Противовоспалительное действие и фармакокинетика сложноэфирного производного индометацина (экспериментальное исследование)

Во введении обоснована актуальность темы диссертации, сформулированы цель и задачи исследования, научная новизна, практическая и теоретическая значимость работы.
В первой главе проведен анализ отечественной и зарубежной научной литературы по теме исследования. Изложены современные представления о механизмах противовоспалительного, анальгетического и жаропонижающего действия НПВС. Рассмотрены особенности действия, фармакокинетика, применение и побочные эффекты индометацина. В последнем разделе главы приведена характеристика лекарственных средств,
применяемых в виде пролекарств, описаны механизмы их активации и
значение для клинической практики.
Вторая глава диссертации посвящена описанию материалов и методов
исследования. Субстанция индоментила представляет собой мелкокристаллический порошок белого цвета без запаха. Химическая формула индоментила — [(1R,2S,5R)-5-метил-2-(пропан-2- ил)циклогексил]{2-[2-метил-5-метокси-1-(4-хлорбензоил)-1H-индол-3-ил] ацетат} (рисунок 1). Молекула индоментила синтезирована в ООО «Томская фармацевтическая фабрика (г. Томск) [Патент 2017146694, 17.04.2019].
Рисунок 1 — Структурная формула индоментила
Эксперименты проводили на свободных от патогенной микрофлоры животных: 348 крысах самцах стока Sprague Dawley массой тела 250 ± 25 г и 40 мышах самцах стока CD-1 массой тела 20 ± 2 г (по 5–10 животных в группе). Крыс и мышей получали из питомника лабораторных животных «Пущино» (г. Москва). Исследование одобрено локальным этическим комитетом Сибирского государственного медицинского университета No 6178 от 22.10.2018, выполнено в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986).
Индоментил и препарат сравнения индометацин (ООО «Озон», Россия) вводили животным в желудок: индоментил в дозах 6,25; 12,5; 25 и 50 мг/кг в форме раствора в льняном масле, индометацин в дозе 10 мг/кг [OmogbaiE. etal., 1999] в форме суспензии в изотоническом растворе натрия хлорида. В экспериментах с многократным введением дозу индометацина уменьшали до 5 и 1 мг/кг. Контрольные животные получали растворитель индоментила льняное масло (контроль 1) или растворитель препарата индометацина изотонический раствор натрия хлорида (контроль 2). В большинстве экспериментов использованы методы, рекомендованные в «Руководстве по проведению доклинических исследований лекарственных средств» (под ред. Миронова А.Н., 2013).
Для моделирования острого экссудативного воспаления под апоневроз задней конечности 175 крысам однократно вводили по 0,1 мл 2 % водных

растворов λ-каррагенина, серотонина или гистамина (все «Sigma», США). В
другую заднюю конечность этих животных вводили 0,1 мл изотонического раствора натрия хлорида. Индоментил в дозах 12,5 и 25 мг/кг или индометацин в дозе 10 мг/кг вводили за 2, 8 и 12 ч до инъекции каррагенина, либо за 2 и 8 ч до инъекции гистамина или серотонина. Объем конечностей измеряли с помощью плетизмометра («UGO BASIL», Италия) через 3 ч после введения каррагенина и спустя 30 мин после инъекции медиаторов воспаления. Степень уменьшения отека воспаленной конечности выражали в процентах к объему конечностей у крыс, получавших растворители индоментила или индометацина.
Для моделирования хронического пролиферативного воспаления 25крысам под наркозом севофлураном в асептических условиях имплантировали под кожу спины по 2 стерильных ватных тампона каждый массой 10 мг. Индоментил в дозах 12,5 и 25 мг/кг или индометацин в дозе 5 мг/кг вводили в желудок после имплантации тампонов ежедневно 1 раз в сутки в течение 7-и дней. На 8-е сут тампоны с образовавшейся вокруг них грануляционной тканью (далее — гранулема) извлекали, взвешивали и высушивали в термостате в течение 12 ч при 60 °С до постоянной массы, затем повторно взвешивали. Экссудативную реакцию оценивали по разнице между массой сырой и высушенной гранулем, пролиферативную реакцию — по разнице между массой высушенной гранулемы и исходной массой ватного тампона.
Адъювантный артрит вызывали у 48 крыс инъекцией под плантарный апоневроз задней конечности 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда (ПАФ) («Sigma», США) [Саратиков А.С. и др., 1983]. Воспаление сустава развивалось на 7-е сутки после введения ПАФ. После развития артрита животным в течение 21 сут 1 раз в день вводили в желудок индоментил в дозах 6,25; 12,5 и 25 мг/кг или индометацин в дозе 1мг/кг. Объем конечностей измеряли с помощью плетизмометра до введения ПАФ и 2 раза в неделю на протяжении 21 сут после развития адъювантного артрита. Разницу между объемом воспаленной конечности у крыс, получавших индоментил или препарат индометацина, и объемом в контрольных группах выражали в процентах.
После завершения введения индоментила и индометацина крыс умерщвляли в условиях постепенного заполнения камеры диоксидом углерода. Ткани заплюсневого сустава исследовали гистологически на депарафинированных срезах, окрашенных гематоксилином и эозином. Гистологические препараты анализировали с помощью светооптического
микроскопа Axio Lab A1 («Carl Zeiss», Германия) при увеличении ×50.
Степень поражения суставов оценивали по пятибалльной шкале [Мужикян А.А. и др. 2014]: 1 балл — гиперплазия синовиальной оболочки; 2 балла — воспалительный инфильтрат в околосуставной ткани; 3 балла — внутрисуставной выпот; 4 балла — сужение суставной полости; 5 баллов — формирование паннуса (наличие в субинтимальном слое суставной капсулы грануляционной ткани, содержащей фибробласты, лимфоциты и макрофаги).
Для моделирования острой висцеральной боли 40 мышам внутрибрюшинно вводили 0,25 мл 0,75 % раствора уксусной кислоты. Индоментил в дозах 6,25, 12,5 и 25 мг/кг или индометацин в дозе 10 мг/кг вводили в желудок за 2 и 8 ч до инъекции уксусной кислоты. В течение 15 мин регистрировали количество сокращений абдоминальных мышц («корчей») и время наступления первой «корчи».
Острую хемогенную соматическую боль вызывали у 30крыс однократной инъекцией под апоневроз задней конечности 0,15 мл 2 % водного раствора формалина. Индоментил вводили в дозах 6,25, 12,5 и 25 мг/кг, индометацин — в дозе 10 мг/кг за 8 ч до инъекции формалина. В течение 60 мин (0–15 мин — первая фаза, 15–60 мин — вторая фаза) регистрировали число болевых реакций — количество облизываний и потряхиваний конечности, в которую вводили формалин.
Фармакокинетику индоментила и индометацина исследовали при их однократном и многократном введении: 20 крысам вводили индоментил в дозах 12,5, 25 и 50 мг/кг или индометацин в дозе 10 мг/кг однократно; 10 крысам вводили индоментил в дозе 25 мг/кг или индометацин в дозе 5 мг/кг один раз в день в течение 7-и сут. Перед забором крови животных помещали на 3 мин в камеру, постепенно заполняемую диоксидом углерода, затем осуществляли цервикальную дислокацию шейных позвонков. Кровь забирали из полости сердца до первого и седьмого введения и во временных точках 30, 60, 120, 240, 480, 960, 1440 и 2880 мин. Содержание индоментила и его активного метаболита индометацина, а также препарата индометацина определяли в плазме крыс с помощью высокоэффективного жидкостного хроматографа с ультрафиолетовым-спектрофотометрическим детектором («ЭкоНова», Россия).
Для исследования потенциального ульцерогенного действия индоментила и препарата индометацина 40 интактным крысам однократно и четырехкратно (с интервалом 24 ч) вводили в желудок индоментил в дозе 25 мг/кг или препарат индометацина в дозах 10 мг/кг (однократно) и 5 мг/кг
(четырехкратно). Через 3 ч после последнего введения веществ животных
выводили из эксперимента в атмосфере диоксида углерода. Слизистую оболочку желудка на наличие дефектов, язв и рубцов изучали с помощью стереоскопического микроскопа «Наблюдательные приборы» (Россия) при увеличении ×10. Степень повреждения оценивали по четырехбалльной шкале: 0 — отсутствие повреждений; 0,5 — гиперемия слизистой оболочки; 1 — 1 или 2 точечных кровоизлияния на слизистой оболочке; 2 — единичные эрозии и точечные кровоизлияния на слизистой оболочке; 3 — множественные эрозии и кровоизлияния на слизистой оболочке; 4 — массивные кровоизлияния, язвы на всем протяжении слизистой оболочки. Потенциальное ульцерогенное действие индоментила и индометацина также оценивали у крыс с адъювантным артритом после введения в течение 21 сут.
После оценки степени повреждения слизистой оболочки в стенке желудка определяли содержание индометацина, высвобождаемого из индоментила, и индометацина, введенного в его препарате. Содержание индометацина определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с помощью масс-спектрометрометрического детектора («AB Sciex», США).
Результаты обрабатывали статистически с помощью программы Statistica 8.0. Нормальность распределения случайных величин проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка с последующей оценкой равенства дисперсий по критерию Левена. В том случае, когда распределение в экспериментальных группах было нормальным, и соблюдалось межгрупповое равенство дисперсий, дальнейшую обработку проводили с помощью дисперсионного анализа (ANOVA; параметрический метод) с последующим апостериорным сравнением групп (post-hoc) в тесте Даннета. При распределении, отличном от нормального, и несоблюдении межгруппового равенства дисперсий применяли метод непараметрической статистики — критерий Краскела-Уоллиса. Для каждой выборки вычисляли среднее значение величины признака М и ошибку средней величины m. Различия между группами считали статистически значимыми при p < 0,05. Третья глава диссертации посвящена результатам проведенного исследования. Индоментил в дозах 12,5 и 25 мг/кг при введении за 12 ч до инъекции каррагенина уменьшал отек конечности через 3 ч на 30 и 45 % соответственно (p < 0,05), при введении за 2 и 8 ч не оказывал противовоспалительного действия. Индометацин в дозе 10 мг/кг при введении за 12 ч не ослаблял отек конечности, при введении за 2 и 8 ч уменьшал его на 63 и 35 % (p < 0,05) соответственно (рисунок 2). Индоментил в дозе 25 мг/кг и индометацин в дозе 10 мг/кг при их введении за 2 ч до инъекции серотонина и гистамина уменьшали отек конечности на 35 и 43 % соответственно (p < 0,05). Индоментил в дозе 12,5 мг/кг не оказывал противовоспалительного действия при введении за 2ч до инъекции серотонина или гистамина. При введении за 8 ч до инъекции медиаторов воспаления индоментил в дозах 12,5 и 25 мг/кг уменьшал отек конечности на 31 и 45 % (серотонин) и 33 и 45 % (гистамин) (p < 0,05) соответственно, индометацин в дозе 10 мг/кг не проявлял противовоспалительной активности (рисунок 2). Такие различия эффектов индоментила и индометацина можно объяснить особенностями их фармакокинетики. Концентрация индометацина в плазме после введения индоментила возрастает до максимального уровня только через 8 ч, концентрация индометацина после введения препарата индометацина становится максимальной значительно быстрее — через 4 ч. Индоментил постепенно гидролизуется под влиянием эстераз нейтрофилов в очаге воспаления и только после освобождения индометацина подавляет вызванное каррагенином воспаление. На пике действия гистамина и серотонина (через 0,5–1 ч) индометацин не полностью освобождается из связи с ментолом и оказывает умеренное противовоспалительное действие. Выраженное противовоспалительное действие индоментила развивается при его введении в желудок за 8–12 ч до применения веществ, вызывающих воспаление, когда концентрация индометацина становится максимальной. На модели хронического пролиферативного воспаления индоментил в дозах 12,5 и 25 мг/кг препятствовал развитию реакции на ватный тампон: экссудация уменьшалась на 13 и 22 %, пролиферация гранулематозной ткани — на 10 и 22 % соответственно (p < 0,05). Индометацин в дозе 5 мг/кг ослаблял экссудативную реакцию на 45 %, пролиферацию гранулематозной ткани на 38 % (p < 0,05) (таблица 1, см. стр. 16). Динамика воспалительного процесса в конечности крыс при адъювантном артрите и его экспериментальной терапии индоментилом в дозах 6,25; 12,5 и 25 мг/кг и индометацином в дозе 1 мг/кг представлена на рисунке 3. В течение первых суток в месте инъекции ПАФ появлялись отек и гиперемия околосуставных тканей. На 7-й день эксперимента объем воспаленной конечности у всех животных увеличивался в 2,8–3 раза. * — р < 0,05 по сравнению с показателем при введении льняного масла (контроль 1); ** — р < 0,05 по сравнению с показателем при введении изотонического раствора натрия хлорида (контроль 2) Рисунок 2 — Противовоспалительное действие индоментила (ИМЛ) в дозах 12,5 и 25 мг/кг и индометацина (ИНД) в дозе 10 мг/кг при введении в желудок крысам с моделью острого экссудативного воспаления, вызванного каррагенином, серотонином или гистамином * – p < 0,05 сравнению с показателем животных с адъювантным артритом, получавших льняное масло в этот же экспериментальный день; ** – p < 0,05 сравнению с показателем животных с адъювантным артритом, получавших изотонический раствор натрия хлорида в этот же экспериментальный день Рисунок 3 — Противовоспалительное действие индоментила (ИМЛ, 6,25, 12,5, 25 мг/кг) и индометацина (1 мг/кг) при адъювантном артрите После трех введений индоментила в дозах 12,5 и 25 мг/кг объем воспаленной конечности уменьшался на 67 % по сравнению с объемом при нелеченом адъювантном артрите (p < 0,05). Индоментил в дозе 6,25 мг/кг уменьшал объем конечности на 30 % (p < 0,05), индометацин в дозе 1 мг/кг — на 63 % (p < 0,05). При адъювантном артрите индометацин вводили в сниженной дозе (1 мг/кг), чтобы не развивались его токсические эффекты [Ramadan G., El-Menshawy O., 2013]. При семикратном введении индоментила в дозах 6,25, 12,5 и 25 мг/кг отек конечности становился меньше на 60, 61 и 83 % соответственно (p < 0,05), при введении индометацина в дозе 1 мг/кг — на 83 % (p < 0,05). Экссудация в максимальной степени уменьшалась после 14-и введений веществ. Индоментил в дозах 6,25 и 12,5 мг/кг уменьшал отек на 73 и 81 % соответственно (p < 0,05), в дозе 25 мг/кг полностью прекращал экссудативную реакцию в конечности, в которую вводили ПАФ. Индометацин в дозе 1 мг/кг уменьшал отек на 80 % (p < 0,05). После 21-го введения индоментила во всех дозах объем воспаленной конечности уменьшался на 57, 83 и 93 % соответственно (p < 0,05), после введения индометацина в дозе 1 мг/кг — на 73 %. Таблица 1 — Противовоспалительное действие индоментила в дозах 12,5 и 25 мг/кг и индометацина в дозе 5 мг/кг при введении в желудок 1 раз в день в течение 7 сут крысам с моделью хронического пролиферативного воспаления (М ± m) Условия эксперимента Масса сырой гранулемы, мг Масса высушенной гранулемы, мг Разница между массой сырой и высушенной гранулемы, мг Разница между массой высушенной гранулемы и ватного тампона, мг Льняное масло (контроль 1) Изотонический раствор натрия хлорида (контроль 2) Индоментил, 12,5 мг/кг Индоментил, 25 мг/кг Индометацин, 5 мг/кг 169,8 ± 44,5 165,3 ± 37,8 140,8 ± 40,1*# 134,3 ± 34,8*# 98,5 ± 18,3** 35,3 ± 6,8 33,0 ± 4,9 31,4 ± 4,7*# 29,6 ± 4,2* 25,4 ± 4,4** 134,5 ± 37,8 137,1 ± 35,1 117,4 ± 33,1# 104,7 ± 30,6*# 74,3 ± 13,4** 25,3 ± 6,8 26,4 ± 6,6 22,9 ± 3,9# 19,6 ± 4,2*# 15,7 ± 4,2** Таблица 2 — Гистологическое строение заплюсневого сустава конечности крыс, в которую вводили ПАФ, при введении индоментила и индометацина, выраженное в баллах (M ± m) Льняное масло (контроль 1) Изотонический раствор натрия хлорида (контроль 2) Индоментил, 6,25 мг/кг Индоментил, 12,5 мг/кг Индоментил, 25 мг/кг Показатель Гиперплазия синовиальной оболочки Воспалительный инфильтрат околосуставной ткани Внутрисуставной выпот Сужение суставной полости Формирование паннуса 1,8 ± 0,6 3,4 ± 0,7 1,4 ± 0,3 1,1 ± 0,2 1,9 ± 0,6 1,6 ± 0,4 3,7 ± 0,4 1,2 ± 0,3 1,0 ± 0,3 2,0 ± 0,5 1,1 ± 0,2 2,6 ± 0,7 0,1 ± 0,0* 0,8 ± 0,2 1,3 ± 0,3 0,8 ± 0,2* 1,9 ± 0,6* 0,0 ± 0,0* 0,3 ± 0,0* 0,5 ± 0,1* 0,6 ± 0,2* 1,6 ± 0,5*# 0,0 ± 0,0* 0,1 ± 0,1*# 0,3 ± 0,2*# Индометацин, 1 мг/кг 0,9 ± 0,3** 2,6± 0,8 0,0 ± 0,0** 0,6 ± 0,2 1,0 ± 0,3** Примечания к таблице 1 и таблице 2: * р < 0,05 по сравнению с показателем контроля 1; ** р < 0,05 по сравнению с показателем контроля 2; # р < 0,05 по сравнению с показателем у животных, получавших индометацин. Гистологическое исследование показало, что в конечности крыс, в которую вводили ПАФ, развивались пролиферативный синовит и воспаление околосуставной ткани. Синовиальная оболочка заплюсневого сустава была утолщена, отечна, синовиоциты пролиферировали, на синовиальной интиме появлялись луковицеобразные ворсины. Строма сустава была инфильтрирована лимфоцитами и плазматическими клетками. Суставная полость заполнялась жидкостью с лейкоцитами и десквамированными фрагментами синовиальной оболочки. У животных формировались внутрисуставной паннус, дистрофия и некроз хондроцитов. Индоментил после введения в течение 21 сут в дозах 12,5 и 25 мг/кг нормализовал гистологическое строение заплюсневого сустава и околосуставной ткани крыс с адъювантным артритом: препятствовал гиперплазии синовиальной оболочки, воспалительной инфильтрации стромы сустава, формированию паннуса и повреждению хондроцитов, уменьшал объем внутрисуставного выпота (таблица 2). При введении индоментила в дозе 6,25 мг/кг и индометацина в дозе 1 мг/кг сохранялись умеренная гиперплазия синовиоцитов и воспалительная инфильтрация околосуставной ткани. Индоментил в дозе 25 мг/кг оказывал при адъювантном артрите более значительное антиэкссудативное и антипролиферативное влияние, чем индометацин в дозе 1 мг/кг. На модели острой висцеральной боли у мышей, вызванной внутрибрюшинной инъекцией уксусной кислоты, индоментил в дозах 12,5 и 25 мг/кг при введении в желудок за 2 ч до инъекции уксусной кислоты не удлинял время до наступления первой «корчи», уменьшал их число на 17 и 25 % соответственно (p < 0,05). При введении индометацина в дозе 10 мг/кг время до наступления первой «корчи» увеличивалось на 23 %, их количество становилось меньше на 43 % (p < 0,05) (таблица 3). При введении индоментила в дозах 12,5 и 25 мг/кг за 8 ч до инъекции уксусной кислоты время до наступления первой «корчи» увеличивалось на 16 и 18 % соответственно, количество «корчей» уменьшалось на 23 и 34 % (p < 0,05). Индометацин в дозе 10 мг/кг не удлинял время до наступления первой «корчи» и уменьшал их число на 23 % (p < 0,05) (таблица 3). На модели острой соматической боли, вызванной у крыс инъекцией под апоневроз задней конечности водного раствора формалина (таблица 4), Таблица 3 — Анальгетическая активность индоментила (12,5 и 25 мг/кг) и индометацина (10 мг/кг) после однократного введения в желудок за 2 и 8 ч до инъекции уксусной кислоты мышам (М ± m) Условия эксперимента Время до наступления «корчей», с Количество «корчей» через 2ч 8ч 2ч 8ч Льняное масло (контроль 1) Изотонический раствор натрия хлорида (контроль 2) Индоментил, 12,5 мг/кг Индоментил, 25 мг/кг Препарат индометацина, 10 мг/кг 244,8 ± 53,8 242,2 ± 48,7 258,3 ± 56,1 277,3 ± 66,7 297,8 ± 70,1** 243,3 ± 50,6 240,9 ± 45,3 281,4 ± 53,8 287,3 ± 69,1* 243,5 ± 54,4 22,2 ± 5,3 20,8 ± 5,2 18,5 ± 3,7 16,7 ± 2,8* 11,9 ± 3,8** 21,0 ± 5,1 19,5 ± 6,5 16,1 ± 2,9* 13,9 ± 2,6* 16,3 ± 3,5** Таблица 4 — Анальгетическая активность индоментила (6,25, 12,5 и 25 мг/кг) и индометацина (10 мг/кг) после однократного введения в желудок за 8 ч до инъекции формалина под плантарный апоневроз крыс (М ± m) Условия эксперимента В течение 0–15 мин количество В течение 15–60 мин количество Всего облизываний потряхиваний облизываний потряхиваний облизываний потряхиваний Льняное масло (контроль 1) Изотонический раствор натрия хлорида (контроль 2) Индоментил, 6,25 мг/кг Индоментил, 12,5 мг/кг Индоментил, 25 мг/кг Индометацин, 10 мг/кг 4,5 ± 1,5 4,7 ± 1,3 3,5 ± 1,0 4,0 ± 1,2 2,6 ± 0,6 3,5 ± 1,0 11,0 ± 3,5 12,3 ± 3,3 11,8 ± 1,5 13,8 ± 3,9 9,8 ± 3,2 9,6 ± 2,4 21,0 ± 6,9 22,8 ± 5,2 29,8 ± 1,2 14,0 ± 4,2 11,2 ± 2,3 17,3 ± 5,1 49,6 ± 16,0 48,9 ± 6,5 27,2 ± 7,4 18,5 ± 1,3* 4,6 ± 1,2* 9,5 ± 3,1** 25,5 ± 8,5 27,5 ± 8,9 22,3 ± 3,1 18,0 ± 5,6 13,8 ± 3,9* 20,8 ± 5,7 60,6 ± 19,9 61,2 ± 20,1 42,3 ± 9,1 30,3 ± 6,6* 14,5 ± 3,1* 19,1 ± 5,5** Примечания к таблице 3 и таблице 4: * р < 0,05 по сравнению с показателем контроля 1; ** р < 0, 05 по сравнению с показателем контроля 2. индоментил в дозах 6,25–25 мг/кг и индометацин в дозе 10 мг/кг в первой фазе проявления боли не уменьшали количество облизываний и потряхиваний поврежденной формалином конечности. Во второй фазе соматогенной боли индоментил в дозах 6,25–25 мг/кг не уменьшал количество облизываний поврежденной лапки, в дозе 6,25 мг/кг не изменял количество потряхиваний, в дозах 12,5 и 25 мг/кг уменьшал число потряхиваний на 62,5 и 90,5 % (p < 0,05) соответственно. Индометацин в дозе 10 мг/кг не изменял количество облизываний, но уменьшал число потряхиваний на 80,5 % (p < 0,05). На протяжении всего периода наблюдения (60 мин) индоментил в дозе 6,25 мг/кг не оказывал анальгетического действия; в дозах 12,5 и 25 мг/кг уменьшал количество облизываний поврежденной формалином конечности на 30 % (p > 0,05) и 46 % (p < 0,05) соответственно и уменьшал число ее потряхиваний на 50 % и 76 % соответственно (p < 0,05). Индометацин в дозе 10 мг/кг не влиял на количество облизываний лапки и уменьшал число ее потряхиваний на 68,5 % (p < 0,05). После однократного введения в желудок в дозах 12,5, 25 и 50 мг/кг концентрация индоментила в плазме достигала максимума (Tmax) через 7,2–8,8 ч и сохранялась на этом уровне (MRT) в течение 8–10 ч (рисунок 4). Системная экспозиция AUC (нг × ч/мл) при введении индоментила в дозе 12,5 мг/кг составляла 9055±2346, в дозе 25 мг/кг — 21065±6396, в дозе 50 мг/кг — 36519±9505. Максимальная концентрация индоментила (Cmax) при увеличении дозы повышалась линейно. Максимальная концентрация (Сmax) в плазме индометацина, высвобождаемого при гидролизе индоментила, достигалась через 12,8–16 ч (рисунок 5). Системная экспозиция AUC (нг × ч/мл) индометацина при введении индоментила в дозе 12,5 мг/кг составляла 34149±8644, в дозе 25 мг/кг — 61196±11726, в дозе 50 мг/кг — 205884±57920. Максимальная концентрация индометацина возрастала линейно с увеличением дозы индоментила. Системная экспозиция индоментила и его активного метаболита индометацина при введении в желудок увеличивалась линейно в диапазоне доз 12,5–50 мг/кг. При увеличении дозы индоментила с 12,5 до 50 мг/кг константа элиминации (kel) и период полуэлиминации (T1/2) индоментила и его активного метаболита индометацина не изменялись, что указывает на линейный характер фармакокинетики индоментила и высвобождаемого из него индометацина. Рисунок 4 — Фармакокинетический профиль индоментила в плазме крыс после введения дозах 12,5, 25 и 50 мг/кг Рисунок 5 — Фармакокинетический профиль индометацина в плазме крыс после введения индоментила в дозах 12,5, 25 и 50 мг/кг После однократного введения в желудок крысам максимальная концентрация препарата индометацина (10 мг/кг) составляла 11463±1250 нг/мл и достигала максимума через 4 ч. Показатель AUC индометацина составлял 588082±193853 нг × ч/мл. Площадь под кривой после однократного введения индоментила в дозе 25 мг/кг составляла 29810±7925 нг × ч/мл, индометацина, высвобождаемого из индоментила — 134211±19322 нг × ч/мл. При введении индоментила в течение 7-и дней площадь под кривой составляла 22636±3575 нг × ч/мл для индоментила и 138744±12960 нг × ч/мл для индометацина. Площадь под кривой как для индоментила, так и для индометацина не увеличивалась при многократном введении, что свидетельствует об отсутствии кумуляции индоментила и индометацина, освобождаемого в процессе гидролиза индоментила. После однократного введения препарата индометацина в дозе 5 мг/кг AUC составляла 493789±139371 нг×ч/мл, при введении в течение 7-и дней — 503541±163575 нг × ч/мл. Индометацин не кумулирует в организме, так как площадь под кривой при его многократном введении не увеличивалась. Введение индоментила в дозе 25 мг/кг крысам в желудок в течение 7-и дней не сопровождалось кумуляцией индоментила и его активного метаболита индометацина. Препарат индометацина в дозе 5 мг/кг не накапливался в организме, при этом его основные фармакокинетические показатели были в 3,5 раза выше показателей индометацина, высвобождаемого из индоментила. При однократном введении крысам в желудок индоментил в дозе 25мг/кг не оказывал ульцерогенного эффекта: в слизистой оболочке желудка не определялись эрозии и язвы. При четырехкратном введении индоментила в дозе 25 мг/кг появлялись единичные незначительные повреждения — одиночные точечные кровоизлияния и гиперемия (1 балл). Индометацин в дозе 10 мг/кг при однократном введении и в дозе 5 мг/кг при четырехкратном введении вызывал в слизистой оболочке желудка значительные и множественные повреждения — эрозии, язвы и кровоизлияния (3–3,5 балла). Индоментил в дозе 6,25 мг/кг при введении в течение 21-х сут не оказывал ульцерогенного действия у крыс с адъювантным артритом: в слизистой оболочке желудка не определялись эрозии и язвы. При введении индоментила в дозах 12,5 и 25 мг/кг крысам с адъювантным артритом появлялись единичные повреждения — одиночные точечные кровоизлияния и гиперемия (1 балл). После курсового введения индометацина в дозе 1 мг/кг в слизистой оболочке желудка крыс с адъювантным артритом регистрировались множественные эрозии, язвы и кровоизлияния (3–3,5 балла). Концентрация индометацина в слизистой оболочке желудка при однократном введении индоментила в дозе 25 мг/кг составляла 487,3±22,1 нг/г, при четырехкратном — 796,4±188,3 нг/г. Препарат индометацина при однократном введении в дозе 10 мг/кг создавал концентрацию 2590,7±240,1 нг/г, при четырехкратном введении в дозе 5 мг/кг — 3560,8±368,3 нг/г. У крыс с адъювантным артритом после введения на протяжении 21 сут концентрация индометацина в стенке желудка после введения индоментила в дозе 6,25 мг/кг составляла 931±231 нг/г, в дозе 12,5 мг/кг — 1326± ±342 нг/г, в дозе 25 мг/кг — 1724±549 нг/г. Препарат индометацина в дозе 1 мг/кг создавал в стенке желудка концентрацию 4589±989 нг/г. Концентрация индометацина в стенке желудка при его введении крысам в виде индоментила определялась в 2,6–5,3 раза ниже, чем при введении препарата индометацина. Слабое ульцерогенное действие индоментила можно объяснить относительно низкой концентрацией индометацина в слизистой оболочке желудка как при однократном, так и при многократном введении. При введении индоментила индометацин поступает в клетки слизистой оболочки желудка из системного кровотока после гидролиза эфирной связи эстеразами печени или очага воспаления, и в слизистой оболочке не образуется. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Впервые синтезированное соединение индометацина с ментолом — индоментил — оказывает противовоспалительное и анальгетическое действие не слабее известного НПВС индометацина. Индоментил даже при длительном введении не вызывает опасного ульцерогенного эффекта. Безопасность нового соединения обусловлена пролонгированным высвобождением индометацина из индоментила эстеразами нейтрофилов очага воспаления. При этом индоментил не создает высокой концентрации в слизистой оболочке желудка. Индоментил перспективен как эффективный и безопасный НПВС для длительного применения. ВЫВОДЫ 1. Сложный эфир индометацина и ментола индоментил в дозе 25 мг/кг при введении крысам в желудок за 8 ч до субплантарной инъекции каррагенина, гистамина и серотонина, оказывает антиэкссудативное действие, сопоставимое с эффектами препарата индометацина в максимально переносимой дозе 10 мг/кг. Препарат индометацина был эффективен при введении за 2 ч до эксперимента, но утрачивал противовоспалительное влияние при введении за 8 ч. 2. Индоментил в дозе 25 мг/кг при введении крысам в желудок в течение 7сут с интервалом 24 ч оказывает антиэкссудативное и антипролиферативное влияние при экспериментальном хроническом воспалении, вызванном у крыс подкожной имплантацией ватного тампона, в этом эксперименте противовоспалительное действие индоментила выражено слабее, чем эффект препарата индометацина в дозе 5 мг/кг. 3. При адъювантном артрите как модели хронического иммунного воспаления индоментил при введении в желудок в течение трех недель, начиная с 7-х сут после инъекции полного адъюванта Фрейнда, оказывает дозозависимое противовоспалительное действие: препятствует отеку задних конечностей, развитию пролиферативного синовита, внутрисуставного паннуса, дистрофических и некротических изменений в хрящевой ткани сустава; лечебное действие индоментила в дозе 25 мг/кг выражено сильнее, чем эффекты препарата индометацина в дозе 1 мг/кг. 4. Индоментил не слабее препарата индометацина уменьшает висцеральную боль, вызванную у мышей внутрибрюшинной инъекцией уксусной кислоты, и соматическую боль, вызванную у крыс субплантарным введением формалина. 5. Для индоментила при введении в желудок в дозах 12,5–50 мг/кг характерна линейная фармакокинетика, при многократном введении индоментил не кумулирует. Концентрация индометацина в плазме после введения индоментила в 1,3–7,1 раз меньше, чем концентрации препарата индометацина. 6. Индоментил в дозе 25 мг/кг у интактных крыс не оказывает ульцерогенного действия при однократном введении в желудок и вызывает слабое повреждение слизистой оболочки желудка при четырехкратном введении, при введении индоментила в течение трех недель крысам с адъювантным артритом на слизистой оболочке желудка появляются лишь единичные эрозии и кровоизлияния; препарат индометацина оказывает выраженное ульцерогенное действие даже при однократном введении в дозе 10 мг/кг. 7. В слизистой оболочке желудка интактных крыс концентрация индометацина, освобождаемого из индоментила, в 4,5–5,3 раза ниже, чем при введении препарата индометацина, в слизистой оболочке желудка крыс с адъювантным артритом — в 2,6–4,9 раз меньше.