов до 4,22±0,33*109/л и увеличе- ние моноцитов до 0,19±0,03*109/л против 5,85±0,47 и 0,09±0,02 в контроле соответ- ственно, что характерно для стрессовой лейкограммы, вызванной повышенной эндо- генной секрецией глюкокортикоидов.
Гематологические исследования крови больных поросят с низкой интенсивно- стью криптоспоридиозной инвазии (+) также показали достоверное повышение содер- жания лейкоцитов по сравнению с контрольной группой. Наиболее высоких значений этот показатель достиг к 5-м суткам болезни и составил 11,16±0,63*109/л против 8,67±0,54*109/л в контрольной группе, что свидетельствует о развитии воспалитель- ного процесса у поросят, как и в группе с высокой и средней ИИ.
При анализе лейкограммы установлено повышенное содержание базофилов, эозинофилов и моноцитов, увеличение количества нейтрофилов со сдвигом влево, снижение количества лимфоцитов на 5-е сутки заражения животных. Подобная карти- на наблюдалась и в первой опытной группе, однако при низкой ИИ изменения не были
столь продолжительными и к 10 дню болезни лейкограмма не показала достоверных изменений в сравнении с контрольной группой.
Меры борьбы с криптоспоридиозом поросят в условиях Вологодской области
Результаты испытания терапевтических препаратов при криптоспоридиозе поросят
В результате проведенной работы было установлено:
– в первой опытной группе, в которой поросята получали препарат Кокциваль 5% (толтразурил), ЭЭ составила 94,7 %, продолжительность диареи наблюдалась 1–3 дня, в среднем – 1,7 дней, величина патентного периода изменялась в пределах 3–5 дней, в среднем – 4,1 дней;
– у поросят второй опытной группы, получавших препарат Уникокцид (диклазу- рил), ЭЭ составила 97,7 %, диарея продолжалась в течение 1–3 дней, в среднем – 1,6 дней, патентный период – 3–4 дней, в среднем – 3,5 дня;
– у поросят третьей опытной группы, получавших препарат Азитронит (азитро- мицин), ЭЭ равнялась 77,3 %, диарея длилась 2–6 дней, в среднем – 3,3 дня, патентный период – 6–14 дней, в среднем – 10 дней. Сохранность поголовья составила 93,3%;
– экстенсэффективность по контрольной группе, в которой применялось базовое лечение – препарат Амоксициллин 15%, равнялась 72,2 %, продолжительность кли- нического проявления с наличием диареи составила 2–8 дней, в среднем – 4,8 дня, а длительность патентного периода варьировала в пределах 7–16 дней, что в среднем – 11,6 дней, сохранность поголовья – 86,7 %.
Сохранность поросят первой и второй опытных групп составила 100%.
Исходя из полученных результатов, нами были проведены расчёты экономиче- ской эффективности двух наиболее результативных схем лечения с применением пре- паратов Кокциваль, Уникокцид и стандартной схемы лечения антибиотиком Амокси- циллин.
Таким образом, затраты на противокриптоспоридиозные мероприятия составили 1794 руб. 72 коп. по первой опытной группе, 674 руб. 72 коп. – по второй и 1229 руб. 44 коп. по контрольной группе с применением стандартной схемы лечения. В перерас- чете на 1 голову применение препарата Уникокцид обходится в 45 руб., Кокциваль в 119 руб. 65 коп. и Амоксициллин в 81 руб. 96 коп.
Экономическая эффективность лечебных мероприятий на один рубль затрат при криптоспоридиозе поросят в контрольной группе составила 2,67 рубля, в первой опытной 3,83 рубля, а во второй опытной 11,92 рублей. Исходя из проведенных расче- тов, можно сделать вывод, что наиболее эффективным способом лечения оказалась схема, применяемая во второй опытной группе с использованием препарата Уникок- цид с действующим веществом диклазурил.
В результате далее проведенных производственных испытаний наиболее эффек- тивных в результате наших исследований препаратов Кокциваль 5% (толтразурил) и Уникокцид (диклазурил) на 220 поросятах, установили экстенсэффективность (ЭЭ) 91,9% и 95,3% соответственно.
Дезинвазия объектов внешней среды против экзогенных стадий криптоспоридий
Проведенные нами исследования объектов окружающей среды по изучению кон- таминации ооцистами криптоспоридий в свинарнике-маточнике показало, что
наибольшее их количество обнаружено на полу станков и проходов. В меньшей степе- ни загрязнены стены станков и кормушки. Установили, что в свинарнике-маточнике ооцисты криптоспоридий присутствуют на всех обследованных поверхностях в раз- ных количествах. Из 160 проб, взятых с различных объектов данного помещения, 31 (19,4%) оказались положительными.
Через 1 сутки после проведения дезинвазии данного помещения, получили сле- дующие результаты.
После проведения обработки первого сектора свинарника-маточника препаратом Кенококс было исследовано 80 проб соскобов, 3 (3,8%) из которых были положитель- ными. Так при исследовании 20 проб соскобов с пола станков ооцисты криптоспори- дий были обнаружены в 2 пробах (10%). Исследование того же количества проб на оо- цисты криптоспоридий с пола проходов выявило 1 положительную пробу (5%). В про- бах со стен станков и кормушек ооцист криптоспоридий не выявлено.
В результате обработки 2-го сектора раствором гидроксида натрия, наличие оо- цист криптоспоридий обнаруживали на всех обследуемых поверхностях. Из 80 взятых проб материала с объектов внешней среды, в 12 (15%) были обнаружены ооцисты криптоспоридий. Так из 20 проб с пола станков ооцисты были обнаружены в 5 пробах (25%). В пробах со стен станков ооцисты обнаружены в 1 пробе (5%), в соскобах с кормушек в 2 пробах (10%). При исследовании соскобов с пола проходов ооцисты криптоспоридий выявлены в 4 пробах (20%).
Таким образом, установили, что дезинфицирующее средство Кенококс является современным и достаточно эффективным в борьбе с экзогенными стадиями крипто- споридий, а едкий натр, зачастую используемый в хозяйствах, практически не оказы- вает губительного воздействия на возбудителя криптоспоридиоза поросят.
Теоретическое обоснование и разработка мероприятий по борьбе с криптоспоридиозом поросят
Целью нашей работы была разработка для свиноводческих хозяйств промыш- ленного и частного секторов Нечерноземной зоны Северо-Западного региона РФ ком- плекса мероприятий по борьбе с криптоспоридиозной инвазией поросят с учетом зо- нальных, природно-географических, технологических условий и хозяйственно- экономических возможностей.
В результате мониториноговых исследований, касающихся эпизоотических осо- бенностей криптоспоридиоза поросят в условиях изучаемого региона, клинической и патологоморфологической картины криптоспоридиоза, а также с учетом данных оте- чественных и зарубежных исследований и результатов собственных изысканий по специфической терапии заболевания и его профилактике нами были разработаны и внедрены методические положения «Криптоспоридиоз поросят» – рекомендации по борьбе и профилактике. Рекомендованы научно-техническим Советом Управления ве- теринарии с государственной ветеринарной инспекцией Вологодской области 20 сен- тября 2016 года, протокол No 1. Удостоены бронзовой медали ВДНХ 9 – 12 октября 2019 г.
В рекомендациях предложен комплекс мероприятий по борьбе с криптоспориди- озом поросят в условиях Северо-Западного региона РФ. При их разработке мы стара- лись представить данный комплекс мер наиболее понятным и доступным для практи- ческих ветеринарных и зоотехнических служб, максимально приблизив характер из- ложения к общепринятым положениям ветеринарии и зоотехнии, отвечающих совре- менным требованиям.
ОПЫТ ОЗДОРОВЛЕНИЯ ХОЗЯЙСТВ ОТ КРИПТОСПОРИДИОЗА
Работу по оздоровлению неблагополучных хозяйств по криптоспоридиозу поро- сят проводили в условиях промышленных свинокомплексов и частных фермерских хозяйств Вологодского, Грязовецкого, Череповецкого и Сокольского районов Воло- годской области в сотрудничестве со специалистами производственных ветеринарных служб данных хозяйств, а также ветеринарных районных и областной служб Управле- ния ветеринарии с государственной ветеринарной инспекцией Вологодской области. Непосредственно в хозяйствах лечебно-профилактические мероприятия согласовыва- лись с руководителями хозяйств, привлекались специалисты высшего и среднего звена – зооинженеры, свинарки и начальники комплексов, с которыми проводились лекции, семинары и разъяснительные беседы по указанной проблеме.
Применительно к особенностям конкретных хозяйств рекомендовали примене- ние общих и специальных мероприятий по терапии и профилактике криптоспоридио- за. Разрабатывали индивидуальные для каждого хозяйства планы борьбы с криптоспо- ридиозной инвазией.
С учетом индивидуальности свиноводческих хозяйств рекомендовали, разраба- тывали и осуществляли необходимый комплекс мероприятий, изложенных в методи- ческих рекомендациях (А.Л. Кряжев, А.С. Новиков, П.А. Лемехов, 2017), руковод- ствуясь также уровнем степени возможности и целесообразности их применения в каждом конкретном хозяйстве. Данные мероприятия включали в себя плановые и своевременные диагностические исследования на криптоспоридиоз, с учетом предло- женных нами методик, применение современных специфических и симптоматических средств для терапии и профилактики заболевания. Основополагающими профилакти- ческими мероприятиями являлись такие, как надлежащий уход за свиноматками и но- ворожденными поросятами, организация содержания и кормления поросят в первый месяц подсосного периода, содержание поросят-сосунов, дезинвазия животноводче- ских объектов с использованием современных и эффективных средств, истребитель- ные и профилактические мероприятия по борьбе с мышевидными грызунами и др.
Таким образом, в ряде курируемых хозяйств, ранее неблагополучных по крипто- споридиозу, удалось значительно снизить заболеваемость, увеличить сохранность по- росят на 20 %, а также увеличить среднесуточные приросты животных.
ОБСУЖДЕНИЕ
Приведено обсуждение результатов собственных исследований в сравнении с данными отечественных и зарубежных ученых по проблемам эпизоотологии, клиниче- ской картины, специфической терапии криптоспоридиозной инвазии поросят.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В условиях Северо-Западного региона Нечерноземной зоны РФ в свиноводче- ских хозяйствах Вологодской области впервые регистрировали криптоспоридиоз по- росят. Экстенсивность инвазии варьировала в пределах 23,8–57,7% и в среднем соста- вила 40,6%. Интенсивность выделения ооцист криптоспоридий изменялась (от слабой (+) – в среднем 14,8% до сильной (+++) – в среднем 6,3%, наиболее часто регистриро- вали среднюю (++) интенсивность инвазии – в среднем 19,5%).
Поросята до 1-месячного возраста во все сезоны года были заражены криптоспо- ридиями, средняя экстенсинвазированность составила 45,7%. Значительные подъемы экстенсивности инвазии, регистрировали в весенний (62,5%) и осенний (58,3%) перио-
ды. При увеличении численности инвазированных криптоспоридиями поросят, увели- чивалась и интенсивность выделения ооцист криптоспоридий и наоборот.
Поросята разного возраста поражены криптоспоридиями в различной степени. Первые случаи выделения ооцист с фекалиями обнаруживали в 3-дневном возрасте (59,1%). В дальнейшем экстенсивность и интенсивность криптоспоридиозной инвазии нарастает с одновременным увеличением степени проявления клинической картины диареи. Наиболее инвазированы поросята первых двух недель жизни (до 72%). С воз- растом животных экстенсивность и интенсивность криптоспоридиозной инвазии сни- жается, тяжесть течения болезни ослабевает.
Наибольшая контаминация ооцистами криптоспоридий объектов внешней среды (полы и стены станков, кормушки, полы проходов) установлена в свинарнике- маточнике, где в различной степени были контаминированы все обследуемые объекты (19,4%). С увеличением возраста поросят и переводе их в свинарники для отъемышей, а в дальнейшем на доращивание, происходит уменьшение контаминации помещений, в которых содержатся данные возрастные группы животных (10% и 2,5% соответ- ственно).
В свиноводческих хозяйствах Вологодской области поросята до 2-месячного воз- раста помимо криптоспоридий (27,4%) заражены и другими простейшими, такими как изоспоры (9,4%), балантидии (19,6%) и эймерии (15,3%).
Установлена высокая корреляционная связь между численностью и степенью ин- вазированности ооцистами криптоспоридий серых крыс (Rattus norvegicus) и степенью инвазированности криптоспоридиями поросят. Коэффициент корреляции (r) составил 0,97 (Р ≤ 0,05).
Клинические признаки криптоспоридиоза: угнетенность, залеживание, жажда, диарея, исхудание и другие наступают через 3–4 дня после рождения. Заболевание протекает в легкой, средней и тяжелой форме. Соответственно им проявляется степень выраженности клинического симптомокомплекса. Температура, пульс, дыхание в пре- делах нормы. При тяжелом течении в период кризисного состояния наблюдается сни- жение температуры конечностей, ушей, носового зеркальца, тахикардия, мышечная дрожь, цианоз слизистых оболочек, повышение температуры до 40,5 °C. Данная форма болезни заканчивалась летальным исходом.
Патологоанатомические изменения при криптоспоридиозе поросят представля- ются малоспецифичными и визуально характеризуются, в основном, катарально- геморрагическим воспалением тощего и подвздошного отделов кишечника. Наиболее выраженные патологоанатомические изменения наблюдаются в подвздошной кишке, т.е., в месте основной локализации и развития эндогенных стадий криптоспоридий.
При криптоспоридиозе поросят происходит достоверное снижение среднесуточ- ных приростов. Среднесуточный прирост в опытной группе поросят, инвазированных криптоспоридиями за 14 дней составил 0,05 кг по сравнению с приростами 0,16 кг в контрольной группе здоровых животных.
При криптоспоридиозе у поросят регистрируются достоверные морфологические и биохимические изменения показателей картины крови, регистрируемые при низкой степени инвазии и ухудшающиеся по мере ее увеличения. Среди биохимических пока- зателей – гипопротеинемия за счет уменьшения числа -глобулинов, гипогликемия, уменьшение количества кальция и фосфора. Происходит рост - и - глобулинов, би- лирубина, мочевины, холестерина, креатинина, АЛТ, АСТ, а также щелочной фосфа- тазы. Среди морфологических изменений достоверными являются снижение гемогло- бина и количества эритроцитов. При анализе лейкограммы установлено повышенное содержание базофилов, эозинофилов и моноцитов, увеличение количества нейтрофи- лов со сдвигом влево, снижение количества лимфоцитов.
Наиболее терапевтически и экономически эффективными при криптоспоридиозе поросят является применение следующих химиотерапевтических препаратов. Уникок- цид (диклазурил), экстенсэффективность которого составила 97,7%. Продолжитель- ность диареи у поросят в результате применения препарата составила 1–3 дня (в сред- нем 1,6 дней), а величина патентного периода выделения ооцист 3–4 дня (в среднем 3,5 дней). Экономическая эффективность на 1 рубль затрат составила 11,92 руб. Кок- циваль (толтразурил) показал экстенсэффективность 94,7%. Диарея продолжалась 1–3 дня (в среднем 1,7 дней), величина патентного периода выделения криптоспоридий была 3–5 дней (в среднем 4,1 дней). Экономическая эффективность на 1 рубль затрат составила 3,83 руб. Данные подтверждены производственными испытаниями этих двух препаратов.
При дезинвазии свинарника-маточника, как наиболее контаминированного ооци- стами криптоспоридий из обследованных нами свиноводческих помещений, значи- тельный эффект был достигнут при применении средства Кенококс. Раствор гидрок- сида натрия (стандартный вариант, зачастую применяемый в животноводческих хо- зяйствах) оказался малоэффективным против ооцист криптоспоридий.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Результаты изучения эпизоотических особенностей криптоспоридиоза поросят, патогенеза и клинической картины, терапевтических и профилактических мероприя- тий рекомендуется использовать для оздоровления от криптоспоридиозной инвазии и в целях дальнейшей профилактики в свиноводческих хозяйствах общественного и частного секторов Северо-Западного региона Нечерноземной зоны РФ.
2. Для специфической терапии криптоспоридиоза поросят рекомендуется приме- нять высокоэффективные препараты Уникокцид (диклазурил) и Кокциваль (толтразу- рил) в рекомендуемых апробированных дозировках по ротационной схеме.
3. Диагностические, терапевтические и профилактические мероприятия при криптоспоридиозе поросят рекомендуется осуществлять согласно рекомендаций по борьбе и профилактике «Криптоспоридиоз поросят», которые утверждены и рекомен- дованы научно-техническим Советом Управления ветеринарии с государственной ве- теринарной инспекцией Вологодской области 20 сентября 2016 года, протокол No 1. Удостоены бронзовой медали ВДНХ 9 – 12 октября 2019 г.
4. Теоретические и практические положения используются при выполнении учебных программ в процессе обучения студентов факультета ветеринарной медици- ны и биотехнологий ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА, факультетов ветеринарной ме- дицины, ветеринарно-санитарной экспертизы и биоэкологии ФГБОУ ВО «Санкт- Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», факультета вете- ринарной медицины ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный аграрный универ- ситет», факультета биотехнологии и ветеринарной медицины ФГБОУ ВО «Орловский государственный аграрный университет».
Актуальность темы. В условиях современной экономической и
политической обстановки в стране рациональное использование имеющихся
сельскохозяйственных ресурсов, является, как никогда необходимой мерой в
вопросе развития как сельского хозяйства в целом, так и свиноводства в
частности. На данный момент поголовье свиней в Вологодской области
составляет 43056 голов, в том числе в промышленном свиноводстве 39056 голов и
4000 голов в частном. В экономике сельского хозяйства свиноводство занимает
лидирующие позиции. За последний год было произведено 10 000 т мяса свиней.
Обеспеченность составляет 55%. В среднем по стране цифра остается в этих же
пределах.
Дальнейшее развитие отрасли зависит от множества сдерживающих
факторов. Одним из них являются паразитарные болезни, в частности
криптоспоридиоз поросят.
Криптоспоридиоз – широко распространенное протозойное заболевание
многих видов домашних и диких животных, а также человека, вызываемое
простейшими подкласса Cryptogregaria, семейства Cryptosporidiidae, рода
Cryptosporidium. Криптоспоридии ранее рассматривались как монотипное
семейство Cryptosporidiidae в составе класса кокцидий. По современным данным
паразиты образуют в системе споровиков самостоятельную группировку
высокого ранга, ближайшими родственниками которой являются грегарины.
Криптоспоридиоз является зоонозным заболеванием, которому подвержены
молодняк животных, птицы, рыбы и человек, вызывается простейшими рода
Cryptospоridium, открытых в начале в 1910 году Эдвардом Эрнстом Тиззером
[248], протекает в форме острого гастроэнтерита, и сопровождается сильной
диареей. Несмотря на то, что криптоспоридиоз был идентифицирован у многих
видов животных, он не считался значимым заболеванием, а внимание учёных
привлек только во время эпидемии ВИЧ-СПИДа в 80-х годах XX века, хотя
обнаружили возбудителя у человека ещё в 1976 году [212]. В настоящее время
криптоспоридиоз является важной зоонозной болезнью, поражающей многие
виды животных [159]. Криптоспоридии широко распространены и обнаружены
более чем у 170 видов животных [214]. В нашей стране ооцисты криптоспоридий
впервые были описаны у двадцати пятидневных телят в 1983 году В.Ф.
Никитиным и И. Павласеком, после чего началось изучение данного возбудителя,
в том числе и у других видов животных. У поросят криптоспоридиоз был
установлен в 1984 году [43; 29; 19]. Криптоспоридиоз в настоящее время является
значимой проблемой в области медицины и ветеринарии. Недавно проведенные
исследования доказали, что криптоспоридии занимают второе место после
ротавируса в этиологии диарей и смертности детей [240; 243; 197]. В связи с этим
в развитых странах проводится интенсивное изучение данного заболевания. Так в
США тратится ежегодно 4,3 млн. долларов на изучение криптоспоридиоза, что на
300 тыс. долларов больше, чем отводится на изучение 600 проектов, связанных с
изучением малярии [243].
Ситуация усугубляется тем, что криптоспоридии, попадая в воду
централизованного водоснабжения, не теряют своей инвазионности, так как
современные методы очищения (фильтрация, хлорирование и т.д.) не убивают их.
Существуют сообщения из разных стран о массовых вспышках заболеваний
людей криптоспоридиозом, заразившихся именно через водопроводную воду
[256; 257; 176; 177; 182; 238].
Установлено, что криптоспоридиоз является широко распространенным
заболеванием среди сельскохозяйственных животных в хозяйствах Вологодской
области [70; 77; 101]. В то же время в условиях Вологодской области и во многих
других субъектах РФ по сей день отсутствуют данные по эпизоотологии
криптоспоридиоза, не внедрены плановые диагностические исследования по
выявлению возбудителей данной болезни, а соответственно, не проводятся и
мероприятия эффективной терапии и профилактике криптоспоридиоза.
Цель и задачи исследований. Целью наших исследований было выяснение
степени изученности криптоспоридиоза поросят, установление уровня
профилактики и лечения в промышленном свиноводстве и фермерских
хозяйствах в России и за рубежом, а также проведение собственных исследований
по вопросам эпизоотологии, патогенеза и клинической картины, терапии и
профилактики этой болезни в свиноводческих хозяйствах Вологодской области.
На основе результатов разработать и предложить эффективные меры терапии и
профилактики криптоспоридиоза поросят в условиях изучаемого региона.
Согласно общей цели на решение поставлены следующие задачи:
– изучить распространение криптоспоридиоза среди поросят раннего возраста
в хозяйствах на территории Вологодской области;
– изучить сезонную динамику криптоспоридиоза поросят разного возраста в
свиноводческих хозяйствах Вологодской области;
– изучить контаминацию объектов внешней среды ооцистами
криптоспоридий на свинокомплексе;
– изучить инвазированность поросят раннего возраста ассоциациями
желудочно-кишечных простейших;
– изучить влияние численности грызунов и их инвазированности
криптоспоридиями на распространение криптоспоридиоза среди поросят;
– изучить основные вопросы патогенеза и клинической картины при
криптоспоридиозе в неблагополучном хозяйстве с учетом интенсивности
криптоспоридиозной инвазии;
– разработать методы специфической терапии поросят при криптоспоридиозе
с испытанием новых химиотерапевтических препаратов;
– установить наиболее экономически эффективные методы лечения;
– провести обработку объектов внешней среды против экзогенных стадий
криптоспоридий с применением новейшего средства для дезинвазии,
сравнить его эффективность с общепринятым средством;
– разработать рекомендации по терапии и профилактике криптоспоридиоза
поросят для свиноводческих хозяйств Нечерноземной зоны Северо-
Западного региона РФ.
Научная новизна. Нами впервые установлен криптоспоридиоз поросят в
свиноводческих хозяйствах Нечерноземной зоны Северо-Западного региона РФ
на примере Вологодской области, выявлена степень экстенс- и
интенсинвазированности криптоспоридиями;
впервые изучена сезонная динамика криптоспоридиоза поросят разного
возраста в условиях Северо-Западного региона РФ на примере Вологодской
области;
впервые в регионе проведено изучение контаминации свиноводческих
объектов экзогенными стадиями криптоспоридий;
впервые изучено влияние численности грызунов и их инвазированности
криптоспоридиями на распространение криптоспоридиоза среди поросят;
впервые изучены вопросы патогенеза и клинических признаков при
криптоспоридиозе с учетом интенсивности паразитарной инвазии в условиях
изучаемого региона;
тщательно подобраны и испытаны новейшие кокцидиостатические
препараты с определением их терапевтической и экономической эффективности
при криптоспоридиозе поросят;
проведена обработка свиноводческого объекта против экзогенных стадий
криптоспоридий новейшим средством для дезинвазии и доказана его
эффективность в сравнении с общепринятым дезинфицирующим средством;
на основании полученных данных разработан комплекс оздоровительных и
профилактических мероприятий при криптоспоридиозе поросят в условиях
северо-запада Нечерноземной зоны РФ.
Теоретическая и практическая значимость.
Обобщенные результаты исследований диссертационной работы послужили
основой для разработки методических рекомендаций по борьбе и профилактике –
«Криптоспоридиоз поросят», одобрены научно-техническим Советом Управления
ветеринарии с государственной ветеринарной инспекцией Вологодской области,
протокол №1 от 20.09.2016. Удостоены бронзовой медали ВДНХ 9–12 октября
2019 г.
Данные рекомендации под авторским контролем внедрены и с
положительным эффектом применяются в свиноводческих хозяйствах и
государственных ветеринарных учреждениях Вологодской области.
Материалы диссертации включены и используются в курсе лекций и
лабораторно-практических занятий для студентов факультета ветеринарной
медицины и биотехнологий ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА, факультетов
ветеринарной медицины, ветеринарно-санитарной экспертизы и биоэкологии
ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной
медицины», факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВО «Оренбургский
государственный аграрный университет», факультета биотехнологии и
ветеринарной медицины ФГБОУ ВО «Орловский государственный аграрный
университет».
Методология и методы исследований.
Методологической основой проведенных исследований является
комплексный подход по изучению эпизоотологии, патологического процесса при
криптоспоридиозе поросят в Вологодской области и изыскания эффективных и
экономически выгодных средств лечения больных животных. Основные
результаты изучения данных вопросов послужили фундаментом для разработки
комплекса эффективных мер борьбы с криптоспоридиозом поросят в регионе.
Для проведения исследований нами были применены эпизоотологические,
паразитологические, микробиологические, клинические, морфологические,
гематологические, биохимические и статистические методы, с учетом требований
современной науки и практики.
Личный вклад.
Диссертационная работа представляет результаты 6-летних исследований
автора по вопросам эпизоотологии, патогенеза и клинической картины
криптоспоридиоза, изучению терапевтической и экономической эффективности
антипротозойных препаратов кокцидиостатического действия, разработке
оздоровительных и лечебно-профилактических мероприятий при
криптоспоридиозе поросят в условиях Вологодской области.
Научно-исследовательская работа проводилась на базе факультета
ветеринарной медицины и биотехнологий ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА.
Научное руководство, методическую помощь в анализе, обсуждении и
интерпретации полученных данных оказывал д.в.н., профессор кафедры
эпизоотологии и микробиологии, доцент А.Л. Кряжев.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
В условиях Северо-Западного региона Нечерноземной зоны РФ в
свиноводческих хозяйствах Вологодской области впервые регистрировали
криптоспоридиоз поросят. Экстенсивность инвазии варьировала в пределах 23,8–
57,7% и в среднем составила 40,6%. Интенсивность выделения ооцист
криптоспоридий изменялась (от слабой (+) – в среднем 14,8% до сильной (+++) –
в среднем 6,3%, наиболее часто регистрировали среднюю (++) интенсивность
инвазии – в среднем 19,5%).
Поросята до 1-месячного возраста во все сезоны года были заражены
криптоспоридиями, средняя экстенсинвазированность составила 45,7%.
Значительные подъемы экстенсивности инвазии, регистрировали в весенний
(62,5%) и осенний (58,3%) периоды. При увеличении численности
инвазированных криптоспоридиями поросят, увеличивалась и интенсивность
выделения ооцист криптоспоридий и наоборот.
Поросята разного возраста поражены криптоспоридиями в различной
степени. Первые случаи выделения ооцист с фекалиями обнаруживали в 3-
дневном возрасте (59,1%). В дальнейшем экстенсивность и интенсивность
криптоспоридиозной инвазии нарастает с одновременным увеличением степени
проявления клинической картины диареи. Наиболее инвазированы поросята
первых двух недель жизни (до 72%). С возрастом животных экстенсивность и
интенсивность криптоспоридиозной инвазии снижается, тяжесть течения болезни
ослабевает.
Наибольшая контаминация ооцистами криптоспоридий объектов внешней
среды (полы и стены станков, кормушки, полы проходов) установлена в
свинарнике-маточнике, где в различной степени были контаминированы все
обследуемые объекты (19,4%). С увеличением возраста поросят и переводе их в
свинарники для отъемышей, а в дальнейшем на доращивание, происходит
уменьшение контаминации помещений, в которых содержатся данные возрастные
группы животных (10% и 2,5% соответственно).
В свиноводческих хозяйствах Вологодской области поросята до 2-
месячного возраста помимо криптоспоридий (27,4%) заражены и другими
простейшими, такими как изоспоры (9,4%), балантидии (19,6%) и эймерии
(15,3%).
Установлена высокая корреляционная связь между численностью и
степенью инвазированности ооцистами криптоспоридий серых крыс (Rattus
norvegicus) и степенью инвазированности криптоспоридиями поросят.
Коэффициент корреляции (r) составил 0,97 (Р ≤ 0,05).
Клинические признаки криптоспоридиоза: угнетенность, залеживание,
жажда, диарея, исхудание и другие наступают через 3–4 дня после рождения.
Заболевание протекает в легкой, средней и тяжелой форме. Соответственно им
проявляется степень выраженности клинического симптомокомплекса.
Температура, пульс, дыхание в пределах нормы. При тяжелом течении в период
кризисного состояния наблюдается снижение температуры конечностей, ушей,
носового зеркальца, тахикардия, мышечная дрожь, цианоз слизистых оболочек,
повышение температуры до 40,5 °C. Данная форма болезни заканчивалась
летальным исходом.
Патологоанатомические изменения при криптоспоридиозе поросят
представляются малоспецифичными и визуально характеризуются, в основном,
катарально-геморрагическим воспалением тощего и подвздошного отделов
кишечника. Наиболее выраженные патологоанатомические изменения
наблюдаются в подвздошной кишке, т.е., в месте основной локализации и
развития эндогенных стадий криптоспоридий.
При криптоспоридиозе поросят происходит достоверное снижение
среднесуточных приростов. Среднесуточный прирост в опытной группе поросят,
инвазированных криптоспоридиями за 14 дней составил 0,05 кг по сравнению с
приростами 0,16 кг в контрольной группе здоровых животных.
При криптоспоридиозе у поросят регистрируются достоверные
морфологические и биохимические изменения показателей картины крови,
регистрируемые при низкой степени инвазии и ухудшающиеся по мере ее
увеличения. Среди биохимических показателей – гипопротеинемия за счет
уменьшения числа -глобулинов, гипогликемия, уменьшение количества кальция
и фосфора. Происходит рост - и - глобулинов, билирубина, мочевины,
холестерина, креатинина, АЛТ, АСТ, а также щелочной фосфатазы. Среди
морфологических изменений достоверными являются снижение гемоглобина и
количества эритроцитов. При анализе лейкограммы установлено повышенное
содержание базофилов, эозинофилов и моноцитов, увеличение количества
нейтрофилов со сдвигом влево, снижение количества лимфоцитов.
Наиболее терапевтически и экономически эффективными при
криптоспоридиозе поросят является применение следующих
химиотерапевтических препаратов. Уникокцид (диклазурил),
экстенсэффективность которого составила 97,7%. Продолжительность диареи у
поросят в результате применения препарата составила 1–3 дня (в среднем 1,6
дней), а величина патентного периода выделения ооцист 3–4 дня (в среднем 3,5
дней). Экономическая эффективность на 1 рубль затрат составила 11,92 руб.
Кокциваль (толтразурил) показал экстенсэффективность 94,7%. Диарея
продолжалась 1–3 дня (в среднем 1,7 дней), величина патентного периода
выделения криптоспоридий была 3–5 дней (в среднем 4,1 дней). Экономическая
эффективность на 1 рубль затрат составила 3,83 руб. Данные подтверждены
производственными испытаниями этих двух препаратов.
При дезинвазии свинарника-маточника, как наиболее контаминированного
ооцистами криптоспоридий из обследованных нами свиноводческих помещений,
значительный эффект был достигнут при применении средства Кенококс. Раствор
гидроксида натрия (стандартный вариант, зачастую применяемый в
животноводческих хозяйствах) оказался малоэффективным против ооцист
криптоспоридий.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Результаты изучения эпизоотических особенностей криптоспоридиоза
поросят, патогенеза и клинической картины, терапевтических и
профилактических мероприятий рекомендуется использовать для оздоровления от
криптоспоридиозной инвазии и в целях дальнейшей профилактики в
свиноводческих хозяйствах общественного и частного секторов Северо-Западного
региона Нечерноземной зоны РФ.
2. Для специфической терапии криптоспоридиоза поросят рекомендуется
применять высокоэффективные препараты Уникокцид (диклазурил) и Кокциваль
(толтразурил) в рекомендуемых апробированных дозировках по ротационной
схеме.
3. Диагностические, терапевтические и профилактические мероприятия при
криптоспоридиозе поросят рекомендуется осуществлять согласно рекомендаций
по борьбе и профилактике «Криптоспоридиоз поросят», которые утверждены и
рекомендованы научно-техническим Советом Управления ветеринарии с
государственной ветеринарной инспекцией Вологодской области 20 сентября
2016 года, протокол № 1. Удостоены бронзовой медали ВДНХ 9 – 12 октября
2019 г.
4. Теоретические и практические положения используются при выполнении
учебных программ в процессе обучения студентов факультета ветеринарной
медицины и биотехнологий ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА, факультетов
ветеринарной медицины, ветеринарно-санитарной экспертизы и биоэкологии
ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной
медицины», факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВО «Оренбургский
государственный аграрный университет», факультета биотехнологии и
ветеринарной медицины ФГБОУ ВО «Орловский государственный аграрный
университет».
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЛТ – аланинаминотрансфераза
АСТ – аспартатаминотрансфераза
АУ СО ВО – автономное учреждение социального обслуживания Вологодской
области
БГКП – бактерии группы кишечной палочки
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека
ГДГ – глутаматдегидрогеназа
ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота
ЖКТ – желудочно-кишечный тракт
ИИ – интенсивность инвазии
ИФА – иммуноферментный анализ
ИЭ – интенсэффективность
ПНИ – психоневрологический интернат
ПЦР – полимеразно-цепная реакция
ПДРФ – полиморфизм длин рестрикционных фрагментов
РАН – Российская академия наук
РНК – рибонуклеиновая кислота
РФ – Российская Федерация
СДГ – сорбитолдегидрогеназа
СОЭ – скорость оседания эритроцитов
СПИД – синдром приобретенного иммунодефицита
ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА – федеральное государственное бюджетное
образовательное учреждение высшего образования «Вологодская
государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина»
ЭИ – экстенсивность инвазии
ЭЭ – экстенсэффективность
ЩФ – щелочная фосфатаза
Публикации автора в научных журналах
Помогаем с подготовкой сопроводительных документов
Хочешь уникальную работу?
Больше 3 000 экспертов уже готовы начать работу над твоим проектом!