Диагностическая значимость маркеров p53, p16, WT1 в аспирационном материале из полости матки у больных серозным раком яичников

В рамках диссертационной работы проведено проспективное исследование, на первом этапе которого обследовано 272 пациентки, обратившихся в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России по поводу опухолей яичников в период с 2013г. по 2019г. В сравнительном аспекте анализированы результаты исследований в 4 группах пациенток. В группу I (основная) были включены: 71 пациентка с серозным раком яичников III–IV стадии, прошедшие на первом этапе хирургическое лечение. При анализе морфологического строения опухоли после проведенного хирургического лечения больные разделились следующим образом: подгруппа с серозными high-grade карциномами — 51 пациентка; low-grade карциномами — 20 пациенток. В группу II вошли 50 пациенток с метастатическим поражением яичников из другого первичного очага. Из них: у 15 (30%) больных диагностирован рак молочной железы, у 9 (18%) рак толстой кишки, у 8 (16%) рак поджелудочной железы, у 6 (12%) рак желудка и у 2 (4%) рак почки. Группу III составили 50 пациенток с доброкачественными опухолями яичников, из которых: 15 (30%) больных с серозными папиллярными цистаденомами, 13 (26%) муцинозными цистаденомами, 8 (16%) зрелыми тератомами, 8 (16%) текомами, 6 (12%) – эндометриоидными цистоаденомами. В группу IV (контрольная) были
включены 50 практически здоровых женщин-добровольцев, которым была выполнена диагностическая аспирация содержимого полости матки.
Критерии включения пациенток в исследование были следующими:
 возраст старше наступления менархе;
 наличие родов в анамнезе;
 наличие объемных (одно- или двусторонних) образований в области
придатков матки по данным гинекологического осмотра и/или подтвержденного инструментальными методами обследования (УЗИ органов малого таза, КТ органов брюшной полости с контрастным усилением, МРТ органов малого таза с контрастным усилением);
 давшие согласие на исследование.
У всех пациенток с опухолями яичников диагноз заболевания был в дальнейшем подтвержден морфологически.
Критерии исключения пациентов из исследования были следующими:
 отсутствие возможности проведения хирургического лечения на 1-м этапе и морфологического подтверждения диагноза;
 обнаружение отличной от серозной (муцинозной, эндометриоидной, светлоклеточной) формы РЯ, неэпителиальных ЗНО придатков и/или рака шейки матки, а также рака эндометрия по результатам морфологического исследования операционного материала;
 неоадъювантная терапия по поводу РЯ в анамнезе;
 наличие в анамнезе экстирпации матки и/или без придатков, двусторонней аднексэктомии;
 атрезия цервикального канала.
 отказ пациентки от проведения аспирации содержимого полости матки. Стадирование заболевания проводилось в соответствии с классификацией TNM 8-
ое изд., FIGO от 2014 года.
Для получения наиболее информативного материала из полости матки методика аспирации образцов клеток из последней была усовершенствована нами с помощью применения двухпросветного центрального венозного катетера REFCV-17702-Е фирмы Аrrow International Inc., США (Рисунок 1).

Рисунок 1 — Двухпросветный центральный венозный катетер REFCV-17702-Е фирмы Аrrow International Inc. (США)
В амбулаторных условиях при визуализации шейки матки в зеркалах после обработки влагалища водным раствором хлоргексидина для удобства манипуляций последняя фиксировалась пулевыми щипцами. Затем через цервикальный канал в полость матки вводился двухпросветный силиконовый катетер, к которому подсоединялись два шприца объемом 20 мл, один из которых был наполнен 0,9% раствором хлорида натрия. После введения катетера в полость матки (что достоверно определялось введением его на глубину до советующей заводской маркировке на его поверхности) производилось медленное введение физиологического раствора из подключенного к катетеру шприца с одномоментной аспирацией полученного материала в пустой. Материал помещали в эппендорф-пробирку с питательной средой и доставляли в лабораторию. Таким образом, в отличии от аспирации содержимого полости матки с применением урологического зонда типа Пайпель, данный метод позволил нам изучить клеточный состав содержимого полости матки, минимизируя содержание в нем форменных элементов крови и пластов клеток эндометрия.
В рамках научной работы проведено 221 цитологическое и 663 ИЦХ исследования образцов аспирационного материала из полости матки. На первом этапе полученный материал подвергался рутинному цитологическому исследованию с целью выявления в образце клеток карциномы, после чего выполнялось ИЦХ исследование на маркеры p53, p16, WT1: были заготовлены цитоспиновые многослойные препараты системы Cytospin — серия многослойных цитопрепаратов на центрифуге Cytospin — 3 в режиме 1000 g/мин в течение 5 минут. Два мазка

окрашивали по Лейшману, на 3-х проводили ИЦХ исследование с моноклональными антителами (МКАТ) к p53, p16, WT1 (Таблица 1).
Таблица 1 — Характеристика МКАТ, использованных для проведения иммуноцитохимического анализа аспирационного материала из полости матки
Клон
p53 DO-7 1:25-1:50
p16 WT1
Остальные препараты (6–4) фиксировали в химически чистом ацетоне при температуре +4 – +8 oС и архивировали при –20 oС, предварительно завернув в фольгу. Процедура ИЦХ окрашивания производилась с применением автоматизированной системы BenchMark ULTRA (иммуногистостейнер Ventana). Все препараты докрашивали гематоксилином Майера в течение 30 секунд и заключали в бальзам. Оценка экспрессии маркеров в полученном материале проводилась качественно: ядерная реакция проявлялась разной степенью интенсивности и полнотой коричневого окрашивания ядра. Схема оценки степени выраженности экспрессии того или иного маркера была следующей: отрицательная реакция трактовалась как полное отсутствие или экспрессия антигена менее чем в 5% ядер опухолевых клеток, слабоположительная – при наличии реакции в 6–25% ядер, умеренно положительная в 26–75%, выраженная — более чем в 75% ядер. За положительный результат принята экспрессия маркера с умеренной и выраженной интенсивностью окраски ядра (Таблица 2).
Таблица 2 — Схема оценки ИЦХ реакции с МКАТ к р53, р16, WT1
МКАТ
Разведение
E6H4
1:25-1:50
6F-H2
1:75-1:150
Результат
Количество окрашенных ядер в
Экспрессия маркеров
ИЦХ реакции
поле зрения
Полное отсутствие окрашенных
Отрицательная
ядер или окрашивание менее 5%
ядер опухолевых клеток
Наличие реакции в 6–25% ядер
опухолевых клеток
Умеренно
Наличие реакции в 26–75% ядер
положительная
опухолевых клеток
Более чем в 75% ядер
опухолевых клеток
Отрицательный
Положительный
Слабо положительная
Выраженная

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Результаты цитологического и иммуноцитохимического исследования аспирационного материла больных серозным раком яичников
При рутинном цитологическом исследовании аспирационного материала из полости матки больных серозным high-grade РЯ единичные клетки соответствующей карциномы или их комплексы были выявлены у 33 пациенток, что составило 64,7% (Рисунок 2). В остальных 28 наблюдениях high-grade карцином клеток рака в аспирационном материале, как и положительных реакций с МКАТ к р53, р16, WT1, выявлено не было. При ИЦХ исследовании в 31 наблюдении (61%) прослеживалась выраженная или умеренная ядерная экспрессия белка p53 (рис. 11), ядерная экспрессия WT1 в 24 из 51 (47%) образцах, ядерная экспрессия р16 в 25 из 51 (49%).
Рисунок 2 — Цитопрепарат аспирационного материала из полости матки пациентки из группы high-grade серозного рака яичников: 1— клетки серозной карциномы яичников, 2 — пласт клеток эндометрия (×200)
Стоит отметить, что положительная экспрессия p53, p16, WT1 прослеживается у 17 пациенток, в материале которых при световой микроскопии были выявлены железисто- папиллярные комплексы, что составило 33% от их общего количества исследуемых в группе high-grade карцином (n=51). Отрицательная реакция всей комбинации маркеров отмечена у 16 пациенток этой группы, что обусловлено в первую очередь отсутствием злокачественных клеток в полученном материале (Рисунок 3).

Рисунок 3 — Характерные папиллярные структуры серозного рака high-grade. Ядерная экспрессия p53. Препарат Cytospin. Окраска по Лейшману (×200)
В единичных клетках пролиферирующего эндометрия в образцах аспирационного материала 4-х больных группы high-grade карцином яичников отмечена ядерная экспрессия белка p53 и p16 на фоне отрицательной реакции WT1 иотсутствии морфологических признаков атипии (Рисунок 4). При тщательном морфологическом исследовании операционного материала этих пациенток вэндометрии выявлена сложная гиперплазия без атипии. Таким образом возможно выдвинуть предположение, что положительная экспрессия р53 и р16 в этих наблюдениях может свидетельствовать о проявлении самых ранних молекулярных механизмов малигнизации эпителия эндометрия.
аб
Рисунок 4 — Ядерная экспрессия белка р16 (а) р53 (б) в клетках неизмененного
эпителия эндометрия пациентки IV группы (контрольной). Окраска по Лейшману (×200)
Из 20 больных low-grade карциномами у 12 пациенток (60%) при цитологическом исследовании аспирационного материала из полости матки были выявлены единичные клетки карциномы или их комплексы, что подтвердилось и при ИЦХ исследовании полученного материала –выраженная ядерная экспрессия WT1 прослеживалась в этих же 12 образцах, в то время как реакция с МКАТ к белку р53 была слабой или умеренной и наблюдалась лишь в образцах 2-х пациенток. Ядерная экспрессия р16 прослеживается

в образцах 3х больных. В аспирационном материале 8 (40%) больных low-grade карциномами клеток рака выявлено не было (Таблица 3).
Таблица 3 — Сравнительная характеристика экспрессии маркеров р53, р16, WT1 в аспирационном материале из полости матки больных различными гистологическими подтипами серозным раком яичников IIIc–IV стадии
ИЦХ исследование образцов
Гистологический
подтип серозного
рака яичников
Цитологическое
исследование образцов
Клетки рака
выявлены
Клетки
рака не
р53
р16
WT1
выявлены
High grade (n=51)
33 (64,7%)
28 (36,3%)
31 (61%)
25 (49%)
24 (47%)
Low grade (n =20)
12 (60%)
8 (40%)
Слабая ядерная экспрессия белка р53 в отдельных клетках эндометрия без признаков атипии при отсутствии в исследуемом материале клеток серозной карциномы зафиксировано у 2-х (10%) пациенток группы low-grade карцином. При морфологическом исследовании эндометрия в последнем патологии не выявлено. В 7 (35%) наблюдениях в полученном материале присутствуют комплексы клеток карциномы сосочкового строения свыраженной экспрессией WT1 на фоне отрицательной реакции с МКАТ к р16 (Рисунок 5).
Рисунок 5 — Ядерная экспрессия WT1 в комплексах клеток карциномы, выявленных в аспирационном материале из полости матки больной low-grade серозным раком яичников (х1000)
Экспрессия р53 в этих комплексах не выявлена. Положительная реакция WT1 указывает на принадлежность комплексов клеток рака к серозному типу аденокарцином. У 3-х (15%) больных в аспирационном материале из полости матки выявлены
2 (10%)
3 (15%)
12 (60%)
Итого (n=71)
45 (63,4%)
36 (50,7%)
33 (46,5%)
28 (39,4%)
36(25,6%)

комплексы клеток рака с выраженной ядерной экспрессией WT1 в сочетании с ядерной экспрессией p16 (WT1+/p16+), что позволяет предположить принадлежность к low-grade подтипу серозных карцином.
Результаты цитологического и иммуноцитохимического исследования аспирационного материла больных с метастатическим поражением яичников, доброкачественными опухолями яичников и больных контрольной группы
В 48 (96%) наблюдениях метастазов в яичниках (карцином кишки, почки, молочной железы, желудка и поджелудочной железы) при цитологическом исследовании аспиратов у больных клеток рака выявлено не было. Только в одном наблюдении у пациентки с метастазом колоректального рака в яичник в аспирате из полости матки выявили клетки аденокарциномы эндометриоидного типа, что также подтвердилось при ИЦХ исследовании выраженной положительной экспрессией белка р53 (Таблица 4).
Таблица 4 — Результаты цитологического и иммуноцитохимического исследования аспирационного материла пациенток с метастатическим поражением яичников
рака
— Желудок 6-6— 1–
— 8 – 8 (100%) – – – 48 2–
У одной из пациенток с метастазом РМЖ в яичнике, в аспирате из полости матки определялись псевдопапиллярные скопления эпителиальных клеток без выраженных признаков злокачественности, подозрительные в отношении пограничной опухоли яичников. При ИЦХ исследовании отмечалась умеренная положительная реакция белка
Локализация
Количество
первичного очага
образцов
Цитологическое
ИЦХ исследование
исследование образцов
образцов
Клетки
рака
WT1
выявлены
Клетки
рака не
выявлены
p53
p16
Молочная железа
15 –
15 (100%)
(100%)
Толстая кишка
1 (11%)
8 (89%)
Почка
2-
2 (100%)
Поджелудочная
железа
Итого

р53 в 10% опухолевых клетках и высокий индекс пролиферативной активности Ki67 = 65%.
При классическом цитологическом исследовании аспиратов из полости матки 50 пациенток с доброкачественной патологией яичников атипических клеток в материале не найдено. В двух наблюдениях серозной цистаденомы яичников при ИЦХ анализе выявлена умеренная экспрессия р53 в части клеток эпителия эндометрия, причем в одном из них отмечалась умеренная экспрессия р16 и высокий индекс Ki67=50%, при отсутствии экспрессии WT1.
В группу IV (контрольную) вошли 50 практически здоровых женщин- добровольцев, проходивших профосмотр. При цитологическом исследовании клеточного состава аспиратов из полости матки у всех женщин, не имеющих в анамнезе патологии со стороны гинекологической сферы, клеток рака не было выявлено. Проведено ИЦХ исследование с антителами к антигенам WT1, р53, р16: экспрессия WT1 — отрицательная во всех 50 наблюдениях, положительная ИЦХ реакция с р16 отмечалась в 3 исследованиях, но имела слабо выраженную экспрессию в единичных клетках подтвержденного в дальнейшем гистологически пролиферирующего эндометрия. Экспрессия р53 была отрицательная 49 женщин, и только в одном наблюдении отмечена слабая очаговая экспрессия белка р53 в клетках эпителия эндометрия. В дальнейшем, при динамическом наблюдении в течении нескольких лет, методом аспирационной биопсии гистологически были диагностированы: в 3 наблюдениях — простая железистая гиперплазия эндометрия, в 2 — атипическая гиперплазия, 1 вариант аденомиоза. У остальных 45 обследуемых отмечены варианты физиологического состояния эндометрия.
Анализ показателей диагностической информативности цитологического метода исследования
При оценке эффективности цитологического метода с применением жидкостной цитологии и системы Cytospin для исследования аспирационного материала из полости матки в диагностике серозных карцином яичников, установлено что, чувствительность диагностического подхода не столь высока и составляет 63,3% при высокой специфичности, достигающей 99% (Рисунок 6).
Рисунок 6 — ROC-кривая для цитологического метода, основанного на применении жидкостной цитологии и системы Cytospin для исследования аспирационного материала из полости матки в диагностике серозных карцином яичников
Прогностическая ценность положительного результата при этом так же высока и составляет 99%, в то время как прогностическая ценность отрицательного результата составила 65,8%. Диагностическая точность метода составляет 78,5%. При сравнении группы больных СКЯ (n=71) c группой больных доброкачественными опухолями (n=50), группой больных с метастатическим поражением яичников (n=50) и группой контроля (n=50) установлено, что в обоих случаях цитологический метод исследования аспирационного материала из полости матки может применяться в качестве дополнительного метода для проведения дифференциальной диагностики новообразований яичников: данные ROC-анализа практически идентичны и AUC (area under curve, площадь под кривой ошибок) составляет 0,817.
Анализ результатов ИЦХ метода исследования аспирационного материала из полости матки в диагностике серозных карцином яичников
Оценка экспрессии маркеров p53, p16, WT1 в аспирационном материале из полости матки выполнялась у всех пациенток исследуемых групп, различия в экспрессии являются статистически значимыми (p<0,0001). Сводные данные о показателях диагностической информативности маркеров и их комбинации представлены в таблице 5. Ниже рассмотрим подробнее каждый из них. Данные об уровне чувствительности ИЦХ исследования экспрессии маркеров и их комбинации в аспирационном материале из полости матки при серозном раке яичников обоих гистологических подтипов представлены на рисунке 7. Таблица 5 — Показатели диагностической информативности ИЦХ метода исследования маркеров р53, р16, WT1 и их комбинации в диагностике серозных карцином яичников Показатель Комбинация Чувствительность, % Диагностическая точность, % р53 р16 WT1 47,89 38,03 52,11 98,00 94,00 97,14 90,00 100,0 57,0 51,6 59,5 68,60 61,16 71,90 63,38 98,00 97,80 65,3 77,69 Специфичность, % 100,00 Прогностическая ценность положительного результата, % Прогностическая ценность отрицательного результата, % При сравнении показателей диагностической информативности маркеров и их комбинации для групп больных СКЯ (n=71) и больных с метастатическим поражением яичников (n=50) установлено, что наибольшей чувствительностью обладает комбинация всех 3х маркеров, составляя 63,38%, а также маркер WT1, составляя 52,11%. Рисунок 7 — Чувствительность маркеров р53, р16, WT1 в аспирационном материале из полости матки у пациенток с серозным раком яичников III–IV стадии Рассматривая различия в уровне показателя специфичности исследуемых маркеров и их комбинации нельзя не отметить, что согласно полученным нами данным специфичность маркера WT1 в группе больных серозными карциномами яичников достигает 100% — в образцах аспирационного материала из полости матки всех больных серозным раком яичников, включенных в настоящее исследование не выявлено ни одного ложно-отрицательного результата, то есть наличие экспрессии WT1 клетками карциномы в аспирате прослеживалось только у пациенток группы серозных карцином обоих гистологических подтипов. Принимая во внимание, что исследуемый диагностический подход продемонстрировал достаточно высокую специфичность (Рисунок 8), на фоне не столь значительной чувствительности, чтобы рассматриваться в качестве скринингового метода диагностики серозных карцином яичников, наиболее целесообразно его внедрение в клиническую практику в качестве дополнительного, а не основного метода обследования при подозрении на СКЯ, а также учитывая данные логистической регрессии с последующим ROC-анализом для проведения дифференциальной диагностики между и high-grade и low-grade серозными карциномами яичников, первичным серозным раком яичников и метастатическим поражением придатков из другого первичного очага и доброкачественными опухолями яичников. Рисунок 8 — Специфичность маркеров р53, р16, WT1 и их комбинации в аспирационном материале из полости матки пациенток с серозным раком яичников III–IV стадии На рисунках 9 и 10 представлены обобщенные данные опредсказательной ценности положительного и отрицательного результатов ИЦХ исследования маркеров p53, p16, WT1 и их комбинации в диагностике СКЯ. Согласно полученным нами данным наибольшей предсказательной ценностью положительного результата в группе СКЯ обладает маркер WT1, экспрессия которого во всех образцах, содержащих клетки аденокарциномы, свидетельствует о СКЯ. Рисунок 9 — Предсказательная ценность положительного результата экспрессии маркеров p53, p16, WT1 в аспирационном материале из полости матки пациенток с серозным раком яичников III–IV стадии Рисунок 10 — Предсказательная ценность отрицательного результата экспрессии маркеров p53, p16, WT1 и их комбинации в аспирационном материале из полости матки больных серозным раком яичников III–IV стадий Анализируя сравнительные данные о диагностической точности маркеров p53, p16, WT1 и их комбинации в диагностике СКЯ, представленных на рисунке 11, очевидным становится увеличение показателя при использовании всех трех маркеров по сравнению с каждым из них в отдельности. Наибольшей диагностической точностью обладает маркер WT1: при сравнении результатов ИЦХ исследования группы больных СКЯ (n=71) и с таковыми в контрольной группе установлено, что диагностическая точность последнего составляет 71,9%, в то время как значение этого показателя для маркера p53 составило 68,6%, р16 — 61,16%. Рисунок 11 — Диагностическая точность экспрессии маркеров p53, p16, WT1 в аспирационном материале из полости матки больных серозным раком яичников III–IV стадии Обобщая вышеизложенное, становится очевидной необходимость оценки экспрессии маркеров p53, p16, WT1 именно в комбинации, причем на первом этапе ИЦХ исследования аспирата из полости матки при подозрении на СКЯ целесообразно оценить экспрессию WT1, что позволит установить принадлежность атипических клеток к серозному типу карцином, а анализ экспрессии маркеров p53 и р16 в образцах аспиратов больных позволяет предположить принадлежность конкретного наблюдения к подгруппе high-grade или же low-grade подтипов. При построении логистической регрессионной модели с двумя маркерами p53 и р16 было установлено, что диагностическая значимость маркера p16 при отсутствии данных об экспрессии WT1 полностью утрачивается, а значение AUC составляет 0,763 (Рисунок 12а). Формирование выборки больных серозными карциномами яичников с положительным WT1 статусом и последующая оценка экспрессии маркеров p53 и р16 в ней приводит к увеличению AUC до 0,873 (Рисунок 12б). Оценивая экспрессию маркеров p53 и p16 в аспирационном материале которых выявлены клетки карциномы с положительной ядерной экспрессией WT1, установлено, что использование этих двух маркеров одновременно только в группе испытуемых с положительным WT1-статусом повышает диагностическую чувствительность модели (p=0,05). При этом предсказательная ценность положительного результата составляет 89,3%, а отрицательного — 99%. Из этого следует, что при анализе аспирационного материала из полости матки после установления факта наличия в нем клеток карциномы наиболее целесообразно оценивать экспрессию маркера WT1. аб Рисунок 12 — ROC-анализ (выборка больных СКЯ обоих гистологических подтипов): а — при оценке экспрессии p53 и p16 у пациенток СКЯ; б — при оценке экспрессии p53 и р16 у пациенток с СКЯ с положительной экспрессией WT1 Анализ диагностической информативности ИЦХ исследования аспирационного материала из полости матки на маркеры p53, p16, WT1 и их комбинации в дифференциальной диагностике опухолей яичников При расчете показателей диагностической информативности исследуемых маркеров в подгруппе больных СКЯ high-grade подтипа (n=51) при сравнении с группой low-grade (n=20), установлено, что диагностическая чувствительность всей комбинации маркеров в качестве метода дифференциальной диагностики составляет 64,7% при специфичности равной 85%. Анализ показателей этой подгруппы пациентов в сравнении с таковыми в подгруппе больных low-grade карциномами (n=20), продемонстрировал статистическую значимость различий между ними (p<0,0001). Сравнительные данные чувствительности и специфичности маркеров и их комбинации в диагностике high-grade карцином яичников представлены на рисунке 13. Рисунок 13 — Показатели информативности маркеров p53, p16, WT1 и их комбинации в диагностике high-grade подтипа СКЯ При проведении ROC-анализа в качестве дополнительного для проведения дифференциальной диагностики СКЯ high- grade и low-grade подтипов: значение AUC составляет 0,833 при p<0,0001 (Рисунок 14). Рисунок 14 — Кривая ROC-анализа информативности оценки экспрессии комбинации маркеров для дифференциальной диагностики high-grade и low-grade карцином Кроме того, при проведении ROC-анализа экспрессии маркеров и их комбинации пациенток с СКЯ, доброкачественными опухолями яичников и с метастатическим поражением яичников из другого первичного очага было установлено, что в обоих случаях максимальное значение AUC достигается при оценке комбинации и составляет 0,817 для группы доброкачественных опухолей и 0,831 для группы метастазов (Рисунок 15). установлено, что метод применим аб Рисунок 15 — Кривая ROC-анализа информативности оценки экспрессии комбинации маркеров для дифференциальной диагностики: а – СКЯ и доброкачественных опухолей яичников; б – СКЯ и при метастатическом поражении яичников Таким образом, можно сделать вывод, что ИЦХ исследование экспрессии комбинации маркеров p53, p16, WT1 в аспирационном материале из полости матки может служить дополнительным методом для проведения дифференциальной диагностики опухолей яичников. ВЫВОДЫ 1. Аспирационный материал из полости матки, полученный с помощью двухпросветного силиконового катетера, является диагностически информативным методом и позволяет подтвердить диагноз серозного рака у пациенток с III–IV стадиями болезни в 63,3% наблюдений (45 из 71). 2. При ИЦХ исследовании аспирационного материала из полости матки у больных исследуемых групп установлено, что различия в экспрессии маркеров р53, р16, WT1 являются статистически значимыми, при относительно невысокой чувствительности анализа их комбинации (63,7%) и выраженной̆ специфичности (98%) подход может быть использован в качестве дополнительного метода диагностики, но не для первичного скрининга болезни. 3. Значение оценки качества (AUC) ИЦХ анализа экспрессии комбинации маркеров р53, р16 и WT1 в диагностике серозных карцином яичников превышает таковую при анализе каждого маркера в отдельности. 4. При ИЦХ исследовании аспирационного материала из полости матки целесообразно на первом этапе оценивать экспрессию маркера WT1, при положительной экспрессии которого дальнейший анализ наличия совместной экспрессии маркеров p53 и р16 позволяет увеличить предсказательную ценность положительного результата до 89,3%, а отрицательного — до 99%. 5. Иммуноцитохимическое исследование экспрессии маркеров WT1, p53, p16 в аспирационном материале из полости матки может быть использовано в качестве вспомогательного метода для дифференциальной диагностики между и high-grade и low- grade серозными карциномами яичников, а также между первичным серозным раком яичников и опухолями яичников иного морфологического строения.