Диагностика паразитарной инвазии мониезиоза овец на фоне микроэлементоза и ее терапия антигельминтными препаратами

Исследования проводили на факультете ветеринарной медицины ФГБОУ ВО «Астраханский государственный университет» с 2019 до 2021 г.
Общая схема исследований представлена на рисунке 1.
Рисунок 1 – Общая схема исследований
1. Экологическая оценка содержания микроэлементов в системе «почва – растение – животные». Образцы экосистемы (почвы, растений, воды и кормов) были собраны на пастбищах Астраханской области. Кроме того, у 50 овец для анализа
были взяты различные ткани и органы с целью определения уровня микроэлементов. Средние пробы почвы, воды, растений, кормов и различных органов были взяты для микроэлементного анализа в соответствии с общепринятыми методиками (Ermakov V.V. et al., 2007; Хисметов И.И. и Воробьев Д.В., 2012). Образцы почвы с пастбищ отбирали с разной глубины с помощью пробоотборного шнека. Было собрано по шесть образцов с каждого из выбранных пастбищ и проведена репрезентативная выборка. Точно взвешенный 1 г высушенной на воздухе почвы был обработан по методу M.C. Amacher (1996). Кормовые виды растений собирали с пастбищ в трех повторностях. Образцы растений были собраны после тщательного наблюдения за режимом выпаса овец.
Микроэлементы в отобранных образцах определяли методом атомной абсорбционной спектрофотометрии на спектрофотометре CHITAHI 180-50 (Япония).
2. Распространенность мониезиоза в Астраханской области. Для скрининга инвазии мониезиоза было собрано 1500 свежих образцов фекалий от овец, разных по возрасту и полу, из различных районов Астраханской области. Сбор образцов фекалий овец проходил с июня 2019 по июнь 2020 г. Образцы фекалий были собраны ректально и хранились в герметичных пластиковых пакетах при низких температурах перед транспортированием на факультет ветеринарной медицины Астраханского государственного университета.
Паразитологическое обследование. Образцы фекалий овец всех групп собирали на нулевой, 7, 17 и 30-й дни лечения. Образцы для диагностики мониезиоза были взяты ректально, от животных из всех групп.
В лаборатории образцы фекалий в контейнерах перемешивали стеклянной палочкой, взвешивали (2 г каждая проба), а затем анализировали с использованием метода флотации Фюллеборна (Gałęcki R. et al., 2015). Наличие в образцах фекалий яиц рода Moniezia исследовали под микроскопом.
Зрелые членики гельминтов рода Moniezia были собраны из фекалий исследуемых овец породы советский меринос. Проглоттиды были зафиксированы в 10%-м нейтральном фосфатно-буферном формалине и обработаны для дальнейшего гистологического исследования, а затем окрашены гематоксилином и эозином (Н&Е). Для исследования на сканирующем электронном микроскопе (СЭМ) зрелые проглоттиды были помещены в небольшое количество солевого буфера. После этого их фиксировали в течение ночи в холодной воде 2,5%-м глутаровым альдегидом в буфере какодилата натрия 0,1 М при рН 7,4. Затем зрелые проглоттиды были обезвожены в серии градуированных этанолов и высушены с использованием CO2 в сушилке для критических точек Emitech K850. После образцы были покрыты золотом/палладием в соответствии с технологиями Кворума SC7640, сфотографированы и исследованы с помощью JEOLJSM 5400 LV (СЭМ) 15-25 КВ (YildizK., 2007).
Тест полимеразной цепной реакции (ПЦР). Чтобы подтвердить идентичность ленточных червей, образцы спонтанно выделяемых паразитарных сегментов подвергали тесту полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием ген Cox1.
Cox1, праймеры были F: TGTTGAGTATGTGGTTTGGTGC и R: AACTACCCACCATACCACAGGATC, которые амплифицируют область в 684 п.н. ДНК, от инвазивных сегментов гельминтов. Продукты ПЦР в 1,25%-х агарозных гелях подвергали электрофорезу и визуализировали с использованием освещения на основе бромистого этидия, экранированного с помощью УФ-сканера.
3. Влияние мониезиоза на некоторые гематологические, биохимические и гормональные параметры организма овец. Лечение мониезиоза.
Производственный опыт проводили в селе Песчаное Лиманского района Астраханской области. Всего было отобрано 50 овец, зараженных естественным мониезиозом, в возрасте 3 лет, с массой тела 43±1,6 кг. После нумерации с помощью ушных бирок и взвешивания животных разделили на пять экспериментальных групп по 10 животных в каждой. Животным 1-й группы вводили «Альбен форте» (Г1), 2-й группы – «Празивер» (Г2), 3-й группы – «Альвет» (Г3); 4-я группа – без лечения, служила контролем с диагнозом мониезиоз (Г4), 5-я группа – здоровые животные (Г5). Схема эксперимента представлена в таблице 1.
Таблица 1 – Схема применения препаратов
Группа
Название, форма препарата и действующее вещество
Доза по ДВ и способ применения
Фирма производитель
1
Альбен форте (Albenum® forte) суспензия для перорального
Терапевтическая доза по ДВ 10/7,5 мг/кг соответственно, альбендазола и оксиклозанида, по препарату 1 мл/5 кг массы тела, перорально
Организация-
разработчик:
применения.
ООО «НВЦ
Альбен форте в качестве действующих веществ в 1 мл содержит альбендазол – 50 мг и оксиклозанид – 37,5 мг, а также
Агроветзащита»,
г. Москва.
вспомогательные вещества:
Страна-
2
Празивер (Praziver) суспензия
Терапевтическая доза по ДВ 2,5/0,2 мг/кг
, по препарату 4 мл/10 кг массы тела,
перорально
производитель:
для орального применения.
в1
мл содержит в качестве действующих веществ:
празиквантел-25мг,
празиквантеля и
.
Московская обл.
ООО «Апи- Россия. Адрес: 143985,
Россия
НПФ Сан»,
ивермектина
ивермектин-5 мг
3
Альвет®-суспензия (Alvet- suspension). Альвет®-суспензия содержит в 1 мл в качестве действующего вещества альбендазол – 100 мг, а также
Терапевтическая доза о
5 мл/5 кг массы тела, перорально
Страна-
производитель:
вцам при мониезиозе,
Нита- Фарм ООО, г.
Россия,
применяют в дозе 0,5 мл суспензии на 10 кг массы животного (альбендазола
Саратов,
ул.Осипова,
5,0 мг/кг)
вспомогательные вещества:
д.1,Ю
а/я 1796
4 5
Контроль (больные животные)
Контроль (здоровые животные)
Лечение не проводилось
Лечение не проводилось
–
–
Образцы крови овец всех групп собирали на нулевой, 7, 17 и 30-й дни лечения.
Микроэлементы (селен, йод, кобальт), витамины (A, C, E и B12), гормоны и ферменты в отобранных образцах определяли атомно-абсорбционным методом на спектрофотометре CHITAHI 180-50 (Япония). Уровень продуктов перекисного окисления липидов (диеновые конъюгаты – ДК, малоновый диальдегид – МДА) и ферментов (каталаза – CAT, КФ 1.11.1.6; супероксиддисмутаза – СОД, КФ 1.15. 1.1 и глутатион пероксидаза – ГП, КФ 1.11.1.9), а также адренокортикотропный (АКТГ) и общий тиреотропный (ТТГ) гормон, общий трийодтиронин (T3), общий тироксин (T4) и кортизол в сыворотке крови определяли ферментно-связанным иммуноферментный анализом с использованием тест-систем Biomerica
(BiomericaATCHELISA, США), CORTIZOL-IFAK210, XEMACo, Ltd, Россия на ELISISQuattroELISA (Германия). После дегельминтизации контролировали клиническое состояние животных. За овцами опытной и контрольной групп внимательно наблюдали в течение 30 дней после лечения.
Цифровой материал подвергался статистической обработке с вычислением критерия Стьюдента на персональном компьютере с использованием стандартной программы вариационной статистики Microsoft Excel.
2.2 Результаты собственных исследований
2.2.1 Экологическая оценка миграции микроэлементов в системе «почва – растение – животное» в биогеохимических условиях Астраханской области
Выявлено, что различные типы почв Астраханской области содержат низкие концентрации таких микроэлементов, как кобальт (7,3 ± 1,02 мг/кг), селен (0,07 ± 0,021 мг/кг), йод (0,4 ± 0,02 мг/кг), марганец (135,4 ± 8,6 мг/кг), цинк (45,7 ± 3,8 мг/кг) и медь (12,4 ± 0,25 мг/кг).
Таблица 2 – Концентрация микроэлементов (Mn, Co, Cu и Se) в кормах овец в Астраханской области, мг/кг (n = 10; M±m)
Корма
Люцерна (сено) Разнотравье (сено луговое)
Житняк
Живокость полевая Суданская трава Лист березовый Лебеда татарская Овес песчаный Дурнишник колючий Верблюжья колючка Крапива
Полынь песчаная Картофель
Ячмень – зерно Аристида перистая Отруби
Костер кровельный Тростник обыкновенный Комбикорм Астрагалы
Микроэлемент
Mn Co Cu Se
45,2 ± 2,10 44,1 ± 2,03
48,0 ± 1,62 69,1 ± 4,12 91,1 ± 5,69 41,1 ± 3,05 23,0 ± 2,10 61,7 ± 1,39 25,1 ± 1,7 16,2 ± 0,71 129,2 ± 8,76 61,2 ± 3,54 61,3 ± 5,06 7,1 ± 0,53 26,6 ± 1,84 15,1 ± 2,2 19,3 ± 1,05 14,5 ± 6,03
91,3 ± 16,0 89,0 ± 6,3
0,6 ± 0,01 0,3 ± 0,005
0,38 ± 0,005 0,04 ± 0,006 0,05 ± 0,003 0,64 ± 0,02
– 0,36 ± 0,05
– – –
0,49 ± 0,08 0,28 ± 0,03 0,73 ± 0,02 0,67 ± 0,35 0,14 ± 0,02 0,03 ± 0,08 0,06 ± 0,07
1,6 ± 0,05 5,3 ± 0,15
8,8 ± 1,07 6,4 ± 0,37
4,4 ± 0,25 4,5 ± 0,28 4,9 ± 0,27 5,9 ± 0,98 2,8 ± 0,15 5,5 ± 0,27 3,3 ± 0,69 6,6 ± 0,08 6,7 ± 0,98 7,5 ± 0,87 7,6 ± 0,72 6,4 ± 0,18 6.6 ± 0,19 11.1 ± 0,95 7.5 ± 0,97 8,5 ± 0,13
7,7 ± 0,76 26,3 ± 2,93
0,04 ± 0,002 0,01 ± 0,001
0,02 ± 0,002 0,07 ± 0,0006 0,08 ± 0,14 0,04 ± 0,007 0,05 ± 0,006 0,03 ± 0,009 0,04 ± 0,003 0,05 ± 0,005 0,88 ± 0,059 1,06 ± 0,028 0,02 ± 0,004 0,04 ± 0,005 0,05 ± 0,005 0,08 ± 0,0013 1,67 ± 0,39 0,18 ± 0,04
1,02 ± 0,07 11,9 ± 3,14
Из данных, представленных в таблице 2, видно, что низкий уровень кобальта в кормах. Марганец содержится в растениях в оптимальных количествах, близких к его уровню в аналогичных макрофитах из черноземной области (Lukin S.V. et al., 2019)..
Концентрация кобальта в кормах зависит от концентрации марганца. Чем выше уровень марганца в почве, тем ниже абсорбция кобальта в корме.
По данным таблицы 2, концентрация меди в выявленных кормовых видах находилась на нижней границе нормы.
Уровень микроэлементов в органах и тканях овец существенно варьировал (см. таблицу 3). Наибольшее накопление селена отмечали в почках (0,52±0,003 мг/кг) и органах пищеварительного тракта (0,32–0,43 мг/кг), что связано с процессами всасывания и выделения микроэлемента в организме. Концентрация меди в тканях организма распределялась неравномерно.
Наименьшая концентрация микроэлемента определена в скелетной мускулатуре и костной ткани, в остальных органах и тканях содержание меди колебалось от 12,7±0,05 до 21,2±0,03 мг/кг.
Таблица 3 – Уровни некоторых микроэлементов в органах и тканях овец, мг/кг (n = 10; M±m)
Органы, ткани Мышцы
Печень
Селезенка
Кровь
Легкие
Почки
Стенка сычуга
Костная ткань
Se
0,03± 0,005 0,32±0,06 0,28±0,003 0,03± 0,002 0,06 ±0,002 0,52±0,003 0,32 ±0,005
0,04±0,016
Cu
5,7± 0,33 17,1±±0,21 14,6±1,04 13,5±1,91 24,2±0,15 12,7±0,05 15,3±0,04
8,21±0,02
Co
0,05±0,003 2,21±0,64 0,70±0,02 1,26±0,05 0,73±0,004 0,64±0,03 0,94±0,06
1,05±0,05
Mn
21,6±1,13 45,5±7,12 35,6±1,05 48,5±3,13 26,5±3,03 48,4±2,14 44,2±1,25
85,1±4,51
Zn
75,2±6,36 114,0±11,2 38,2±3,21 32,5±2,10 108,0±4,17 86,0±7,65 122,0±8,74
165,1±8,6
I2
0,04±0,003 0,25±0,002 0,07±0,003 0,23±0,023 0,22±0,024 0,27±0,003 0,31±0,07
0,27±0,053
Стенка тонкого кишечника
0,43±0,005
21,2±0,03
0,96±0,04
28,6±2,03
76,4±11,4
0,26±0,018
По содержанию кобальта изучаемые органы и ткани можно расположить в следующем порядке (по убыванию): печень (2,21±0,64 мг/кг) – кровь (1,26±0,05 мг/кг) – костная ткань (1,05±0,05 мг/кг) – стенка тонкого кишечника (0,96±0,04 мг/кг) – стенка сычуга (0,94±0,06 мг/кг) – легкие (0,73±0,004 мг/кг) – селезенка (0,70±0,02 мг/кг) – почки (0,64±0,03 мг/кг) – мышцы (0,05±0,003 мг/кг). Концентрация марганца в органах и тканях зависит от физиологической функции. Высокая концентрация микроэлемента установлена в костной ткани. В остальных изучаемых органах и тканях концентрация магния составляла от 21,6±1,13 до 48,5±3,13 мг/кг. Установлено, что из всех изучаемых микроэлементов в наибольшем количестве в организме содержится цинк. Максимальное его содержание отмечено в костной ткани и стенке сычуга – 165,1±8,6 и 122,0±8,74 мг/кг соответственно, а наименьшее – в крови и селезенке – 32,5±2,10 и 38,2±3,21 мг/кг соответственно. Наименьшая концентрация йода установлена в селезенке (0,07±0,003 мг/кг) и мышцах (0,04±0,003
мг/кг), в остальных изучаемых тканях и органах содержание микроэлемента составляло от 0,22±0,024 до 0,31±0,07 мг/кг.
Таким образом, результаты исследования указывают на низкий уровень некоторых микроэлементов в экосистеме Астраханской области. В наибольшем количестве в почве и растениях содержатся марганец и цинк, в наименьшем – селен. Из кормов наибольшим содержанием микроэлементов отличается астрагал. Кроме того, низкий уровень микроэлементов был выявлен в органах и тканях овец советской мериносовой породы. В наибольшем количестве в организме овец содержатся цинк и марганец, в наименьшем – йод и селен.
2.2.2 Распространенность мониезиоза в Астраханской области
Знание зональных особенностей эпизоотологии инвазивных заболеваний и жизненного цикла их возбудителей является важнейшим условием эффективных лечебно-профилактических противопаразитарных мероприятия.
Таблица 4 – Влияние пола, возраста и сезона на распространенность мониезиоза овец породы советский меринос в Астраханской области
Фактор
Распространенность Возраст:
Молодняк (<2 лет) Взрослые (> 2 лет) Пол:
самец
самка Сезон года:
зима весна летом
Всего исследовано, Зараженность
проб фекалий овец
овец ЭИ, %
1500 397
483 172 1017 225
816 113 684 284
256 58 343 127 584 116
26,46
35,61 22,12
13,85 41,52
22,65 37,02 19,86
Согласно полученным результатам (таблица 4), в 397 (26,46 %) образцах фекалий овец породы советский меринос была обнаружена инвазия мониезиоза. Количество животных, зараженных мониезиозом, в зависимости от возраста: молодые и взрослые – 35,61 и 22,12 % соответственно.
Наше исследование показывает, что мониезиозу более подвержены (на 35,61 %) ягнята.
Таким образом, мониезиоз впервые был зарегистрирован у овец советской мериносовой породы в Астраханской области на юге России. Возраст, пол и сезон представляют собой факторы риска для заражения. Дальнейшие исследования необходимы для оценки динамики паразитов и их воздействия на продуктивность овец породы советский меринос.
2.2.3 Терапевтическая эффективность антигельминтных препаратов при мониезиозе овец
2.2.3.1 Влияние различных антигельминтных препаратов на количество яиц в фекалиях овец, больных мониезиозом
Яйца рода Moniezia весьма своеобразны, с онкосферой, имеющей особый грушевидный аппарат.
11

В зрелых проглоттидах рода Moniezia установлено несколько отделений внутри, содержащих яйца. Яйца рода Moniezia скрыты толстым слоем капель подоболочки и содержат внутри грушевидный аппарат и крошечные крючки.
При исследовании с помощью сканирующей электронной микроскопии можно увидеть, что несколько яиц рода Moniezia накапливаются внутри проглоттид (рис. 2) и проглоттид, содержащих двусторонние генитальные поры и краспедот (рис. 3).
Результаты сравнительной эффективности препаратов «Альбен форте», «Празивер» и «Альвет», основанные на снижении количества фекальных яиц на естественно зараженных овцах с мониезиозом, представлены в таблице 5.
Рисунок 2 – СЭМ зрелых проглоттид рода Рисунок 3 – СЭМ зрелых проглоттид рода Moniezia benedini, показывающая скопление Moniezia benedini (двусторонние нескольких яиц внутри (оригинал) генитальные поры и краспедот) (оригинал)
Таблица 5 – Эффективность различных антигельминтиков при мониезиозе овец (расчёт эффективности по типу «критический тест»)
No Жив- Груп ных пы в
груп
пе.
Г1 10
Г2 10
Г3 10
Конт 10 рол.
Препа раты
Альбен форте Прази- фер
Альвет
Не лечен-
Доза по Снижение сред. кол-ва яиц мониезий, сутки ЭЭ,
0 сутки
7 сутки
% сниж яиц
17 сутки
% сниж .
яиц
30 сутки
ДВ
мг/кг.
По препар
10/7,5. 255,04 1 мл/5 кг ±24,74 2,5/0,2. 277,80 4мл/10 кг ±20,21*
5,0. 271,38±2 0,5мл/10кг 9,24
123,68 51,5 ±12,42
120,44 56,7 ±11,13*
173,58±8, 63,9
%
25,74 89,9 0 100 ±23,81
6,42 97,7 0 100 ±14,35
67
242,16±1 272,96±16,30
38,54 85,8 ±23,83 289,92±8,86
0 100 322,92 ±9,6
ные
* р≤0,05 – достоверность различий относительно Г4
– 6,70 –
Среднее количество яиц в фекалиях среди необработанной группы (Г4) овец варьировало от 242,16±16,70 до 322,92±9,60 за 30-дневный период исследования. По сравнению с контрольной группой (Г4) у всех овец после обработки в течение 30 дней наблюдалось значительное снижение (p <0,050). На 7-й и 17-й дни после начала лечения эффективность препаратов «Альбен форт», «Празивер» и «Альвет» составила 51,5 и 79,2; 56,6 и 94,7; 36 и 77,8 % соответственно. Среднее количество яиц значительно снизилось в Г1, Г2 и Г3 до лечения до 30-го дня (p<0,050). Скорость снижения среднего количества яиц во всех группах после 30-го дня лечения составила 100 %. В то же время средние значения количества яиц в фекалиях овец, больных мониезиозом (Г4), увеличились на 33 % после 30 дней лечения. 2.2.3.2 Терапевтическое влияние антигельминтных средств на гематологические показатели овец Изменения различных гематологических показателей овец, зараженных мониезиозом в разные промежутки времени в разных группах лечения, представлены в таблице 6. Гематологический анализ до лечения (0 день) показал значительное снижение значений гемоглобина (Hb) и эритроцитов во всех группах больных животных. У животных 4-й группы среднее значение гемоглобина до лечения составило 80,65±1,15 (г/л) и постепенно снижалось до 77,59±1,09 и 73,85±0,75 г/л на 17-й и 30-й дни. Таблица 6 – Гематологические изменения у овец, больных мониезиозом, в различные промежутки времени, в зависимости от эффективности антигельминтных средств Параметры Время, Группа дни Г1 Г2 Г3 Г4 Г5 Hb, г/л 0 81,42±2,17* 7 86,38±0,59 17 91,91±1,75 30 94,25±0,34 0 6,74±0,48* Эритроцит 7 8,46±0,31* ы, 1012/л 17 9,24±0,15 30 9,76±0,25 0 6,96±0,16* Лейкоциты, 7 6,73±0,39* 109/л 17 4,82±0,56* 81,02±2,14* 81,53±1,94* 80,65±1,15* 92,50±0,41 83,34±0,55* 82,37±1,49* 80,67±0,71* 93,84±0,67 86,81±1,50* 84,90±1,44* 77,59±1,09* 94,37±0,77 СОЭ, мм/ч 30 4,31±0,29 0 4,24±0,27* 7 3,28±0,33* 17 2,86±0,40* 90,72±1,33 6,73±0,49* 7,86±0,41* 8,56±0,39* 8,99±0,37 6,51±0,72* 6,33±0,72* 5,49±0,29* 4,67±0,32 4,11±0,68* 3,41±0,31* 3,12±0,44* 2,68±0,34 91,26±0,64 6,91±0,39* 7,54±0,36* 8,02±0,29* 8,91±0,42* 6,30±0,40* 6,07±0,54* 5,16±0,62* 4,36±0,28 4,91±0,84* 4,06±0,81* 3,95±0,57* 2,39±0.17 73,85±0,75 7,31±0,81* 6,23±0,29* 5,61±0,45* 4,61±0,40* 6,68±0,31* 6,57±0,47* 7,02±0,43* 7,51±0,33 3,92±0,44* 4,80±0,35* 5,39±0,37* 6,27±0,63* животных (Г5) 94,04±0,60 9,76±0,08 9,84±0,03 9,79±0,06 9,86±2,01 4,11±0,02 4,18±0,08 4,35±0,27 4,13±0.03 2,29±0,03 2,23±0,07 2,25±0,08 2,33±0.06 30 2,30±0,07 * р≤0,05 – достоверность различий относительно здоровых Уровень гемоглобина у зараженных животных был на 11,8–12,8 % ниже, чем у здоровых, а уровень эритроцитов был на 31,04–25,10 % ниже, чем у здоровых. После 30-го дня лечения средние значения эритроцитов у больных животных (Г4) снизились до 37 %. После 30-го дня лечения средний уровень гемоглобина и его значения повысились у животных в Г1, Г2 и Г3 на 15,7; 12 и 12 % соответственно; среднее количество эритроцитов также повысилось в Г1, Г2 и Г3 на 44,8; 35,6 и 29 % соответственно. Что касается значений СОЭ, то было обнаружено, что до лечения в экспериментальных группах он был в 1,71–2,14 раза выше, чем у животных контрольной группы (Г5). У животных Г4 к концу эксперимента СОЭ повысился в 2,9 раза по сравнению в животными Г5. Через 30 дней лечения СОЭ снизился у животных в Г1, Г2 и Г3 на 84,34; 34,8 и 51,32 % соответственно (таблица 6). До лечения среднее количество лейкоцитов у животных Г5 составляло 4,11±0,02 ·109/л и оставалось в пределах физиологических значений: 4,18±0,08; 4,35±0,27 и 4,13±0,03·109/л на 7, 17 и 30-й дни соответственно, но в группах овец, больных мониезиозом (Г1, Г2, Г3 и Г4), значения лейкоцитов значительно увеличились (р <0,050) и составили 6,96±0,16; 6,51±0,72; 6,30±0,40 и 6,68±0,31· 109/л. После 30 дней лечения наблюдалось постепенное снижение значений лейкоцитов в Г1, Г2 и Г3 на 61,5; 39,4 и 44,5 % соответственно, в то время как в Г4 продолжалось их увеличение (на 12,4 %) (рисунок 4). 10 Альбен форте (Г1) Празивера (Г2) Альвет (Г3) Зараженные и не леченные ЧЕРЕЗ (30) (Г4) ОБРАБОТКИ ДНЕЙ ДНЕЙ ДНЕЙ ДО ЧЕРЕЗ (7) ЧЕРЕЗ (17) Рисунок 4 – Количество лейкоцитов у больных мониезиозом овец до и после обработки препаратами «Альбен форте», «Празивер» и «Альвет» Установлено, что до лечения в экспериментальных группах (Г1, Г2, Г3 и Г4) количество эозинофилов было на 52–97,6 % выше, чем в группе здоровых овец (см. рисунок 5). 10 ОБРАБОТКИ ДНЕЙ ДНЕЙ ДНЕЙ Альбен форте (Г1) Празивер (Г2) Альвет (Г3) Зараженные и не леченные (Г4) ДО ЧЕРЕЗ (7) ЧЕРЕЗ (17) ЧЕРЕЗ (30) Рисунок 5 – Количество эозинофилов у больных монизмом овец до и после обработки препаратами «Альбен форте», «Празивер» и «Альвет» Уровень эозинофилов в Г1, Г2, Г3 вернулся к норме к концу эксперимента, тогда как в Г4 эозинофилов стало в 2,07 раза выше, чем у животных в Г5. Через 30 дней уровень эозинофилов снизился в Г1, Г2 и Г3 на 55,4; 45,7 и 50,9 % соответственно. 2.2.3.3 Терапевтическое влияние различных антигельминтных средств против мониезиоза на биохимические показатели крови овец Результаты биохимического анализа крови представлены в таблице 7. Таблица 7 – Биохимические изменения крови овец, больных мониезиозом Показатель Общие липиды, г/л Селен, мкг/л Йод, мг/л Кобальт, мг/кг Витамин А, мкмоль/л Витамин С, мкмоль/л Витамин Е, мкмоль/мл Витамин В12, мг% Время, дни 7 17 30 Группа Г1 Г2 Г3 Г4 Г5 3,57±0,38* 3,43±0,54* 2,98±0,73 2,66±0,55 4,24±0,42* 3,71±0,55* 2,74±0,45 2,44±0,36 0,025±0,002 0,18±0,019* 0,23±0,006 0,21±0,001 0,12±0,01* 0,14±0,02* 0,17±0,036* 0,18±0,002* 1,19±0,01* 1,72±0,036* 2,45±0,056* 2,14±0,034* 0,62±0,002 0,57±0,005* 0,62±0,044 0,65±0,036 0,02±0,001* 4,05±0,79* 3,88±0,50* 3,57±0,56* 3,15±0,34* 0,049±0,003* 0,16±0,009* 0,20±0,006* 0,20±0,004 0,13±0,016* 0,17±0,02* 0,20±0,001* 0,24±0,002* 1,52±0,038* 2,11±0,046* 2,43±0,064* 3,00±0,004 0,60±0,002* 0,62±0,001 0,63±0,002 0,65±0,017 0,02±0,001* 3,57±0,51* 3,61±1,11* 3,90±0,69* 4,01±0,23* 0,023±0,012 0,04±0,002* 0,23±0,025 0,18±0,008* 0,13±0,021* 0,13±0,02* 0,11±0,025* 0,12±0,001* 1,54±0,046* 1,67±0,037* 1,60±0,036* 1,45±0,044* 0,59±0,06* 0,63±0,032 0,57±0,064* 0,58±0,006* 0,03±0,006* 0,03±0,007* 0,03±0,001* 0,03±0,001* 4,27±0,043* 4,19±0,034* 4,28±0,029* 4,57±0,041* 24,08±3,56 24,95±3,86* 23,65±2,79* 2,55±0,38 2,23±0,45 2,81±0,22 2,70±0,09 0,024±0,020 0,23±0,003 0,25±0,032 0,21±0,002 0,22±0,011 0,24±0,02 0,23±0,035 0,21±0,001 3,85±0,012 3,15±.0,044 3,44±0,041 2,87±0,069 0,66±0,023 0,63±0,003 0,64±0,002 0,64±0,004 0,07±0,008 0,07±0,019 0,05±0,022 0,09±0,002 5,72±0,017 5,13±0,030 5,11±0,033 5,42±0,039 34,01±0,99 31,18±1,58 29,15±1,87 29,26±1,28 Установлено, что до лечения уровни селена, йода, кобальта, а также антиоксидантов витаминов A, C, E были значительно ниже в сыворотке у групп овец, больных мониезиозом, чем у здоровых животных. В ходе исследований было установлено, что наличие кишечных паразитов в организме животных связано с повышенным образованием гидропероксидов липидов. 0 0,018±0,008* 7 30 7 30 7 30 7 30 0,15±0,008* 0,17±0,009* 0,22±0,002 0,14±0,01* 0,16±0,04* 0,18±0,019* 0,23±0,003 1,66±0,82* 1,50±0,050* 2,58±0,053* 3,22±0,002* 0,60±0,032* 0,62±0,003 0,64±0,059 0,64±0,004 0,04±0,019* 7 0,048±0,002* 0,025±0,002* 0,026±0,002* 17 0 17 0 17 0,005±0,001 0,05±0,001* 4,00±0,024* 4,21±0,046* 4,70±0,021* 5,27±0,032 22,20±1,91 22,62±3,06* 24,49±2,27* 27,06±1,65 0,027±0,002* 0,030±0,006* 0,02±0,004* 4,48±0,017* 4,55±0,032* 5,22±0,004 5,76±0,011 22,23±0,85 23,19±1,30* 26,06±1,96* 31,26±1,68 0,04±0,001* 4,03±0,035* 4,57±0,035* 5,18±0,037 5,14±0,027 23,05±1,48 24,54±2,34* 26,78±2,05* 29,63±1,32 24,06±1,73 * р≤0,05 – достоверность различий относительно здоровых животных (Г5) 15 2.2.3.4 Терапевтическое влияние антигельминтных препаратов против мониезиоза овец на окислительный стресс Мы изучали действие различных антигельминтиков на показатели процессов перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы овец, больных мониезиозом. Результаты исследований представлены в таблице 8. Таблица 8 – Эффективность антигельминтных препаратов против мониезиоза овец в зависимости от уровней ферментов окислительного стресса Параметры Время, Г1 дни Г2 3,99±0,71* 2,99±0,61* 2,01±0,25* 1,30±0,21 4,05±0,31* 2,33±0,40* 2,16±0,36* 1,63±0,24 1,98±0,68* 3,63±0,42* 3,98±0,40* 4,62±0,55 164,80± ±38,34* 266,20± ±31,64 289,4± ±36,80 304,6± ±36,43 3598,40± ±546,10* 6184,20± ±276,3* 7416,6± ±818,46* 8524,4± ±79,69 Г3 3,58±0,98* 2,98±0,81* 2,05±0,28* 1,49±0,62 3,54±0,78* 3,20±0,53* 2,05±0,19* 1,46±0,40 1,90±0,41* 2,13±0,10* 3,35±0,31* 3,93±0,46 193,4± ±20,89* 212,0± ±17,23* 242,6± ±28,16* 254,2± ±34,44* 3966,00± ±546,10* 5062,2± ±328,70* 6593,8± ±584,7* 7888,8± ±750,2 Г4 3,27±0,71* 4,20±0,68* 4,50±0,39* 4,51±0,38* 2,85±0,42* 1,75±0,.58* 4,31±0,26* 4,44±0,26* 2,08±0,44* 1,75±0,58* 1,54±0,52* 1,12±0,98* 175,40± ±37,81* 146,60± ±27,62 135,4± ±22,96* 122,80± ±16,30* 4078,60± ±454,60* 3369,20± ±478,43* 3052,80± ±542,5* 2812,6± ±469,2* животных (Г5) Г5 1,38±0,44 1,23±0,71 1,39±0,77 1,58±0,87 1,12±0,09 4,16±0.73 1,2±0,18 1,43±0,41 4,15±0,64 4,16±0,73 4,62±0,56 4,12±0,09 301,20± ±51,37 272,20± ±65,07 285,4± ±30,05 317,4± ±30,36 7318,60± ±668,80 7014,00± ±1135,18 9284,4± ±1103,4 7656,4± ±2051,06 Диеновые конъюгаты, мкмоль/мл Малоновый диальдегид, мкмоль/мл Каталаза, мкмоль/мл 0 3,50±0,62* 7 2,93±0,52* 17 2,06±0,28* 30 1,39±0,24 0 3,93±0,08* 7 2,72±0,42* 17 1,97±0,45* 30 1,34±0,42 0 2,30±0,50* 7 2,86±0,63* 17 3,56±0,48* 30 4,15±0,22 0 Ед/мл 17 249,0± ±35,71* ±18,41* Супероксидд 7 232,40± исмутаза, ±38,66* 181,80± 30 0 Глютатион- 7 пероксидаза, 258,4± ±38,90* 3733,20± ±399,17* 5314,2± ±593,45* 6690,2± ±432,30* 8456,0± ±242,4 Ед/л 17 30 * р≤0,05 – достоверность различий относительно здоровых Как показано в таблице 8, мы зафиксировали низкий уровень антиоксидантных ферментов каталазы (CAT), супероксиддисмутазы (СОД) и глутатионпероксидазы (ГП) в крови овец, больных мониезиозом и гипомикроэлементозом, по сравнению с животными здоровой группы. Также мы отметили более высокий уровень диеновых конъюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МДА) в крови больных животных по сравнению со здоровыми. В конце лечения уровень антиоксидантных ферментов (CAT, СОД и ГП) был повышен, в то время как снижения ДК и МДА в сыворотке опытных группы не обнаружено. 2.2.3.5 Влияние различных антигельминтных средств против мониезиоза на гормональный фон организма овец Эндокринный статус зараженных и здоровых овец мы определяли по уровню активности регуляторных гормонов аденогипофиза (таблица 9): адренокортикотропных (АКТГ), тиреотропных (ТТГ), гормонов щитовидной железы – трийодтиронина общего (Т3), общего тироксина (Т4) и гормона надпочечников – кортизола. Все изученные железы рассматривали как единую многофункциональную систему, регулирующую адаптационные функции и уровень адаптации животных, обмен веществ, тепловыделение, окислительно-восстановительные процессы. Таблица 9 – Гормональные уровни в различных группах лечения в разные промежутки времени у овец, больных мониезиозом Вре- Параметры мя, дни Группы животных Г1 Г2 Г3 Г4 Г5 АКТГ, нг/мл 7 17 30 0 118,0±16,35* 127,40±9,71* 135,0±4,14* 109,0±16,86* 112,0±16,15* 118,0±14,67* 101,0±11,33* 105,0±15,57* 102,0±15,29* 84,0±8,03 86,0±4,63 83,0±7,17 181,0±8,15* 197,80±4,08* 180,0±12,52* 171,0±14,09* 176,0±15,82* 179,0±10,07* 118,0±24,45* 122,0±17,64* 126,0±13,41* 129,0±10,39* 178,0±14,81* 184,0±13,60* 188,0±6,89* 192,0±9,00* 0,32±0,037* 0,034±0,06* 0,32±0,04* 0,34±0,05* 134,0±4,47 137,0±5,6 133,0±2,73 130,0±3,39 1,59±0,17* 1,63±0,09* 1,56±0,05* 1,57±0,09* 65,20±4,41 66,0±14,74 73,0±13,72 91,0±5,09 143,80±5,89 146,0±18,58 136,0±6,51 136,0±6,81 0,28±0,025 0,30±0,04 0,26±0,02 0,24±0,035 147,0±3,67 144,80±4,14 144,20±5,40 149,6±3,20 2,11±0,08 2,02±0,18 2,05±0,15 1,94±0,11 Кортизол, 7 нмоль/л ТТГ, мкМЕ/мл T4, мкМЕ/мл T3, мкМЕ/мл 17 167,0±12,66* 172,0±14,42* 30 164,0±12,54* 169,0±10,55* 154,0±7,84* 149,0±10,22 0,39±0,044* 0,36±0,031* 0,31±0,02* 0,28±0,04* 136,0±11,20 140,40±6,73 143,20±1,92 144,0±3,67 1,71±0,20* 1,77±0,14* 1,91±0,12 1,99±0,09 0 0,36±0,087* 7 0,34±0,068* 17 0,31±0,06* 30 0,31±0,03* 0 135,0±6,32 7 138,20±6,05 17 141,0±4,5 30 138,0±6,20 0 1,66±0,22* 7 1,70±0,21* 17 1,82±0,22* 30 1,99±0,11 0,32±0,069* 0,29±0,07 0,29±0,06* 0,26±0,03* 130,0±3,60 132,20±5,6 132,2±5,6 148,0±1,22 1,61±0,04* 1,67±0,065* 1,82±0,09* 2,14±0,03* * р≤0,05 – достоверность различий относительно здоровых животных (Г5) В таблице 10 мы показали достоверное повышение АКТГ, ТТГ и кортизола в крови овец, больных мониезиозом (Г4), в условиях гипомикроэлементоза в Астраханской области по сравнению со здоровыми животными (Г5). Кроме того, мы зафиксировали более низкий уровень гормонов щитовидной железы (Т4 и Т3) у больных овец. После окончания лечения уровень АКТГ, ТТГ и кортизола в крови экспериментальных групп овец снизился на 28,8–38,5 %, 13,9–28,2 % и 9,4–17,2 % соответственно по сравнению с аналогичными данными, которые были зарегистрированы перед лечением. Напротив, уровень гормонов щитовидной железы (Т4 и Т3) увеличился на 2,2–13,8 % и на 16,4–32,9 % в конце лечения в экспериментальных группах овец. 2.3 Экономическая эффективность противопаразитарных мероприятий 2.3.1 Влияние мониезиоза и гипомикроэлементоза на продуктивность и воспроизводство овец Масса новорожденных ягнят опытного стада в среднем на 5,9 % выше по сравнению с контролем. Через месяц этот показатель у опытных животных на 14,46 % превышает соответствующий показатель ягнят контрольного стада. Надой молока у овец опытной группы за сутки достоверно (р <0,05) увеличился на 9,27 % по сравнению с таким же показателем в контрольной группе (таблица 10). Таблица 10 – Продуктивность и воспроизводство овец после лечения (М±m) Контрольная группа (n= 10) 161±3,2 3,4±0,06 8,3±1,23 5,5±0,04 Опытная группа (n = 10) 170±2,4* 3,6±0,04* 9,5±1,36* 6,01±0,03* * р≤0,05 – достоверность различий относительно контрольных животных 2.3.2 Расчет экономической эффективности применения антигельминтных препаратов Расчет экономической эффективности применения антигельминтных препаратов «Празивер», «Альбен форте», «Альвет» мы провел по формуле И.Н. Никитина. Расчет экономической эффективности применения препарата «Празивер»: ПУ = М (Вз – Вб) · ТЦ · продолжительность заболевания, дни; ЭВ = ПУ – ЗВ; ЭР = ЭВ : ЗВ, где ПУ – предотвращенный ущерб, руб.; М – количество больных животных (изучаемых животных); Вз – средняя продуктивность здоровых животных; Вб – средняя продуктивность больных животных; ТЦ – цена продукции за 1 кг; ЭВ – экономический эффект, руб.;; ЗВ – затраты на ветеринарные мероприятия, руб.; ЭР – экономическая эффективность ветеринарных мероприятий на 1 рубль затрат, руб. Предотвращенный ущерб от снижения продуктивности овец при применении препарата «Празивер» равен: ПУ = 10 (6,01 – 5,5) 200 · 30 = 30 600 руб. Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий составляет ЭВ = 30600 – 9698 = 20902 руб. Экономическая эффективность на 1 рубль затрат составляет Выход новорожденных ягнят на 100 овец Масса новорожденных ягнята, кг Масса ягнят в возрасте 1 месяц, кг Количество молока в сутки, кг 18 ЭР = 20902: 9698 = 2,16 руб. Предотвращенный ущерб от снижения продуктивности овец при применении препарата «Альбен форте» равен: ПУ = 10 (6,03 – 5,6) 200 · 30 = 25 800 руб. Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий составляет ЭВ = 25800 – 8806 = 16 994 руб. Экономическая эффективность на 1 рубль затрат составляет ЭР = 16994: 8806 = 1,93 руб. Предотвращенный ущерб от сниженной продуктивности овец при применении препарата « Альвет» равен: ПУ = 10 (6 – 5,5) 200 · 30 = 30 000 руб. Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий составляет ЭВ = 30 000 – 8796 = 21204 руб. Экономическая эффективность на 1 рубль затрат составляет ЭР = 21204: 8796 = 2,4 руб. 3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 1. Установлен низкий уровень микроэлементов в почве, растениях и кормах Астраханской области. Уровень микроэлементов в органах и тканях овцы породы советской мериносовой существенно различается. Наибольшее количество селена накапливается в почках (0,52±0,003 мг/кг) и органах пищеварительного тракта (0,32– 0,43 мг/кг), а наименьшее – в скелетной мускулатуре и костной ткани. Содержание меди колебалось от 12,7±0,05 до 21,2±0,03 мг/кг. Изучаемые органы и ткани по содержанию в них кобальта можно расположить в следующем порядке (по убыванию): печень (2,21±0,64 мг/кг) – кровь (1,26±0,05 мг/кг) – костная ткань (1,05±0,05 мг/кг) – стенка тонкого кишечника (0,96±0,04 мг/кг) – стенка сычуга (0,94±0,06 мг/кг) – легкие (0,73±0,004 мг/кг) – селезенка (0,70±0,02 мг/кг) – почки (0,64±0,03 мг/кг) – мышцы (0,05±0,003 мг/кг). Высокая концентрация марганца установлена в костной ткани. В остальных изучаемых органах и тканях концентрация этого элемента составляла от 21,6±1,13 до 48,5±3,13 мг/кг. Максимальное содержание цинка определено в костной ткани и стенке сычуга – 165,1±8,6 и 122,0±8,74 мг/кг соответственно, а наименьшее – в крови и селезенке – 32,5±2,1 и 38,2±3,21 мг/кг соответственно. Наименьшая концентрация йода установлена в селезенке (0,07±0,003 мг/кг) и мышцах (0,04±0,003 мг/кг), в остальных изучаемых тканях и органах содержание микроэлемента составляло от 0,22±0,024 до 0,31±0,07 мг/кг. 2. Количество зараженных мониезиозом овец в Астраханской области составило 26,46 %. Количество животных, зараженных мониезиозом, в зависимости от возраста: молодые и взрослые – 35,61 и 22,12 % соответственно. Мониезиоз более распространен среди самок овец (41,52 %), чем среди самцов (13,85 %). Самую высокую заболеваемость отмечали у овец советской мериносовой породы весной (37,02 %), затем осенью (30,28 %) и летом (19,86 %), а самую низкую – зимой (22,65 %). 3. Показано отрицательное воздействие сочетанного мониезиоза и гипомикроэлементоза на гематологические, биохимические и гормональные показатели овец породы советский меринос. Установлено развитие оксидативного стресса в виде пониженного уровня антиоксидантных ферментов и высокого уровня продуктов перекисного окисления липидов и свободных радикалов. Выявлено нарушение функционирования гипофизарно-тиреоидной системы, выраженное в повышенном уровень АКТГ, ТТГ и кортизола в крови при снижении уровня гормонов Т4 и Т3. 4. После лечения антигельминтными препаратами «Альбен форте» (альбендазол и оксиклозанид), «Празивер» (празиквантел и ивермектин), «Альвет» (10%-я суспензия – альбендазол) гематологические и биохимические показатели восстанавливались до физиологического уровня. Уровень антиоксидантных ферментов (CAT, СОД и ГП) после лечения повышался до физиологических значений, в то время как снижения ДК и МДА в сыворотке крови опытных групп не было обнаружено. Также после окончания лечения уровень АКТГ, ТТГ и кортизола в крови экспериментальных групп овец снизился на 28,8–38,5; 13,9–28,2 и 9,4–17,2 % соответственно по сравнению с аналогичными данными перед лечением. Напротив, уровень гормонов щитовидной железы (Т4 и Т3) в экспериментальных группах овец увеличился на 2,2–13,8 % и на 16,4–32,9 % в конце лечения. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1. На основании анализа и обобщения экспериментальных данных, апробации их в производственных условиях определено, что препараты «Альбен форте» (альбендазол и оксиклозанид), «Празивер» (празиквантел и ивермектин), «Альвет» (10%-я суспензия – альбендазол) оказывают выраженное антигельминтное действие на цестод рода Moniezia. 2. В Астраханской области установлен гипомикроэлементоз животных. Для его лечения и профилактики необходимо применять микроэлементсодержащие препараты или подкормки в сочетании с антигельминтными препаратами. 3. Результаты исследований внедрены производство в государственном бюджетном учреждении Астраханской области «Приволжская ветеринарная станция» и государственном бюджетном учреждении Астраханской области «Енотаевская ветеринарная станция». 4.Полученные данные включены в учебный процесс в ФГБОУ ВО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» и ФГБОУ ВО «Астраханский государственный университет». ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ Проведенные исследования позволили детально понять некоторые аспекты биологии цестод рода Moniezia, распространенных в условиях Астраханской области, а также влияние скрытых гипомикроэлементозов на патогенез заболевания. Кроме того, полученные результаты позволили оценить терапевтическую эффективность при данной патологии препаратов «Альбен форте» (альбендазол и оксиклозанид), «Празивер» (празиквантел и ивермектин), «Альвет» (10%-я суспензия – альбендазол). Установлено влияние «Альбен форте» (альбендазол и оксиклозанид), «Празивер» (празиквантел и ивермектин), «Альвет» (10%-я суспензия – альбендазол) на интенсивность процессов перекисного окисления липидов и активность антиоксидантной системы, активность некоторых гормонов, а так же гематологические и биохимические показатели организма овец. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности использования препаратов Альбен форте (Альбендазол и Оксиклозанид), Празивер (Празиквантел и Ивермектин), Альвет (10% суспензия- Альбендазол), возможности их широкого применения при лечении патологий, связанных с нарушением некоторых функциональных систем организма.