Разработка, фармако-токсикологические свойства и эффективность применения кормовой добавки Селевит при выращивании цыплят-бройлеров
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Анатомические и биологические особенности
сельскохозяйственной птицы
1.2 Дрожжи как источник белка и каротиноидов
1.3 Применение минеральных сорбентов в животноводстве и
птицеводстве
1.4 Современные представления о применении селена и его
препаратов в животноводстве и их роли в организме животных
иптиц
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3 СОБСТВЕННЫЕИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Биотехнология получения и оценка качества комплексной
кормовой добавки
3.1.1 Исследование штамма-продуцента и оптимизация состава питательнойсреды
3.1.2Подбороптимальныхусловийкультивирования
3.1.3 Исследование качественных характеристик и материаловедческая аттестация используемого в работе ультрадисперсного селена
3.1.4 Определение биологической активности ультрадисперсного селена
3.1.5 Технология получения комплексной кормовой добавки
3.1.6 Состав и качественные характеристики комплексной кормовойдобавкиСелевит
3.2 Токсикологическая оценка кормовой добавки Селевит
3.2.1 Общая токсичность
3.2.2 Острая токсичность
3.2.3 Субхроническая токсичность
3.3
3.4
3.2.4 Влияние кормовой добавки Селевит на процессы
пищеварения и мочеотделения
3.2.5Местно-раздражающеедействие
3.2.6 Ветеринарно-санитарная оценка мяса цыплят-бройлеров
после применения кормовой добавки Селевит
Фармакологические свойства кормовой добавки Селевит
3.3.1 Определение оптимальных доз кормовой добавки и ее
влияние на рост и сохранность птицы
3.3.2 Влияние кормовой добавки на качественные характеристики мяса
3.3.3 Влияние на морфо-биохимические показатели крови
Производственные испытания и оценка экономической
3
эффективности применения кормовой добавки Селевит
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
Работа выполнялась с 2013 по 2021 год на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Кубанского ГАУ. Специализированные лабораторно- аналитические работы проводились в лабораториях кафедры, НИИ биотех- нологии и сертификации пищевой продукции, отделе фармакологии Красно- дарского НИВИ.
В работе применялись химические, микробиологические, биотехноло- гические, токсикологические, физиологические, биохимические, морфоло- гические и другие методы исследований.
Объектом исследования послужила комплексная кормовая добавка Се- левит, полученная путем микробиологического синтеза с применением куль- туры каротинсинтезирующих дрожжей Rhodotorula glutinis выращенных на питательной среде, содержащей ультрадисперсный селен, и иммобилизиро- ванная на минеральном наполнителе – перлите.
Наработка биомассы пигментных дрожжей Rhodotorula glutinis Y-358 осуществлялась путем глубинной жидкофазной ферментации на производст- венной установке «ОКА МФ-100», предназначенной для культивирования микроорганизмов и биосинтеза.
Материаловедческая аттестация ультрадисперсного селена была про- ведена в межкафедральном ресурсном центре коллективного пользования (МРЦКП) Донского государственного технического университета (г. Ростов- на-Дону). Исследовался размер частиц, объемность, полидисперсность, ко- личественное содержание фракций, площадь поверхности. В работе приме- нялась сканирующая туннельная микроскопия (СТМ).
Определение биологической активности различных концентраций ультрадисперсного селена проведено в эксперименте in vitro в тесте по оцен- ке интенсивности роста модельного тест-объекта – зеленой фотосинтези- рующей водоросли Chlorella vulgaris Beijer.
Качество полученной кормовой добавки контролировалось по органо- лептическим, физико-химическим и микробиологическим показателям, та- ким как внешний вид, цвет, запах (ГОСТ 20264.1-89); массовая доля влаги (ГОСТ 13496.3-92); содержание азота, белка, жира, золы (ГОСТ 13496.4-93; ГОСТ 13496.15-97; ГОСТ 26226-95); содержание каротиноидов и каротина (ГОСТ 13496.17-95); содержание тяжелых металлов и токсичных элементов (кадмий, свинец, ртуть, мышьяк, селен) – МУК 4.1.986-2000; МУК 4.1.986- 2000, ГОСТ 26927-86; ГОСТ Р 51766-2001; ГОСТ 31651-2012; наличие или отсутствие мезофильных анаэробных и факультативно анаэробных микроор- ганизмов (ГОСТ 10444.15-94); наличие плесневых грибов (ГОСТ 10444.12- 88); бактерий рода Salmonella (ГОСТ 52814-2007); бактерий группы кишеч- ной палочки (ГОСТ Р 52816-2007).
Токсикологическая оценка кормовой добавки проводилась в соответ- ствии с «Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренными секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1988), и «Научно- методологическими аспектами исследования токсических свойств фармако- логических лекарственных средств для животных» (Смирнов А. М., Дорож- кин В. И., 2008).
Оценку острой токсичности проводили в двух сериях экспериментов на клинически здоровых лабораторных белых крысах и сельскохозяйствен- ной птице путем однократного введения кормовой добавки в полость желуд- ка/зоба с помощью атравматического зонда в максимальных для данного способа введения дозах в соответствии с требованиями, предъявляемыми к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания жи- вотных в период проведения работы и учета результатов.
Субхроническую токсичность определяли согласно «Методическим указаниям по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и
профилактики незаразных болезней животных» (ВНИВИПФиТ, Воронеж, 1987).
Раздражающее действие Селевита изучали на кроликах методом на- кожных аппликаций и конъюнктивальной пробой (Степанский Г. А., 1966, Хмельницкий Г. А. и др., 1987).
Функциональное состояние пищеварительной и мочевыделительной систем при скармливании кормовой добавки Селевит оценивали по физико- химическим и биохимическим показателям мочи и фекалий лабораторных крыс.
Исследование фармакологических свойств и определение экономиче- ски наиболее эффективной дозировки и схемы применения кормовой добав- ки осуществлялось в научно-хозяйственном опыте на суточных цыплятах- бройлерах (n = 200) кросса РОСС-308 в соответствии с принятыми зоотехни- ческими нормами (воздухообмен, освещение, температура, влажность возду- ха, плотность посадки), согласно схеме, представленной в таблице 1.
Критериями эффективности кормовой добавки являлась оценка живой массы цыплят, мясная продуктивность, а также сохранность поголовья птицы.
Таблица 1 – Схема опыта (n = 40)
Группа Контрольная 1-я опытная 2-я опытная 3-я опытная 4-я опытная
Условия кормления Полнорационный комбикорм (ОР) ОР + 0,5 % Селевита
ОР + 1,0 % Селевита Комбикорм (ОР) + 1,5 % Селевита Комбикорм (ОР) + 2,0 % Селевита
Состояние цыплят-бройлеров и качество мясной продукции после употребления кормовой добавки оценивали по результатам ветеринарно- санитарной экспертизы. Послеубойную ветеринарно-санитарную экспертизу мяса осуществляли согласно утвержденным методикам – по реакции на пе- роксидазу и реакции с сульфатом меди и формалином, количеству летучих жирных кислот, кислотности (pH) мяса (ГОСТ Р 51478-99), обсемененности микроорганизмами (ГОСТ Р 50396.1-92), бактериями рода Salmonella (ГОСТ 52814-2007).
Общий анализ крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе «Mithic 18 vet» (Швейцария). Биохимические показатели сыво- ротки крови исследовали на автоматическом анализаторе Vitalab Selecta Jun- ior производства Vital ScientiFic N.V. (Netherlands) (с версией ПО 1.0). В кро- ви определяли общий белок, содержание мочевины, холестерина, фосфора, кальция, активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатами- нотрансферазы (АсАТ), витамин А, β-каротин.
Определение химического состава мышечной ткани с целью оценки биологической полноценности и питательности мяса проводили по следую-
щим методикам: отбор проб осуществляли по ГОСТ 9792-73; содержание влаги и сухих веществ – по ГОСТ Р 51479-99; содержание жира – по ГОСТ 23042-78; количество белка – по ГОСТ 25011-81.
Химический анализ кормов и продуктов вторичного метаболизма пти- цы проводили по следующим методикам: отбор проб – по ГОСТ 26712-94; содержание: влаги ‒ по ГОСТ 13496.3-92; азота и сырого протеина – по ГОСТ 13496.4-93; сырого жира – по ГОСТ 13496.15-97; сырой золы – по ГОСТ 26226-95; сырой клетчатки ‒ по ГОСТ 13496.2-91.
Расчет экономической эффективности использования кормовой добав- ки в рационе цыплят-бройлеров проводили с учетом стоимости расхода кор- мов и добавок на 1 кг прироста живой массы. Все результаты исследований обрабатывали биометрическими методами математической статистики по- средством использования стандартных и математических функций. Стати- стически достоверными считали различия при р<0,05.
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Биотехнология получения и оценка качества комплексной кормовой добавки Селевит
В качестве объекта исследований использовали штамм пигментных дрожжей Rhodotorula glutinis Y-358. Экспериментально определен максимум прироста биомассы, составляющий 9,8 г/л биомассы в пересчете на сухое вещество, наблюдаемый через 48 ч культивирования, достигающий к 72 ч стационарной фазы.
Установлены культуральные морфо-физиологические признаки иссле- дуемого штамма на сусло-агаре: клетки овальной формы располагаются одиночно или сгруппированы в короткие цепочки. Размер клеток 2,5–8 мкм. Спор не образуют, делятся почкованием, перетяжкой.
Определены особенности роста штамма на агаризованных средах: аэ- роб, колонии розово-оранжевого цвета, имеют округлую форму с ровными краями, гладкие, диаметр колоний 10–12 мм; на жидких питательных средах штамм образует пленку, кольцо и осадок через 72–96 ч культивации. Темпе- ратурный оптимум роста 28–32 оС, оптимальный рН 5–6,5.
Проведен сравнительный анализ питательных сред. В качестве пита- тельной среды отобран как наиболее дешевый и оптимальный субстрат мо- дифицированная среда: меласса 4 % по сахару; содержание (кг/л) – MgSO4∙7Н2О – 0,002; К2НРО4 – 0,003; Na2НРО4 – 0,003; пептон – 0,002; (NH4)2SO4 – 0,004; NH4NO3 – 0,002; карбамид – 0,01.
Подобран комплекс микроэлементов (представлен растворимыми не- органическими солями Cu, Co, Mn, Zn, Mo, Fe, I), способный увеличивать выход биомассы и каротиноидов у используемого в работе штамма на 16,84 и 21,08 % соответственно в сравнении с контролем.
В результате проведенных исследований определены оптимальные ус- ловия культивирования маточной и засевной культур штамма-продуцента. Подобраны оптимальные условия культивирования штамма-продуцента:
– температура культивирования 28 °С;
– аэрация 2,0–2,5 л/л/мин;
– скорость вращения мешалки 150–200 об/мин; – рН 6,8–7,2;
– подтитровка 5 % раствором гидроксида калия; – время культивирования 72 ч.
Наработана биомасса с титром клеток 6,0–6,5∙107 КОЕ.
Результаты подбора режимов культивирования Rhodotorula glutinis Y-358 дают хорошую воспроизводимость, что позволит в дальнейшем мас- штабировать ферментационный процесс на установках большего объема (от
1000 л и более).
В работе использовался ультрадисперсный препарат селена производ-
ства ООО «Платина» (Россия, г. Москва), имеющий следующие характери- стики Se: d = 30±10 нм; Z-потенциал 31±0,1 мВ; Sпов= 6 м2/г.
Результатами материаловедческой экспертизы ультрадисперсного се- лена установлено, что преимущественный размер частиц в исследуемом об- разце составляет 20–30 нм. Получены изображения поверхности ультрадис- персного препарата.
Определение биологической активности ультрадисперсного селена по- казало его незначительную биотоксичность в концентрации 20 мкг/мл, а также отсутствие ингибирующего действия в концентрациях 10 мкг/мл и ниже, что делает возможным применение ультрадисперсного селена в каче- стве компонента кормовой добавки в невысоких (0,62–510 мкг/мл) концен- трациях.
Для получения кормовой добавки Селевит использовали культуру пигментных каротинсинтезирующих дрожжей Rhodotorula glutinis Y-358, ультрадисперсный селен и стерильный минеральный наполнитель – вспу- ченный перлит. Добавке придавали товарную форму путем ее щадящего вы- сушивания при температуре 40 оС в течение 5 ч до влажности 10–12 %, по- сле чего расфасовывали и упаковывали.
3.2 Состав и качественные характеристики комплексной кормовой добавки Селевит
Кормовая добавка Селевит – инновационная кормовая добавка, свой- ства которой определяются свойствами компонентов, входящих в ее состав и выполняющих определенные функции. Компонентный состав делает Селе- вит источником пребиотиков, витаминов, минералов, микроэлементов и та- ких антиоксидантов, как селен, β-каротин и каротиноиды; минеральный на-
полнитель перлит придает Селевиту сорбирующие и антитоксические свой- ства.
Селевит представляет собой сыпучий порошок от светло-кремового до кремово-оранжевого цвета с приятным запахом. Готовую форму добавки по- лучают путем иммобилизации концентрированной биомассы нативных каро- тинсинтезирующих дрожжей с титром клеток не менее 1,5∙108 КОЕ, обога- щенных селеном, на стерильный минеральный субстрат (вспученный перлит). Качественные показатели исследуемой добавки представлены в таблице 2.
Таблица 2 – Качественные характеристики кормовой добавки Селевит
Наименование Характеристика и показателя значение показателя
Нормативный Метод определения документ на метод
определения 1234
Органолептические показатели
Физико-химические показатели
Внешний вид, цвет запах
Сыпучий порошок, от светло-кремового до кремово-оранжевого цвета с приятным запахом
Методы определения запаха
ГОСТ 20264.1-89
Массовая доля влаги, %
10-12
Метод определения массовой доли влаги
Метод определения содержания сырого жира
Метод определения сырой золы, кальция и фосфора Методы определения каротина Методы определения каротина
ГОСТ 13496.3-92
Азот, %
6,8-7,2
Определение массовой доли азота и вычисление массовой доли сырого протеина
ГОСТ 13496.4-93
Белок, %
38,4-44,5
Определение массовой доли азота и вычисление массовой доли сырого протеина
ГОСТ 13496.4-93
Жир, %
Зола, %
Каротиноиды, мкг/г Каротин, мкг/г
5,2-5,9
18,2-25,4
500-750
50,0-85,0
ГОСТ 13496.17-95
ГОСТ 26226-95
ГОСТ 13496.17-95 ГОСТ 13496.17-95
Тяжелые металлы и токсичные элементы, мг/кг
Кадмий Свинец Ртуть Мышьяк Селен
менее 0,02
менее 0,01 менее 0,002 менее 0,002 0,02-0,04
ААС ААС ААС ААС ААС
МУК 4.1.986-2000 МУК 4.1.986-2000 ГОСТ 26927-86 ГОСТ Р 51766-2001 ГОСТ 31651-2012
11
Продолжение таблицы 2
Микробиологические показатели
Количество жизне- способных микро- организмов, КОЕ/г, не менее
не менее 1,5∙ 108
Микробиологический анализ (подсчет количества клеток)
ГОСТ 10444.15-94
БГКП (наличие) КОЕ/г, не более Плесневые грибы, КОЕ/г, не более Сальмонеллы (на- личие), КОЕ/г,
1,0 2,0
не обнаружены
Методы определения БГКП
Метод определения плесневых грибов
Метод
ГОСТ 9225-84 ГОСТ 10444.12-88
ГОСТ 52814-2007
не более
Анализ результатов биотестирования кормовой добавки Селевит на брюхоресничных инфузориях-стилонихиях показал, что выживаемость про- стейших в опыте с водным и ацетоновым экстрактами составила 92,8 и 90,8 % соответственно, что дает основание согласно требованиям ГОСТ Р 52337-2005 охарактеризовать исследуемую добавку как нетоксичную.
Острую токсичность изучали в двух сериях эксперимента при введе- нии 20 %-й водной взвеси кормовой добавки белым беспородным крысам внутрижелудочно в дозе 5 мл и цыплятам-бройлерам в зоб в дозе 30 мл. Контрольным аналогам в тех же объемах вводили дистиллированную воду.
В ходе эксперимента установлено, что за весь период наблюдений (14 дней) Селевит не вызывал гибели и острой интоксикации животных. Аппетит, рефлексы и поведенческие реакции оставались сохраненными, на- рушений функциональной активности органов пищеварения и мочеотделе- ния не наблюдалось.
В ходе проведенных исследований среднесмертельная (LD50) и мини- мальная (пороговая) (LD0) дозы не установлены, ввиду отсутствия клиниче- ских признаков токсикоза.
Учитывая, что введение кормовой добавки Селевит по величине LD50 в дозах более 5000 мг/кг переносится животными и птицей без видимых по- следствий, она может быть отнесена к 4-му классу опасности – вещества ма- лоопасные (ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества»).
Изучение субхронической токсичности кормовой добавки Селевит проведено в двух сериях экспериментов при ее пероральном введении на ла- бораторных животных (белые нелинейные крысы) и продуктивной птице (цыплята-бройлеры). В первой серии было сформировано четыре группы (n = 10) белых крыс-аналогов с массой тела 120±8,5 г (три опытные и одна контрольная). Крысы опытных групп исследуемую кормовую добавку Селе-
3.3 Токсикологическая оценка кормовой добавки Селевит
выявления
бактерий рода
Salmonella
вит получали ежедневно в виде болюсов (в смеси с вареным яичным желтком) на протяжении 28 дн в дозах: 538 мг (1-я группа); 270 мг (2-я группа) и 108 мг (3-я группа). Крысам четвертой группы к основному рациону добавлялись бо- люсы, состоящие только из вареного желтка.
Вторая серия эксперимента проводилась на четырех группах четырна- дцатидневных цыплят-бройлеров кросса КОББ 500 (три опытные и одна контрольная). Цыплятам опытных групп в течение 28 дней в комбикорма вводили Селевит в количествах, составляющих 1/10, 1/20 и 1/50 от максимальной дозы, полученной в остром эксперименте (6714 мг/кг массы тела), в зависимости от количества потребляемого корма и с учетом прироста массы тела в опытный период. Цыплята контрольной группы на протяжении всего эксперимента получали только комбикорма согласно нормативам кормления.
В ходе первой серии исследований установлено, что длительное перо- ральное введение различных доз Селевита не оказало видимого токсического влияния на организм лабораторных животных, их клиническое состояние и поведенческие реакции, функции органов пищеварения и мочеотделения, анатомическое строение органов и систем организма.
Селевит способствовал улучшению ростовых характеристик крыс, что проявилось в увеличении массы тела животных опытных групп на конец эксперимента на 21,2; 37,3 и 14,4 % (р≤0,01) относительно показателей кон- трольных аналогов.
Изучение морфологического состава крови опытных животных в кон- це эксперимента показало, что все определяемые показатели были сопоста- вимы с аналогичными данными, полученными в группе контроля, и находи- лись в пределах видовой нормы. В биохимическом гомеостазе крови крыс опытных групп отмечено достоверное (р≤0,01, р≤0,05) возрастание общего белка на 5,8–19,5 %, мочевины – на 3,8–13,5 %, глюкозы – на 10,9; 17,9 и 25,6 % по группам соответственно.
Вторая серия опытов подтвердила отсутствие негативного влияния кормовой добавки Селевит на сохранность и ростовые характеристики цып- лят-бройлеров при ее длительном скармливании (таблица 3).
Таблица 3 – Динамика сохранности и массы тела цыплят-бройлеров в субхроническом эксперименте (М±m; n = 10)
Показатель
Проявление симптомов интоксикации, гол.
Пало, гол.
Масса тела в начале опыта, г Масса тела в конце опыта, г Среднесуточный прирост, г
Группа
1-я опытная нет
нет 457,8±5,2 1553,1±8,5 52,1 104,4
2-я опытная нет
нет 461,0±4,4 1576,5±6,8 53,1 106,4
3-я опытная
нет –
Контроль нет –
456,3±4,5 1545,5±6,4*
461,7±5,0 1511,0±7,3
В % к контролю
Примечание: * р≤0,05 степень достоверности
51,8 49,9 103,8 100
13
На протяжении всего опытного периода гибели и клинической карти- ны интоксикации ни в одной из подопытных групп выявлено не было. При этом среднесуточные приросты массы тела опытных цыплят превышали аналогичный показатель у контрольных бройлеров. И если в первой и треть- ей опытных группах значения по суточному приросту были близки, колеб- лясь в границах 3,8–4,4 %, то во второй опытной группе отмечено достовер- ное превышение прироста относительно показателей контроля на 6,4 % (р≤0,05).
Таким образом, длительное скармливание Селевита в субтоксических дозах не оказывает негативного действия на организм опытных крыс и пти- цы, способствует приросту массы тела, сохранности поголовья, а также по- ложительно влияет на динамику ряда биохимических показателей крови.
Результаты комплексного исследования физико-химических и биохи- мических показателей фекалий и мочи крыс после применения кормовой до- бавки Селевит не выявили ее негативного влияния на желудочно-кишечный тракт и мочевыделительную систему лабораторных животных. Все оцени- ваемые показатели как опытных, так и контрольных крыс оставались в пре- делах референсных значений видовой нормы.
Селевит при контакте с кожными покровами не проявляет раздражаю- щих, аллергизирующих и кожно-резорбтивных свойств. При оценке воздейст- вия на слизистые оболочки выявлено его слабовыраженное быстропроходя- щее раздражающее действие.
Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса цыплят-бройлеров после длительного применения кормовой добавки не установила отрицательного влияния Селевита на органолептические, физико-химические и бактерио- скопические показатели. Визуальное обследование тушек контрольной и опытных групп принципиальных отличий во внешних признаках не выявило, выраженных патологоанатомических изменений внутренних органов, свя- занных с нарушением обмена веществ, интоксикацией, а также признаков дистрофических и некробиотических изменений обнаружено не было.
По результатам сернокислой, формольной и пероксидазной проб ис- следуемые образцы мяса характеризовались как свежие. Микробиологиче- ские исследования мазков-отпечатков с поверхности тушек и глубоких мы- шечных слоев показали наличие на поверхности единичных микроорганиз- мов, не относящихся к патогенной микрофлоре; в мышцах микроорганизмов и следов распада мышечной ткани обнаружено не было.
Применение Селевита в опытных группах оказало влияние на увеличе- ние в пределах физиологической нормы концентрации общего белка на 17,4; 25,9 и 19,0 %, мочевины – на 16,7; 26,2 и 19,0 %, глюкозы – на 5,4; 9,6 и 6,5 %, АсАТ – на 9,8; 11,8 и 5,3 % относительно контрольной птицы. По другим пока- зателям существенных различий между опытными и контрольными цыплятами
установлено не было.
Органолептическая оценка бульона и отварного мяса птицы контроль- ной и опытной групп существенных различий между группами не выявила.
3.4 Фармакологические свойства кормовой добавки Селевит
3.4.1 Определение оптимальных доз кормовой добавки и ее влияния на рост и сохранность птицы
Подбор оптимальной дозы кормовой добавки Селевит проводили на суточных цыплятах-бройлерах (n = 200) кросса РОСС-308. Из цыплят мето- дом пар-аналогов по возрасту и живой массе было сформировано пять групп по 40 голов в каждой согласно схеме, представленной в таблице 1.
Установлено, что введение в кормовые рационы комплексной кормо- вой добавки оказало положительное влияние на ростовые характеристики и сохранность цыплят-бройлеров.
Прирост массы тела за весь период опыта в среднем на одну голову в опытных группах был выше, чем в контрольной группе, на 0,8; 5,2; 5,4 и 1,3 % соответственно. Абсолютные среднесуточные приросты по группам составили: 61,38; 64,02; 64,14 и 61,67 против 61,1 г в контроле. Во второй и третьей опытных группах кормовая добавка (в дозах 1,0 и 1,5 %) проявила выраженную ростостимулирующую активность, тогда как уменьшение и увеличение дозы введения Селевита в кормовые рационы (0,5 и 2,0 %) не оказали существенного влияния на динамику приростов массы тела цыплят. При этом существенной разницы в затратах корма на голову за весь период исследований не отмечено. Сохранность поголовья во всех группах была одинаковой, находясь в пределах 90–91 %.
Таким образом, Селевит оказывает стимулирующее влияние на рост и развитие цыплят-бройлеров. И хотя на протяжении опыта птица во всех группах имела высокую энергию роста, введение в рационы кормовой до- бавки в различных дозировках позволило выявить дополнительные резервы для ее повышения.
С учетом экономических соображений наиболее эффективными доза- ми введения кормовой добавки Селевит в рационы были выбраны 1 и 1,5 % от массы корма.
3.4.2 Влияние кормовой добавки на морфо-биохимические показатели крови цыплят-бройлеров
Оценку морфо-биохимического статуса птицы проводили по ряду по- казателей, характеризующих состояние основных обменных процессов в ор- ганизме цыплят-бройлеров (таблица 4).
Изучение морфологического состава крови птицы в конце исследова- тельского периода показало, что все определяемые показатели были сопос-
тавимы с аналогичными данными, полученными в группе биологического контроля, и находились в пределах видовой нормы. Однако в сравнительном аспекте уровень гемоглобина в опытных группах превышал таковые значе- ния у контрольных цыплят на 3,1; 4,7; 3,4 и 2,3 % соответственно.
Таблица 4 – Морфологические и биохимические показатели крови цыплят –бройлеров (M±m; n = 5)
Показатель
Гемоглобин, г/л Эритроциты, млн/мкл Лейкоциты, тыс. мкл Общий белок, г/л Мочевина, мМ/л Холестерин, мМ/л AсАT, ЕД/л
AлАT, ЕД/л
Кальций общий, мМ/л
Фосфор неорганический,
мМ/л
Витамин А, мкМ/л
Каротин, мкг/г
Примечание: *р≤0,05; **р≤0,01 степень достоверности по отношению к контролю
Применение Селевита оказало существенное влияние на уровень об- щего белка в сыворотке крови подопытных цыплят. Причем динамика роста данного показателя была прямо пропорциональна процентному содержанию вводимой в рационы кормовой добавки. Так, к концу исследований концен- трация общего белка относительно контрольной птицы возросла по группам на 12,8 % (1-я опытная), 19,6 (2-я опытная), 23,7 (3-я опытная) (р≤0,05) и 18,1 % (4-я опытная). Различия по мочевине составили 27,1; 37,1; 22,5 и 23,6 % соответственно в пользу цыплят опытных групп.
Содержание трансаминаз печени у птицы опытных групп выявило не- достоверное увеличение уровня аспартатаминотрансферазы в третьей и чет- вертой группах – на 10,1 и 16,5 % относительно контроля. Снижение уровня аланинаминотрансферазы не выходило за пределы видовой нормы и по группам составило 31,2; 53,9; 33,5 и 50,6 % соответственно.
Отмечено достоверное (р≤0,05) увеличение содержания витамина А и β-каротина у цыплят третьей опытной группы (на 7,4 и 5,6 %).
Таким образом, установлено, что использование Селевита в рационах цыплят-бройлеров оказывает положительное влияние на метаболизм ве- ществ в организме птицы.
Контроль- ная 101,4±2,1 3,50±0,02 36,17±0,01 41,4±2,6 2,80±0,25 3,12±0,11 100,8±5,0 26,3±1,1 2,64±0,05
1-я опытная 104,5±2,4 3,52±0,03 36,0±0,01 46,7±3,1 3,56±0,31 3,56±0,09 98,1±5,41 18,1±2,0 2,47±0,03
Группа 2-я опытная 106,2±1,9 3,50±0,01 35,8±0,02 49,4±3,5 3,84±0,12 3,65±0,15 101±7,4 12,1±2,2 2,38±0,12
3-я опытная 104,9±2,3 3,50±0,01 36±0,02 51,2±1,9* 3,43±0,3** 3,18±0,08 111,0±8,2 17,5±1,1 2,59±0,04
4-я опытная 103,7±2,0 3,50±0,02 36,2±0,01 48,9±2,16 3,46±0,19 3,27±0,23 117,4±6,8 13,0±2,1 2,55±0,09
2,76±0,08
2,71±0,03
2,56±0,04
3,19±0,07
2,74±0,1
1,22±0,04 302,1±5,2
1,2±0,01
305,0±6,11 310,0±7,14 319,5±8,4* 301±5,33
1,26±0,01
1,31±0,03*
1,26±0,01
16
3.4.3 Влияние кормовой добавки на качественные характеристики мяса
С целью оценки мясной продуктивности цыплят-бройлеров при ис- пользовании исследуемой добавки проводился убой и анатомическая раз- делка пяти особей птицы из каждой опытной и контрольной групп.
Результаты анатомической разделки и оценки мясной продуктивности по данным анатомической разделки представлены в таблице 5.
Таблица 5 – Мясная продуктивность цыплят-бройлеров (M±m; n = 5) Группа
Показатель
Живая масса птицы перед убоем, г
Масса потрошеной тушки, г Печень
(без желчного пузыря), г Сердце (без околосердечной сумки), г
Почки, г
Мышечный желудок (без содержимого кутикулы), г Кишечник
(включая содержимое), г Железистый желудок, г Длина тонкого кишечника, см
Масса грудной мышцы, г Масса бедра, г
Масса голени, г
Контроль- 1-я опытная 2-я опытная 3-я опытная 4-я опытная ная
2615,3±28,4 2655,9±31,5 2729,9±44,8 2734,9±24,3 2636,0±30,8 2233,5±19,5 2260,7±23,7 2320,2±27,0* 2350,7±16,7* 2242,6±35,1
55,9±3,8
12,6±1,3 7,1±0,6 34,2±0,9
187,3±6,5
8,4±0,5
155,5±3,4
503,6±8,6
331,0±7,2 280,7±11,0
57,7±4,5
12,4±0,8 7,3±0,8 34,7±1,2
185,3±9,4
8,3±0,3
157,3±2,1
527,6±9,4 349,4±5,6 290,1±9,4
53,4±5,1
14,3±1,4 7,1±0,7 34,2±0,7
191,5±5,7 8,0±0,7 159,6±3,6
55,6±4,2
13,1±2,0 6,9±0,3 34,8±1,0
185,9±8,1 8,1±0,6 155,5±1,4
52,7±2,9
12,7±1,7 7,2±0,5 35,0±0,8
189,9±4,6 8,2±0,6 156,1±0,9
534,9±6,5* 567,8±5,2* 532,5±7,1 356,6±4,1 365,1±5,8* 339,7±7,2 300,2±5,8 311,2±7,3* 290,8±10,6
Примечание: *р≤0,05 степень достоверности по отношению к контролю
Статистически достоверное увеличение массы потрошеной тушки на- блюдалось только во второй и третьей опытных группах (на 3,87 и 5,24 % соответственно выше, чем в контроле).
Оценка съедобных частей тела цыплят-бройлеров показала, что наи- большая масса грудных, бедренных мышц и мышц голени также выявлялась во второй и третьей группах. Различия с контролем составили 6,2 и 12,74 % (грудные мышцы), 7,7 и 10,3 % (бедренные мышцы) и 7,8 и 10,9 % (мышцы голени) соответственно. Биометрические различия таких внутренних орга- нов, как печень, почки, сердце, железистый и мышечный желудок, кишеч- ник, по группам не выражены.
Результатами оценки химического состава мяса установлено, что со- держание витамина А в опытных группах было выше по сравнению с кон- трольной в среднем на 3,4–6,89 % (в грудных мышцах) и на 1,5–9,2 % (в бедренных мышцах) при высокой степени достоверности (р≤0,05) в третьей опытной группе.
Содержание витамина В1 в грудных мышцах цыплят-бройлеров на 6,7 (первая группа), 13,3 (вторая и третья группа) и 26,6 % (четвертая группа) при р≤0,05 превосходило значения группы контроля. В бедренных мышцах различия составили 6,25–12,5 %.
Статистически достоверное увеличение содержание β-каротина на 12,5 % в грудных мышцах было отмечено в 3-й опытной группе. В бедрен- ных мышцах его концентрация была ниже, однако превышение β-каротина во 2-й и 3-й группах относительно группы контроля составило 6,7 и 11,1 % соответственно.
Содержание селена во 2-й опытной группе достоверно повысилось на 4,9 (грудные мышцы) и 6,6 % (бедренные мышцы), в 3-й опытной группе – на 9,45 и 13,2 %, в 4-й опытной группе – на 14,9 и 16,1 % соответственно.
3.5 Производственные испытания и оценка экономической эффективности применения кормовой добавки Селевит
Научно-хозяйственный опыт по проверке эффективности производст- венного применения кормовой добавки проведен в условиях фермерского хозяйства на 1800 клинически здоровых цыплятах-бройлерах кросса РОСС- 308, которым с первого дня жизни и на протяжении 42 дней в комбикорма вводился Селевит в дозах 1 и 1,5 %
Установлено, что использование Селевита не оказало выраженного влияния на расход корма по группам. Затраты корма на голову за весь опыт- ный период составили в контрольной группе 5,34 кг; опытных – 5,37 и 5,38 кг соответственно.
Результаты оценки содержания витаминов и микроэлементов показали, что в сравнении с контролем в 1-й опытной группе отмечено достоверное повышение содержания витамина А, β-каротина и селена в грудных мышцах на 15,38; 10,5 и 8,65 %, в бедренных мышцах – на 18,0; 36,5 и 6,5 % соответ- ственно. Во 2-й опытной группе наблюдалось статистически достоверное повышение содержания данных нутриентов на 38,4; 36,8; 13,94 % (грудные мышцы) и на 27,86; 51,2; 12,17 % (бедренные мышцы).
Результатами оценки экономической эффективности Селевита уста- новлено, что применение кормовой добавки в дозах 1 и 1,5 % способствова- ло повышению сохранности поголовья в опытных группах в сравнении с контрольной на 1 и 2 % соответственно.
Разница в живой массе между птицей опытных и контрольной групп составила 5,4 (первая группа) и 9,3 % (вторая группа), в массе потрошеной тушки – 5,5 и 11 % соответственно (P<0,05).
Прибыль от реализации мяса цыплят-бройлеров в 1 и 2-й опытных группах составила 34270,27 и 38506,12 руб., что на 6,81 и 20,01 % выше в сравнении с контролем.
Рентабельность затрат по первой опытной группе превысила показа- тель рентабельности группы контрольных цыплят на 0,47 %, по 2-й опытной группе – на 3,8 %, из чего следует, что применение кормовой добавки Селе- вит в дозе 1,5 % от массы корма является экономически наиболее обосно- ванным.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Выводы:
1. Разработана новая комплексная кормовая добавка Селевит, пред- ставляющая собой сыпучий порошок от светло-кремового до кремово- оранжевого цвета с приятным запахом, полученная путем иммобилизации на минеральном наполнителе нативной биомассы дрожжей Rhodotorula glutinis Y-358, выращенных на модифицированной среде, с титром клеток не менее 1,5∙108 КОЕ, обогащенных высокодисперсным селеном.
2. Кормовая добавка Селевит малотоксична для животных и птицы, не вызывая их гибели как в остром, так и в хроническом экспериментах, что в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» позволяет отнести ее к 4-му классу опасности – вещества малоопасные. Длительное применение кормовой добавки не оказывает отрицательного воздействия на общее со- стояние животных, процессы пищеварения, показатели морфо- биохимического статуса крови. Селевит не проявляет раздражающего дейст- вия, не изменяет физико-биохимических свойств и вкусовых качеств мяса птицы, а также способствует увеличению сохранности поголовья и прироста массы тела.
3. При изучении фармакологических свойств кормовой добавки Селе- вит установлено ее положительное влияние на гематологические и биохими- ческие показатели крови животных, что характеризуется увеличением уров- ня гемоглобина на 2,4–4,7 %; общего белка – на 12,8–23,7 %; мочевины – на 16,7–26,2 %, глюкозы – на 5,4–9,6 % в зависимости от дозы. Селевит досто- верно (р≤0,05) увеличивает содержание в сыворотки крови витамина А и ка- ротина на 7,4 и 5,6 % соответственно.
4. Кормовая добавка оказывает стимулирующее влияние на рост, раз- витие и сохранность цыплят-бройлеров. Применение Селевита в дозе 1,0– 1,5 % к кормовому рациону увеличивает живую массу цыплят-бройлеров на 5,2–5,4 % (р<0,05), массу потрошеной тушки – на 3,9–5,2 %, массу грудных и бедренных мышц – на 7,7–10,3 %, мышц голени – на 7,8–10,9 %.
5. Применение Селевита способствует увеличению в мясе цыплят- бройлеров концентрации витаминов и селена. Уровень витамина А в груд- ных мышцах повышается на 3,4–6,8 %, β-каротина – на 12,5 %, витамина В1
на 6,7–26,6 %, селена – на 4,9–6,6 %, в бедренных мышцах – соответственно на 1,5–9,2, 6,7–11,1, 6,25–12,5 и 9,45–13,2 % (р<0,05).
6. Расчет экономической эффективности применения Селевита показал, что его введение в количестве 1,0–1,5 % от массы корма экономически оправ- данно и способствует повышению рентабельности производства мяса птицы на 0,47–3,8 %. Прибыль от реализации мяса цыплят-бройлеров возрастает на 6,81–20,01 % в зависимости от дозы введения кормовой добавки в рационы.
Практические предложения:
Для повышения сохранности и продуктивности поголовья цыплят- бройлеров, а также получения качественной и безопасной продукции птице- водства рекомендуется использовать в рационе цыплят-бройлеров кормовую добавку Селевит в дозе 1,5 % от массы корма в течение всего периода выра- щивания.
Актуальность темы. Птицеводство – одна из динамично развиваю- щихся отраслей животноводства (Данилов И. П., 2010; Лебедева И. А., 2011; Гайдук А. Г., 2011; Бараников В. А., 2013). Скороспелость птицы и скорая окупаемость вложений являются важными факторами, обуславливающими индустриализацию отрасли (Голубов И. И., 2011).
Одним из приоритетных направлений в птицеводстве является разра- ботка и внедрение методов, обеспечивающих повышение рентабельности производства за счет эффективного использования кормов и снижения себе- стоимости продукции, получаемой от птицы (Данилов И. П., 2010; Слепухин В. В., 2011; Loh T. C. et al., 2014; Gao P. et al., 2017; Wang Y. et al., 2017; Xing S. et al., 2017).
Государственная аграрная политика ставит важной целью импортоза- мещение птицеводческой продукции на отечественном рынке за счет собст- венных производственных мощностей, что требует внедрения инновацион- ных технологических подходов (Фисинин В. И., 2016, 2019; Егоров И. А., 2017; Кочиш И. И., 2017; Салеева И. П., 2020). Реализация намеченной стра- тегии может быть возможна за счет применения кормовых добавок различно- го назначения (Apata D. F., 2008; Pham M. et al., 2008; Салеева И. П., 2014; Dastar B. et al., 2016; Егоров И. А., 2016).
Вопрос витаминного кормления птицы всегда был актуален, сейчас он стоит особенно остро вследствие внедрения промышленной технологии вы- ращивания. Успехи длительной селекционной работы позволили создать большое количество высокопродуктивных кроссов сельскохозяйственной птицы, характерной особенностью которых является интенсивный обмен ве- ществ, требующий рационы, сбалансированные не только по белку, но и ви- таминам, микро- и макроэлементам. Дефицит витаминов (даже некоторых) приводит к отставанию в росте, снижению продуктивности, показателей жизнеспособности и другим неблагоприятным в хозяйственном отношении последствиям (Лозовой В. И., 2005).
Биологическая роль витаминов, их селективность и специфичность действия, невозможность замены другими веществами определяют их при- родную уникальность (Байер Т. А., 2014).
Помимо витаминов, необходимым условием питания является обеспе- ченость микро- и макроэлементами. Минеральные вещества в животном ор- ганизме выполняют разнообразные функции от участия в процессах метабо- лизма до формирования тканей и органов. Исследованиями установлена фундаментальная роль микроэлементов в процессах жизнедеятельности жи- вотных организмов. Они входят в состав БАВ, играющих ключевую роль в процессах метаболизма (Трифонов Г., 2001; Кузнецов С. Г., 2003; Саломатин В. В., 2010).
Рост и развитие птицы напрямую зависят от обеспеченности корма биологически активными веществами, их недостаток может приводить к от- ставанию в росте и развитии, что негативно сказывается на скороспелости птицы (Егоров И., 2006; Гущин В. В., 2011).
Весьма актуальна проблема дефицита селена. Многие районы нашей страны в биогеохимическом отношении дефицитны по этому микроэлементу. Достаточно широкая практика применения препаратов селена на основе его неорганических соединений показывает низкую результативность. Разработ- ка добавок и кормовых продуктов, в которых селен находится в доступном и малотоксичном виде, является актуальной исследовательской задачей.
Помимо прочего, современное птицеводство имеет ряд проблем, одной из которых является качество зерновых кормов – они зачастую загрязнены микотоксинами из-за развития плесневых грибов. Использование в рационе птицы таких кормов приводит к неблагоприятным последствиям, таким как нарушение обмена веществ, снижение иммунитета, что в итоге ведет к сни- жению продуктивности и увеличению падежа птицы (Давтян Д. А., 2003; Тишенков А. Н., 2003, 2006; Носков С. Б., 2011). Продуктивные качества сельскохозяйственной птицы существенно за- висят не только от технологии ее выращивания, но также и от применения кормовых добавок, способствующих раскрытию в полной мере ее биоре- сурсного потенциала на фоне сокращения экономических затрат на корма растительного и животного происхождения.
В этой связи разработка и внедрение новых кормовых добавок в жи- вотноводство и ветеринарную практику, всесторонняя оценка их фармако- токсикологических свойств и эффективности применения представляют со- бой актуальное исследовательское направление в решении вопросов обеспе- чения населения продуктами птицеводства и продовольственной безопасно- сти страны.
Диссертационная работа является частью тематического плана НИОКР, утвержденного Ученым советом Кубанского ГАУ на 2016–2020 гг. (протокол от 25.01.2016 No 1; No госрегистрации АААА-А16-116022410037-1 и АААА-А16-116021110076-4).
Степень разработанности темы. В современном птицеводстве широ- ко распространены болезни обмена веществ, связанные с недостатком или несбалансированным соотношением элементов питания. Профилактикой и коррекцией нарушения обмена веществ, а также сопряженных с этим явлени- ем болезней у сельскохозяйственных животных занимались такие ученые, как К. Х. Папуниди (2000, 2008), М. И. Рецкий (2001), Н. И. Кузнецов (2003), А. Г. Кощаев (2004), Y. Espada (2017).
Исследователями И. А. Егоровым (2006, 2017), В. В. Гущиным (2011), М. Pourakbari и др. (2016), И. И. Кочиш (2018), П. Ф. Сурай (2019), доказано, что рост и развитие птицы напрямую зависит от обеспеченности корма био- логически активными веществами, поскольку их недостаток может приво- дить к отставанию в росте и развитии, что негативно сказывается на скоро- спелости птицы. Однако, несмотря на довольно широкий спектр исследований в данном направлении, многие вопросы изучены недостаточно, проведение дальней- ших исследований весьма актуально, что и определило цель и задачи на- стоящей работы.
Цель работы и задачи. Целью настоящей работы явилась разработка технологии получения кормовой добавки Селевит, исследование ее фармако- токсикологических свойств и оценка эффективности применения на цыпля- тах-бройлерах.
Для достижения обозначенной цели были определены следующие задачи:
– разработать состав и технологию получения комплексной кормовой добавки Селевит;
– изучить параметры общетоксического действия добавки на организм животных;
– изучить фармакологические свойства кормовой добавки Селевит;
– оценить влияние добавки Селевит на мясную продуктивность и каче- ство продукции цыплят-бройлеров;
– определить экономическую эффективность применения кормовой до- бавки Селевит при выращивании цыплят-бройлеров.
Научная новизна. Разработана новая комплексная кормовая добавка Селевит на основе нативной биомассы каротинсинтезирующих дрожжей Rhodotorula glutinis (Fresen. F.C. Harrison 1928), ультрадисперсного селена и минеральной основы – перлита. Определены физико-химические и основные фармако-токсикологические характеристики кормовой добавки Селевит. Вы- явлено положительное влияние на морфо-биохимический состав крови, рост и сохранность птицы, а также качественные характеристики мяса. В произ- водственных условиях определена экономическая эффективность добавки при выращивании цыплят-бройлеров. Данные проведенных исследований учтены при разработке нормативно- технической документации. Разработаны технические условия комплексной кормовой добавки Селевит (СТО 9291-007-65842460-2020) и «Методические рекомендации по применению комплексной кормовой добавки Селевит в птицеводстве».
Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость работы заключается в том, что доказана возможность повышения сохранности и продуктивности сельскохозяйственной птицы благодаря ис- пользованию кормовой добавки Селевит. На основании фармако- токсикологической оценки предложена новая комплексная добавка на основе биомассы штамма каротинсинтезирующих дрожжей Rhodotorula glutinis, вы- сокодисперсного селена и минерального наполнителя перлита. Добавка улучшает метаболический статус организма птицы, способствует повыше- нию качественных характеристик мяса. Дано экономическое обоснование использования Селевита в мясном птицеводстве.
Результаты диссертационного исследования представляют собой новое решение вопроса увеличения продуктивности цыплят-бройлеров и могут най- ти применение в птицеводческих хозяйствах для повышения жизнеспособно- сти птицы и экономически эффективного получения высококачественной мясной продукции.
Материалы, изложенные в работе, являются частью научной теорети- ческой базы по исследуемой проблеме и могут быть использованы в иссле- довательских, учебных, научно-практических целях и решении прикладных вопросов.
Методология и методы исследований. Методологической базой на- стоящей работы послужили труды отечественных и зарубежных исследова- телей в области биотехнологии кормов и кормовых добавок, ветеринарной токсикологии и фармакологии. В работе применялись современные методы исследований и оборудо- вание. Экспериментальная часть работы реализована с использованием об- щепринятых методов планирования научного эксперимента и методов, при- меняемых в токсикологии, фармакологии, ветеринарно-санитарной эксперти- зе, биотехнологии, экономике. Обработка результатов экспериментов прово- дилась с использованием актуального программного обеспечения и обще- принятых методов статистики.
Основные положения, выносимые на защиту:
– технология получения и состав кормовой добавки Селевит;
– токсикологическая оценка Селевита;
– фармакологические свойства кормовой добавки Селевит;
– результаты применения кормовой добавки в рационах цыплят-
бройлеров в качестве средства, повышающего продуктивность и качество получаемой мясной продукции;
– экономическая эффективность применения кормовой добавки Селе- вит при выращивании цыплят-бройлеров.
Степень достоверности и апробация работы. Результаты эксперимен- тальных и клинических исследований, являющихся основой диссертации, до- ложены на Всероссийской научно-практической конференции «Вклад моло- дых ученых в инновационное развитие АПК России» (Пенза, 2013 г.); III Международной заочной научной конференции для молодых ученых, сту- дентов и школьников «Наноматериалы и нанотехнологии: проблемы и пер- спективы» (Саратов, 2014 г.); Международной научно-практической конфе- ренции, посвященной 70-летию Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института «Актуальные проблемы современной ветеринарной науки и практики» (Краснодар, 2016 г.); III Национальной конференции «Научно-технологическое обеспечение агропромышленного комплекса Рос- сии: проблемы и решения» (Краснодар, 2019 г.); IV Международной конфе- ренции «Институциональные преобразования АПК России в условиях гло- бальных вызовов» (Краснодар, 2019 г.); Международной научно-практической конференции «Научные основы повышения продуктивности и здоровья сель- скохозяйственных животных» (Краснодар, 2020 г.).
Материалы диссертационной работы представляют собой часть кон- курсного проекта, отмеченного золотой медалью 28-й Международной агро- промышленной выставки «Агрорусь-2019», а также золотой медалью XXII Российской агропромышленной выставки «Золотая осень-2020».
Личное участие автора. Методологическая концепция исследований и приведенные в работе данные получены при личном участии автора. Экспе- риментальная часть работы, включая лабораторные исследования, а также сбор, обработка и статистический анализ экспериментальных данных и их оформление выполнены автором самостоятельно.
Публикации. По материалам диссертационного исследования опубли- ковано 12 научных работ, в том числе 5 в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Фе- дерации.
Структура и объем диссертационной работы. Настоящая работа из- ложена на 145 страницах текста компьютерного набора и состоит из сле- дующих разделов: Введение, Обзор литературы, Материалы и методы иссле- дований, Собственные исследования, Заключение, Список использованной литературы, Приложения. Список использованной литературы включает 232 источника, из них 60 – зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 28 таб- лицами и 14 рисунками.
Публикации автора в научных журналах
Помогаем с подготовкой сопроводительных документов
Хочешь уникальную работу?
Больше 3 000 экспертов уже готовы начать работу над твоим проектом!