Оценка свойств пробиотических и аутопробиотических штаммов лактобацилл разными методами

Бесплатно
Работа доступна по лицензии Creative Commons:«Attribution» 4.0
Кириленко Марина Александровна
Бесплатно
Работа доступна по лицензии Creative Commons:«Attribution» 4.0

ВВЕДЕНИЕ 5
Актуальность темы исследования 5
Степень разработанности темы исследования 6
Цель работы 8
Задачи исследования 8
Научная новизна исследования 9
Теоретическая и практическая значимость 10
Личный вклад автора в проведенное исследование 10
Основные положения диссертации, выносимые на защиту 11
Степень достоверности и апробация результатов исследования 12
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Значение нормальной микробиоты человека для регуляции его
гомеостаза
1.2. Роль лактобацилл в структуре нормального микробиоценоза
кишечника
1.3. Формирование биопленки начальных этапов развития
бактериальных популяций и возможная роль лактобацилл в
образовании биопленки кишечного микробиоценоза
1.4. Использование лактобацилл в составе препаратов для
коррекции дисбактериозов кишечника (пробиотики,
аутотопробиотики) 29
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 45
Штаммы микроорганизмов 45
Микробиологические методы исследования 47
Нефелометрический метод исследования 54
Метод MALDI TOF 55
Получение плодовых тел и сока гриба Шиитаке 59
Статистические методы исследования 61
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 62
ГЛАВА 3. Культивирование микроорганизмов в различных
условиях методом микрокультивирования и чашечным методом
3.1. Выбор оптимального информативного показателя для
характеристики начальных этапов развития бактериальных
популяций в процессе микрокультивирования
3.2. Микрокультивирование пробиотических штаммов
лактобацилл в оптимальных условиях среды
3.3. Микрокультивирование лактобацилл (на примере
L.acidophilus) совместно с отдельными видами микроорганизмов
микробиоты тела человека
3.4. Оценка биосовместимости пробиотического штамма
L.acidophilus и лактобацилл, содержащихся в функциональных
продуктах питания методом микрокультивирования
3.5. Использование метода микрокультивирования при оценке
воздействия природных активных веществ на пробиотические
штаммы лактобацилл
3.6. Оценка биосовместимости лактобацилл (на примере
L.acidophilus) с отдельными представителями микробиоты
кишечника
3.7. Оценка антагонизма лактобацилл (на примере L.acidophilus) с
отдельными представителями микробиоты кишечника 87
ГЛАВА 4. Воздействие антимикробных факторов врожденного
иммунитета на отдельные виды микроорганизмов микробиоты
тела человека
4.1. Использование метода микрокультивирования в оценке
влияния антимикробных факторов защиты слюны на некоторые
пробиотические штаммы лактобацилл 92
4.2. Адаптивное поведение популяций различных видов
микроорганизмов под воздействием антимикробных факторов
защиты слюны 96

4.3. Оценка влияния антимикробных факторов защиты слюны
нефелометрическим методом анализа между чужими и
родственными людьми на лактобациллы 105

ГЛАВА 5. Исследование свойств аутопробиотического комплекса
лактобацилл in vitro
5.1. Получение аутопробиотика, содержащего комплекс живых
лактобацилл
5.2. Метод MALDI TOF как референсный метод для оценки
чистоты аутопробиотических комплексов лактобацилл
5.3. Определение степени биологического сродства
аутопробиотических комплексов у близких родственников разного
возраста
5.4. Масштабирование процесса приготовления молочнокислого
аутопробиотического продукта
5.5. Влияние натуральных биологически активных веществ
лекарственного гриба Шиитаке (Lentinus edodes) на развитие
лактобацилл аутопробиотического комплекса 130
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 137
ВЫВОДЫ 152
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 153
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 154
Приложения 171-180

Материал и методы исследования
Штаммы, использованные в работе. L. аcidophilus – «Лактобактерин» производства
«Биомед» ОАО им. И. И. Мечникова; L. fermentum 90T-C4 – «Лактобактерин» произведства НПО «Микроген»; L. аcidophilus n.v. Ep 317/402 – «Наринэ», ООО «НАРЭКС».
Йогурт «Иммунеле» – L. rhamnosus и L. casei, йогурт «Актимель» – L. casei DN-114001 defensis, йогурт «Bio Баланс» – L. rhamnosus LGG ATCC 53103, «Белая киска» – L. casei.
Музейные штаммы микроорганизмов: Escherichia coli M-17, Staphylococcus aureus N-3, Staphylococcus sp. 1 (S.albus), Staphylococcus sp. 2 (S.citreus), гриб Candida sp., Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella spp., Bacillus subtilis, Shigella flexneri S-50 и Shigella flexneri Rd из коллекции кафедры микробиологии и вирусологии ГБОУ ВПО ИвГМА Минздравсоцразвития России, а так же L. аcidophilus NK 1 ГКНМ No175 (сер. 04 от 22.03.11) из коллекции ФБУН Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии Г.Н. Габричевского.
Lentinus edodes (Шиитаке) – штамм F 280, получен от Tim Straub, компания Pillsbary, Minnesota, USA. Гриб выращен в лабораторных условиях на субстрате из дубовых опилок с добавлением ячменя.
Метод биосовместимости лактобацилл. С этой целью использовали прямой метод биосовместимости при совместном культивировании на плотной питательной среде (Глушанова Н.А., 2005) в модификации (Рац. предл No2507, ИвГМА, 2012). Фламбированный
стеклянный цилиндр погружали во взвесь микробной культуры, затем делали отпечаток на чашке со средой. Далее, отступив на 1-2 мм от ее края, делали отпечаток другой культуры. После подсыхания второго отпечатка чашки инкубировали при температуре 370C в термостате. Биосовместимые культуры развивались совместно в наложенной части культуры.
Метод отсроченного антагонизма лактобацилл. Лактобациллы наносили на поверхность питательной среды, далее культивировали в оптимальных условиях в течение 24 часов. Затем условно-патогенные и патогенные микроорганизмы, наносили на колонии лактобацилл, отступив от ее края на 1-2 мм. Результат учитывали по наличию признаков подавления или задержки роста чувствительной культуры в зоне совместного культивирования.
Метод микрокультивирования в стационарной камере диффузного типа. Способ сборки микрокамеры: 1. На тонкий слой «голодного» агара (6 х 1 мм), помещенного на покровное стерильное стекло, вносили исследуемую культуру. 2. После адгезии клеток поверхность накрывали вторым покровным стеклом меньшего размера. 3. Камеру с трех сторон окантовывали герметизирующей замазкой. 4. С помощью пастеровской пипетки в капиллярную щель между стеклами к слою агара с клетками подводили жидкий питательный бульон. По окончании заполнения камеры герметизирующей замазкой закрывали четвертую сторону микрокамеры.
Нефелометрический метод исследования. В работе использовали калориметр фотоэлектрический концентрационный КФК-2, предназначенный для измерений в диапазоне длины волн 315 – 980 нм, коэффициентов пропускания и оптической плотности жидкостных растворов и твердых тел, а также определения концентрации веществ в растворах.
М е т о д M A L D I T O F . Масс-спектры MALDI TOF снимали на масс-спектрометре Shimadzu фирмы Biotech Axima в режиме положительных ионов с использованием в качестве матриц DHB (2,5-дигидроксибензойная кислота), CHCA (α-циано-4-гидроксикоричная кислота).
Статистическую обработку результатов проводили с применением параметрических и непараметрических методов с помощью пакета статистических программ Excel (Windows 2007), Statistica 13, в частности, по t-критерию Стьюдента. Достоверность различий между средними показателями рассматривали как значимые при р <0,05. Для вариационных рядов рассчитывали коэффициент вариации (CV) по формуле CV = 100*(σ/хср.) %.

Актуальность темы исследования
Организм человека содержит триллионы микроорганизмов, общее
количество которых более чем в 10 раз превышает число его собственных
клеток, при этом общая масса всей микробиоты человека составляет от 1 до
3% массы его тела. Видовое разнообразие микробиоты измеряется
четырехзначным числом (более 1000 видов), а совокупное количество ее
генов (микробиом) – семизначным (около 3,3 млн. генов), превышая по
численности геном человека в 150 раз [92]. Среди биотопов человека
кишечник имеет особое значение, поскольку около 70% микроорганизмов,
населяющих организм человека, обитают в толстой кишке, которая
выполняет важнейшие функции, такие как адсорбция, секреция электролитов
и воды, поддержание гомеостаза и многие другие [116].
Проблемы становления, формирования и функционирования
нормальной микробиоты человека, а также возможности ее восстановления
после нарушений различной степени тяжести, издавна являются важными в
микробиологических исследованиях. Эта микробиота чрезвычайно важна для
сохранения гомеостаза организма, повышения устойчивости во внешней
среде. Все это достигается как за счет антагонистической функции
нормальной микробиоты по отношению к патогенам, так и опосредованно
через включение механизмов иммунной системы. [38, 59].
Особую роль в поддержании гомеостаза организма играет нормальная
микробиота кишечника. Это одна из наиболее заселенных экологических
ниш макроорганизма, где, по различным данным, живет от 200 до 500
различных видов микроорганизмов. Одной из наиболее значимых групп
микроорганизмов кишечника являются лактобациллы, широко используемые
в качестве пробиотических препаратов для коррекции дисбактериозов
человека [112, 135].
Лактобациллы и их роль, а также использование, особенно для
коррекции дисбактериозов кишечника человека, являются одной из наиболее
обсуждаемых проблем при оценке значимости микробиоты
макроорганизмов. В последние годы появилось много новых лекарственных
препаратов с различными штаммами лактобацилл. Вместе с тем отмечается,
несмотря на высокий терапевтический эффект, последующая элиминация из
кишечника внесенных лактобацилл, входящих в состав примененного
препарата. Причины и механизмы данного явления до настоящего времени
не вполне расшифрованы [10].
Как известно, исследование бактериальной популяции возможно на
трех уровнях организации биологической системы: клеточном, клеточно-
популяционном и популяционном.
На клеточном уровне изучаются отдельные клетки, их
морфофизиологические особенности роста и развития в различных условиях
среды культивирования [133].
На клеточно-популяционном уровне учитывается гетерогенность
клеточной популяции по различным свойствам составляющих популяции
клеток, а также причины возникновения этой гетерогенности.
На популяционном уровне изучается динамика поведения микробных
популяций в целом и особенности взаимодействия популяций
микроорганизмов между собой при совместном культивировании [143].
Степень разработанности темы исследования
За последние десятилетие достигнуты значительные успехи в
разработке и применении пробиотических продуктов и препаратов на основе
лактобацилл. Однако с расширением спектра показаний для назначения
пробиотиков стала накапливаться информация, что положительный эффект
даже при длительном применении нередко носит временный характер или
полностью отсутствует. Появились отдельные сообщения о возникновении у
лиц, длительно принимающих живые пробиотические микроорганизмы,
различных осложнений 110, 139. Разработка новых пробиотиков активно
продолжается, и исследования в этом направлении являются
перспективными для обеспечения человека новыми биологическими
препаратами. 123.
Одной из главных причин неэффективности пробиотиков является
чужеродность для человека входящих в их состав микроорганизмов.
Клинико–экспериментальные работы по коррекции дисбактериозов показали,
что лучший эффект достигается либо при индивидуальном подборе
донорских штаммов, либо при использовании собственной микробиоты .
Длительное использование аутоштаммов лактобацилл позволяет достигать
максимального эффекта при восстановлении нормальной микробиоты
кишечника. Создание общедоступных технологий выделения аутоштаммов
лактобацилл для получения молочнокислых продуктов индивидупльного
получения крайне важно для устранения микроэкологических нарушений
кишечника.
Отечественными исследователями предложен способ получения
аутопробиотиков, содержащих живые бифидобактерии и лактобациллы .
Недостатками данного способа было использование всего по одному штамму
выделенных отдельно бифидобактерий и лактобацилл из всего многообразия
видов этих индигенных микроорганизмов (до 5 видов бифидобактерий и
более 10 видов лактобацилл). Кроме того, при данном способе выделения
аутоштаммов велика вероятность того, что выделенные культуры являются
клонами чужеродных для хозяина микроорганизмов, случайно попавших в
пищеварительный тракт с пищей и водой, а также возможность случайного
отбора среди культур лактобацилл и бифидобактерий не самых активных в
антагонистическом отношении штаммов.
В последние годы перспективным направлением является разработка
новых технологий выделения аутопробиотиков на основе естественного
комплексного микробиоценоза бифидобактерий и лактобацилл толстой
кишки человека. Полученный аутопробиотик может быть использован для
коррекции дисбактериоза и заболеваний, связанных с нарушениями
нормальной микробиоты кишечника у человека . Поэтому создание
общедоступных технологий выделения аутоштаммов лактобацилл для
получения пробиотиков индивидуального потребления крайне важно для
устранения микроэкологических нарушений кишечника и требует
дальнейшего изучения.
Несмотря на широкое и успешное использование лактобацилл для
коррекции дисбактериоза кишечника [4, 46, 71], морфофункциональные
особенности взаимодействия их со средой обитания, особенно на ранних
стадиях образования колоний, изучены слабо. Однако изучение начальных
стадий образования колоний (до этапа формирования устойчивой биопленки)
чрезвычайно важно, поскольку здесь может быть получен новый материал
для понимания процессов закрепления, функционирования и устойчивости
лактобацилл в составе микробиоценоза кишечника. Вместе с тем
исследования клеточного и клеточно-популяционного уровней протекания
биологических процессов, несомненно, даст основу для понимания
популяционных взаимодействий лактобацилл и другой микробиоты в
сложной структуре микробиоценоза кишечника при культивировании в
различных условиях.
Цель работы: оценить свойства аутопробиотического комплекса
лактобацилл с использованием различных методов исследования бактерий.
Для достижения выше указанной цели были поставлены следующие
задачи:
Задачи исследования:
1. Определить наиболее информативный физиологический показатель
состояния клеток лактобацилл на различных уровнях развития (клеточном,
видовом и популяционном).
2. Установить межвидовую биосовместимость лактобацилл и оценить
влияние условно-патогенной микробиоты на представителей рода
Lactobacillus.
3. Оценить действие природных биологически активных веществ на
различные штаммы лактобацилл.
4. Изучить влияние иммунных факторов слюны на клетки лактобацилл
in vitro.
5. Разработать способ выделения аутоштаммов лактобацилл, выбрать
методы оценки степени чистоты и сохранения жизнеспособности культур
полученного аутопробиотического комплекса для контроля его качества.
6. Сравнить аутопробиотические комплексы кишечника родственников
разного возраста для их возможного использования внутри семейной группы.
Научная новизна исследования
Установлен физиологический показатель, позволяющий
охарактеризовать состояние популяции лактобацилл на клеточном уровне –
время генерации для первого и второго поколений клеток. Наиболее
информативным показателем оказалось время размножения клеток
лактобацилл второго поколения, в котором зафиксирован жизненный цикл
отдельной клетки.
Показано, что пробиотические штаммы лактобацилл обладали
различным спектром антагонистической активности как в отношении друг
друга, так и в отношении штаммов условно-патогенной микробиоты
кишечника человека. Информация о биосовместимости культур необходима
при конструировании новых биопрепаратов (про- и симбиотиков) для
коррекции дисбиотических нарушений кишечной микробиоты.
Выявлено, что пробиотические лактобациллы, обладавшие
антагонистической активностью, идентичны у генетически близких
родственников.
Впервые установлено, что биологически активные вещества сока и
порошка гриба Шиитаке на 40 – 75% стимулируют рост лактобацилл.
На основании полученных данных при изучении свойств лактобацилл
разными методами разработан новый аутопробиотический комплекс (АПК).
Доказано, что лактобациллы аутопробиотического комплекса при минус
20 °С в условиях длительного хранения (24 месяца) не снижали
жизнеспособность.
Теоретическая и практическая значимость
Изучены биологические особенности развития лактобацилл при
различных (оптимальных и экстремальных) условиях культивирования.
Получены данные о межвидовых взаимоотношениях лактобацилл на
клеточном и популяционном уровнях, расширяющие представления об их
симбиотических взаимодействиях с условно-патогенными
микроорганизмами и нормальной микробиотой кишечника человека, что
явились основой разработки аутопробиотического комплекса.
Установлена длительность хранения лактобацилл без потери их
жизнеспособности и активности на протяжении не менее двух лет в условиях
низкой температуры (минус 20 °C). Это в перспективе может стать основой
для создания криобанка аутоштаммов при получении продуктов
индивидуального потребления.
Показана перспективность использования натуральных биологически
активных компонентов гриба Шиитаке для стимуляции роста лактобацилл в
пробиотических препаратах и аутопробиотических комплексах.
По результатам проведенных исследований получены патенты РФ
«Способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерии и
лактобациллы» 2014 г. и «Способ получения препарата эубиотика
Лактобактерин с добавлением сока или порошка гриба Шиитаке» 2018 г.
На основании полученных данных издано и используется в курсе
лекций учебное пособие для студентов «Дисбактериоз кишечника. Причины,
симптомы, современная диагностика и эффективное лечение», 2016 г.

Личный вклад автора в проведенное исследование

Личный вклад соискателя состоит в непосредственном участии на всех
этапах диссертационного исследования. Основная идея и планирование
научной работы, формулировка цели и задач, определение методологии и
общей концепции диссертационного исследования проводились совместно с
научным руководителем д.б.н. Кузнецовым О.Ю. Лично автором выполнены
микробиологические и нефелометрические исследования, а также анализ
полученных масс-спектров методом MALDI TOF. Данные, полученные в ходе
выполнения работы, статистически обработаны и проанализированы автором.
Методология и методы исследования
Объектами исследования являлись пробиотические и
аутопробиотические штаммы лактобацилл.
Предметом исследования были физиологические свойства разных
лактобацилл и оригинального аутопробиотического комплека (показатели
размножения, антагонизм, биосовместимость и др.).
Теоретической основой исследований стали литературные сведения о
фундаментальных и прикладных разработках в области микробиологии и
микроэкологии.
Методологической основой работы являлись бактериологические
методы (культивирование, микрокультивирование, тестирование на
антагонизм), инструментальные методы исследования (нефелометрия,
MALDI TOF), статистический анализ и другие специальные методы.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Время деления клеток второго поколения, установленное методом
микрокультивирования, характеризует физиологическое состояние
лактобацилл в норме и при измененных условиях выращивания, а также под
влиянием других бактериальных культур на клеточном и популяционном
уровнях.
2. Разработанный способ выделения, накопления и хранения комплекса
лактобацилл служит основой для получения пробиотика индивидуального
потребления, предназначенного для восстановления микробиоценоза
человека.
3. Метод MALDI TOF может быть использован для быстрого
определения чистоты выделенного АПК (отсутствие посторонних
бактериальных контаминантов) при исследовании групп близких
родственников: детей и взрослых.
4. Биологически активные вещества (сок и порошок) гриба Шиитаке
стимулируют рост лактобацилл при культивировании пробиотических
штаммов.
Степень достоверности и апробация результатов исследования

Достоверность научных положений и выводов, представленных в
работе, подтверждается применением широкого спектра сертифицированных
микробиологических методов, характеризующихся высокой
воспроизводимостью, чувствительностью и специфичностью, а также
адекватным статистическим анализом полученных данных.
Результаты проведенных исследований доложены на 92-ой ежегодной
научно – практической конференции студентов и молодых ученых «Неделя
науки», посвященной 110-летию со дня рождения профессора С.Д. Носова (г.
Иваново, 2012); Молодежном научно-инновационном конкурсе «УМНИК
2013», I этап (г. Иваново, 2013); II этап (г. Ярославль 2013).
Апробация диссертации состоялась на совместном заседании кафедр
микробиологии и вирусологии с другими кафедрами ФГБОУ ВО ИвГМА
Минздрава России (протокол № 2 от 28 апреля 2021 г.).
Объем и структура диссертации
Текст диссертации изложен на 180 страницах компьютерного текста и
состоит из введения, обзора литературы, четырех глав собственных
исследований, содержащих описание объектов и методов исследования,
заключения, выводов, списка сокращений и библиографического указателя,
включающего 80 работ отечественных и 76 работ зарубежных источников.
Работа иллюстрирована 15 рисунками и 17 таблицами.

Заказать новую

Лучшие эксперты сервиса ждут твоего задания

от 5 000 ₽

Не подошла эта работа?
Закажи новую работу, сделанную по твоим требованиям

    Нажимая на кнопку, я соглашаюсь на обработку персональных данных и с правилами пользования Платформой

    Читать

    Читать «Оценка свойств пробиотических и аутопробиотических штаммов лактобацилл разными методами»

    Публикации автора в научных журналах

    М. А. Сафонова, О. Ю. Кузнецов // Вестник Ивановской медицинской академии. – 2– Т. 17, No – С. 16
    М.А. Кириленко, О. Ю. Кузнецов // Известия Иркутского государственного университета. Серия «Биология. Экология». – 2– Т. – С. 56
    Влияние конструктивных особенностей̆ микрокамер на адаптивное поведение бактериальных клеток при образовании микроколоний
    М. А. Сафонова, О. Ю. Кузнецов // 75-итоговая студенческая научно-практическая конференция с международным участием, посвященная 80-летию со дня рождения академика Б.С. Гракова. – Красноярск, 2– С. 148
    Оценка информативности показателей̆ развития бактериальных клеток при микрокультивировании
    М. А. Сафонова, О. Ю. Кузнецов // Материалы 91-й ежегодной научно-практической конференции студентов и молодых ученых ИвГМА «Неделя науки – 2011». – Иваново, 2– С. Сафонова, М. А. Пробиотические препараты для коррекции микроэкологических нарушений кишечника / М. А Сафонова, О. Ю. Кузнецов // Вестник Ивановской медицинской академии. – 2– Т. 17, No – С. 49
    Микрокультивирование клеток на начальных этапах развития бактериальной̆ популяции
    М. А. Сафонова, О. Ю. Кузнецов // Итоговая Всероссийская студенческая научная конференция с международным участием «Татьянин день». – М., 2– С. 123
    Антагонизм пробиотических лактобацилл в отношении определенных представителей̆ микрофлоры кишечника
    М. А. Сафонова // Всероссийская научная конференция студентов и молодых ученых с международным участием «Медико- биологические, клинические и социальные вопросы здоровья и патологии человека» : матер конф. – Иваново, 2– С. 20
    Оценка биосовместимости микробных культур методом микрокультивирования
    М. А. Сафонова, О. Ю. Кузнецов // Всероссийская научно- практическая конференция по медицинской микробиологии и клинической микологии (XV Кашкинские чтения), с международным участием : тез. докл. // Проблемы медицинской микологии. – 2– Т. - No – С. 126
    Биосовместимость пробиотических штаммов лактобацилл
    М.А. Сафонова, О.Ю. Кузнецов // XXV Международная зимняя молодежная научная школа «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии», посвященная 30-летию научно-образовательного центра ИБХ РАН : тез. докл. – М., 2– Т. – С.
    Влияние неспецифических факторов защиты близких родственников на развитие лактобацилл
    М. А. Кириленко, О. Ю. Кузнецов // XII областной фестиваль «Молодые ученые – развитию Ивановской области»: Межрегион. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием. – Иваново, 2– Т. – С. 317–21
    Дисбактериоз кишечника. Причины, симптомы, современная диагностика и эффективное лечение
    М.А. Кириленко, О. Ю. Кузнецов // Учебное пособие для студентов, обучающихся по специальностям «Лечебное дело» и «Педиатрия». - Иваново, 2– 66 с.
    Получение аутопробиотического продукта на основе лактобацилл
    М. А. Кириленко, Ж. М. Дмитриева, О. Ю. Кузнецов // Материалы III Национального конгресса бактериологов в рамках XI съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (ВНОЭМП) // Бактериология. – 2– Т. - No – С.
    Использование метода MALDI TOF для сертификационного контроля молочнокислого продукта на основе живых аутопробитических микроорганизмов
    М. А. Кириленко, О. Ю. Кузнецов // Материалы III Национального конгресса бактериологов в рамках XI съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (ВНОЭМП) // Бактериология. – 2– Т. - No – С. 68
    Выбор оптимальной̆ матрицы для оценки масс-спектров аутопробиотического комплекса лактобацилл
    М. А. Кириленко, Ж. М. Дмитриева, К. М. Литов, О. Ю. Кузнецов // IV Всероссийская научная конференция студентов и молодых ученых 22с международным участием. «Медико-биологические, клинические и социальные вопросы здоровья и патологии человека» : матер. конф. – Иваново, 2– С. 371
    Влияние криоконсервации на выживаемость комплекса аутошаммов лактобацилл при хранении и процессах биотехнологического масштабирования
    М. А. Кириленко, О. Ю. Кузнецов, Ж.М. Дмитриева // Вестник биотехнологии и физико- химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. – 2– Т. - No - С. 5
    Влияние кислотности среды на жизнеспособность пробиотических лактобацилл
    М.А. Кириленко, О. Ю. Кузнецов, А.П. Калмыкова // XVII Областной фестиваль «молодые ученые – развитию ивановской области» VII Всероссийская научная конференция студентов и молодых ученых с международным участием «Медико- биологические, клинические и социальные вопросы здоровья и патологии человека». – 2– С. 188

    Помогаем с подготовкой сопроводительных документов

    Совместно разработаем индивидуальный план и выберем тему работы Подробнее
    Помощь в подготовке к кандидатскому экзамену и допуске к нему Подробнее
    Поможем в написании научных статей для публикации в журналах ВАК Подробнее
    Структурируем работу и напишем автореферат Подробнее

    Хочешь уникальную работу?

    Больше 3 000 экспертов уже готовы начать работу над твоим проектом!

    user1250010 Омский государственный университет, 2010, преподаватель,...
    4 (15 отзывов)
    Пишу качественные выпускные квалификационные работы и магистерские диссертации. Опыт написания работ - более восьми лет. Всегда на связи.
    Пишу качественные выпускные квалификационные работы и магистерские диссертации. Опыт написания работ - более восьми лет. Всегда на связи.
    #Кандидатские #Магистерские
    21 Выполненная работа
    Екатерина С. кандидат наук, доцент
    4.6 (522 отзыва)
    Практически всегда онлайн, доработки делаю бесплатно. Дипломные работы и Магистерские диссертации сопровождаю до защиты.
    Практически всегда онлайн, доработки делаю бесплатно. Дипломные работы и Магистерские диссертации сопровождаю до защиты.
    #Кандидатские #Магистерские
    1077 Выполненных работ
    Юлия К. ЮУрГУ (НИУ), г. Челябинск 2017, Институт естественных и т...
    5 (49 отзывов)
    Образование: ЮУрГУ (НИУ), Лингвистический центр, 2016 г. - диплом переводчика с английского языка (дополнительное образование); ЮУрГУ (НИУ), г. Челябинск, 2017 г. - ин... Читать все
    Образование: ЮУрГУ (НИУ), Лингвистический центр, 2016 г. - диплом переводчика с английского языка (дополнительное образование); ЮУрГУ (НИУ), г. Челябинск, 2017 г. - институт естественных и точных наук, защита диплома бакалавра по направлению элементоорганической химии; СПХФУ (СПХФА), 2020 г. - кафедра химической технологии, регулирование обращения лекарственных средств на фармацевтическом рынке, защита магистерской диссертации. При выполнении заказов на связи, отвечаю на все вопросы. Индивидуальный подход к каждому. Напишите - и мы договоримся!
    #Кандидатские #Магистерские
    55 Выполненных работ
    Татьяна П.
    4.2 (6 отзывов)
    Помогаю студентам с решением задач по ТОЭ и физике на протяжении 9 лет. Пишу диссертацию на соискание степени кандидата технических наук, имею опыт годовой стажировки ... Читать все
    Помогаю студентам с решением задач по ТОЭ и физике на протяжении 9 лет. Пишу диссертацию на соискание степени кандидата технических наук, имею опыт годовой стажировки в одном из крупнейших университетов Германии.
    #Кандидатские #Магистерские
    9 Выполненных работ
    Анна Н. Государственный университет управления 2021, Экономика и ...
    0 (13 отзывов)
    Закончила ГУУ с отличием "Бухгалтерский учет, анализ и аудит". Выполнить разные работы: от рефератов до диссертаций. Также пишу доклады, делаю презентации, повышаю уни... Читать все
    Закончила ГУУ с отличием "Бухгалтерский учет, анализ и аудит". Выполнить разные работы: от рефератов до диссертаций. Также пишу доклады, делаю презентации, повышаю уникальности с нуля. Все работы оформляю в соответствии с ГОСТ.
    #Кандидатские #Магистерские
    0 Выполненных работ
    Егор В. кандидат наук, доцент
    5 (428 отзывов)
    Здравствуйте. Занимаюсь выполнением работ более 14 лет. Очень большой опыт. Более 400 успешно защищенных дипломов и диссертаций. Берусь только со 100% уверенностью. Ск... Читать все
    Здравствуйте. Занимаюсь выполнением работ более 14 лет. Очень большой опыт. Более 400 успешно защищенных дипломов и диссертаций. Берусь только со 100% уверенностью. Скорее всего Ваш заказ будет выполнен раньше срока.
    #Кандидатские #Магистерские
    694 Выполненных работы
    Евгения Р.
    5 (188 отзывов)
    Мой опыт в написании работ - 9 лет. Я специализируюсь на написании курсовых работ, ВКР и магистерских диссертаций, также пишу научные статьи, провожу исследования и со... Читать все
    Мой опыт в написании работ - 9 лет. Я специализируюсь на написании курсовых работ, ВКР и магистерских диссертаций, также пишу научные статьи, провожу исследования и создаю красивые презентации. Сопровождаю работы до сдачи, на связи 24/7 ?
    #Кандидатские #Магистерские
    359 Выполненных работ
    Родион М. БГУ, выпускник
    4.6 (71 отзыв)
    Высшее экономическое образование. Мои клиенты успешно защищают дипломы и диссертации в МГУ, ВШЭ, РАНХиГС, а также других топовых университетах России.
    Высшее экономическое образование. Мои клиенты успешно защищают дипломы и диссертации в МГУ, ВШЭ, РАНХиГС, а также других топовых университетах России.
    #Кандидатские #Магистерские
    108 Выполненных работ
    Шагали Е. УрГЭУ 2007, Экономика, преподаватель
    4.4 (59 отзывов)
    Серьезно отношусь к тренировке собственного интеллекта, поэтому постоянно учусь сама и с удовольствием пишу для других. За 15 лет работы выполнила более 600 дипломов и... Читать все
    Серьезно отношусь к тренировке собственного интеллекта, поэтому постоянно учусь сама и с удовольствием пишу для других. За 15 лет работы выполнила более 600 дипломов и диссертаций, Есть любимые темы - они дешевле обойдутся, ибо в радость)
    #Кандидатские #Магистерские
    76 Выполненных работ

    Последние выполненные заказы

    Другие учебные работы по предмету

    Анализ формирования и микроструктуры биопленок Azospirillum baldaniorum
    📅 2022 год
    🏢 ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии»
    Сульфатредуцирующие и нефтеокисляющие бактерии донных отложений северной части Японского моря
    📅 2022 год
    🏢 ФГБУН Пермский федеральный исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук
    Гены-регуляторы синтеза экзополисахаридов в формировании биопленок Rhizobium leguminosarum
    📅 2022 год
    🏢 ФГБУН Пермский федеральный исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук
    Поиск новых свойств эндофитных бактерий Bacillus subtilis Cohn.
    📅 2021 год
    🏢 ФГБУН Пермский федеральный исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук
    Молекулярно-генетический и биоинформационный скрининг вирулентных бактериофагов Staphylococcus aureus на основе анализа CRISPR/Cas-системы бактерии
    📅 2021 год
    🏢 ФГБУН Пермский федеральный исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук
    Конъюгативный перенос производной F-плазмиды в клетки штаммов экстраинтестинальной Escherichia coli
    📅 2021 год
    🏢 ФГБУН Пермский федеральный исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук
    Новые рекомбинантные белки – антигены TREPONEMA PALLIDUM для серологической диагностики сифилиса
    📅 2021 год
    🏢 ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации
    Оптимизация микробиологической диагностики инфекционных осложнений, вызванных нетуберкулезными микобактериями, у пациентов с муковисцидозом
    📅 2022 год
    🏢 ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации