«Сравнительный анализ влияния липоевой кислоты и убихинона на метаболизм мышц при длительном приеме статинов»

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Экспериментальные исследования проведены на 210 беспородных крысах-самцах в
возрасте 12 месяцев (300-350 грамм). Все животные находились в условиях соответ-
ствующих санитарным правилам от 29.08.2014 г. СП 2.2.1.3218-14 «Санитарно-
эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспе-
риментально-биологических клиник (вивариев)».
Для достижения цели и выполнения задач диссертационного исследования исполь-
зовали гиполипидемический препарат симвастатин являющийся статином первого
поколения – «Зокор®, 20 мг» (ОАО «АКРИХИН», Россия). В качестве средств коррек-
тирующих побочные эффекты симвастатина выбраны липоевая кислота – «Тиокта-
цид® БВ, 600 мг» (МЕДА Мануфакчуринг ГмбХ (Германия) и коэнзим Q10 – «Кофер-
мент Q10 (CoQ10), 30 мг» Виталайн (США).
В процессе эксперимента животные были разделены на восемь групп (рисунок 1).

Рисунок 1 – Дизайн исследования

Первая группа – 20 животных, которых содержали на общем рационе вивария
(контрольная группа);
Вторая группа – 20 животных, которых содержали на общем рационе вивария, в
течение 2-х месяцев получавших симвастатин (Зокор®, 20 мг);
Третья группа – 20 животных, которых содержали на общем рационе вивария, в те-
чение 2-х месяцев получавших симвастатин (Зокор®, 20 мг) и биологическую актив-
ную добавку «Кофермент Q10, 30 мг»;
Четвертая группа – 20 животных, которых содержали на общем рационе вивария, в
течение 2-х месяцев получавших симвастатин (Зокор®, 20 мг) и липоевую кислоту
(Тиоктацид® БВ, 600 мг);
Пятая группа – 35 животных, у которых индуцировали эссенциальную гиперхоле-
стеринемию путем содержания на рационе, обогащенном животными жирами и легко
усваиваемыми углеводами в течение 3-х месяцев. Их кормили манной кашей, сварен-
ной на воде таким образом, что на 1 кг крупы, добавлял 2 кг тростникового сахара и 2
кг топленного сливочного масла, при этом индивидуально каждому животному дава-
ли 50 г белого несоленого свиного сала в сутки, при достижении целевого уровня хо-
лестерина равного 3,83±0,31 ммоль/л брали в эксперимент (контроль 2,2±0,2 ммоль/л)
(патент на изобретение № 2733693 от 06.10.2020 г.);
Шестая группа – 35 животных, у которых индуцировали гиперхолестеринемию
(также как и у пятой группы), в течение 2-х месяцев получавшие симвастатин (Зо-
кор®, 20 мг) (группа сравнения) (патент на изобретение № 2632624 от 06.10.2017 г.);
Седьмая группа – 30 животных, у которых индуцировали гиперхолестеринемию
(также как и у пятой группы), в течение 2-х месяцев получавшие симвастатин (Зо-
кор®, 20 мг) и липоевую кислоту (Тиоктацид® БВ, 600 мг);
Восьмая группа – 30 животных, у которых индуцировали гиперхолестеринемию
(также как и у пятой группы), и в течение 2-х месяцев получавшие симвастатин (Зо-
кор®, 20 мг) и биологически активную добавку «Кофермент Q10, 30 мг» (эксперимен-
тальная группа).
Лекарственные препараты вводились раз в сутки в виде водной суспензии через
пищеводный зонд в пересчете терапевтической дозировке на 100 г массы, а животным
контрольной группы вводили 1 мл воды дистиллированной для чистоты эксперимен-
та.
Все манипуляции выполнялись согласно этическим принципам «Европейской кон-
венцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и
других научных целей», принятой от 18.03.1986 г. в Страсбурге, подтвержденной от
15.06.2006 г.: животных декапитировали под действием эфирного наркоза.
Для выделения митохондрии клеток скелетной мышцы у крысы после декапитиро-
вания вырезали мышцы задних конечностей, взвешивали, измельчали и добавляли
среду выделения (0,1 М KCl, 1 мМ MgCl2, 0,05 М Tris-HCl, рН 7,4). Смесь подверга-
лась гомогенизации и трехэтапному центрифугированию. К осадку митохондрий до-
бавляли среду выделения, содержащую 0,1% бычий сывороточный альбумин, ресус-
пендировали и хранили на льду для определения содержания белка и активности
ферментов (Егорова М.В., Афанасьев С.А., 2011).
Из крови получали эритроциты, отделяя от лейкоцитов и тромбоцитов в 3% жела-
тиновом растворе, и центрифугировали. Затем отделяли плазму и верхний слой кле-
ток, подвергая эритроциты отмыванию охлажденным физраствором несколько раз и
снова центрифугировали, для получения плотного осадка.
Содержание гемоглобина (Нв) (г/мл) определяли в гемолизате спектрофотометри-
ческим методом в щелочной среде, при λ=540 нм по методу описанному Лугановой
И.С. и Блиновым М.Н. (1975), а концентрацию общего белка (мг/мл) проводили по
методу Lowry (1953).
Концентрацию молочной кислоты (лактата) определяли по реакции с пара-
оксидифенилом методом спектрофотомерии при λ=590 нм, описанной Данило-
вой Л.А. (2003), а пировиноградной кислоты (ПВК) определяли колориметрически
при λ=440 нм по методу, приведенному в описании Камышниковой В.С (2009). Ре-
зультаты выражали в мкмоль/мл плотного осадка эритроцитов или мг белка в мыш-
цах.
В суспензии митохондрий спектрофотометрически определяли активности цито-
хромоксидазы (ЦХО) по методу Р.С. Кривченковой (1977) и сукцинатдегидрогеназы
(СДГ) по принципу метода, предложенного Nordmann et al. (1957) в описании З.И.
Микашинович (1989). Результаты выражали в нмоль/мг белка.
Активность глутатионпероксидазы (ГПО) определяли спектрофотометрически
при =412 нм по методу предложенному Даниловой Л.А. (2003), а концентрацию вос-
становленного глутатиона (GSH) – по методу Ellman G.L.(1959) при =412 нм. Ре-
зультаты выражали в мкмоль/ г Hb или мг белка. Активность глутатионредуктазы
(ГР) устанавливали спектрофотометрически при =340 нм по методу Юсуповой Л.Б.
(1989), предложенным в описании Даниловой Л.А. (2003). Активность ГР выражали в
мкмоль превращения НАДФН+Н на г Hb или мг белка в мин.
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили согласно обще-
принятым методам с определением средней арифметической, ошибки средней с ис-
пользованием пакета прикладной программы STATISTICA версия 10.0 и Microsoft
Office Excel Worksheet (Герасимов А.Н., 2007).
О достоверности отличий учитываемых показателей сравниваемых групп судили
по величине t-критерия Стьюдент, при ненормальности распределения – U критерия
Манна-Уитни. Статистически достоверными считали отличия, соответствующие
оценке ошибки вероятности р ≤ 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Проанализировав отечественную и зарубежную научную литературу, необходимо
отметить, что разработка наиболее эффективных методик комплексных терапий,
направленных на снижение уровня холестерина на основе приема статинов, до сих
пор является актуальной, также остается открытым вопрос профилактики потенци-
альных осложнений статиновых терапий.
Основываясь на известных фактах, на первом этапе исследования проведен анализ
ключевых показателей метаболизма мышц и эритроцитов «гиперхолестериновых»
животных при длительном применении симвастатина.
Метаболические изменения при гиперхолестеринемии
У животных с индуцированной экспериментальной гиперхолестеринемией относи-
тельно контрольной группы в мышечной ткани отмечали одновременное повышение
концентрации и ПВК на 217,78 % (р<0,001), и лактата на 73,23 % (р<0,001) (рисунок 2). В то время как в эритроцитах наблюдали снижение ПВК на 56,52 % (р<0,001) и повышение лактата на 32,80 % (р>0,05) (рисунок 3). Такие изменения отражают фор-
мирование лактат-ацидоза на фоне накопления недоокисленных продуктов, как в
мышечной ткани, так и в эритроцитах.

400%
*
350%*
300%
250%Контрольная группа
*
200%*
150%
Гиперхолестериновая
100%диета
50%*
0%
ПВК Лактат СДГ ЦХО GSH ГПОГР
Рисунок 2 – Динамика биохимических показателей мышечной ткани животных с
эссенциальной гиперхолестеринемией относительно группы контроля.
Примечание: * – достоверно относительно контрольной группы (в процентах)
150%

100%
Контрольная группа
50%*
Гиперхолестериновая
*диета
0%
ПВКЛактатGSHГПОГР
Рисунок 3 – Динамика биохимических показателей в эритроцитах животных с эс-
сенциальной гиперхолестеринемией относительно группы контроля
Примечание: * – достоверно относительно контрольной группы (в процентах)

Кроме этого, нарушения, выявленные в углеводном обмене на основании опреде-
ления уровня соотношения лактат/пируват, указывают на развитие гипоксии, что под-
тверждает ранее полученные результаты исследования крови в условиях лаборатории
(Микашинович З.И., Белоусова Е.С., 2016).
При анализе показателей антиоксидантной защиты у группы с эссенциальной ги-
перхолестеринемией отмечено синхронное снижение активности глутатионперокси-
дазы в мышечной ткани на 50,08 % (p<0,001) и в эритроцитах на 77,02 % (p<0,001). Активность глутатионредуктазы повысилась соответственно на 104,35 % (p<0,001) и 112,24 % (p<0,001), а концентрации восстановленного глутатиона увеличилась на 244,20 % (p<0,001) и 30,97 % (p>0,05) относительно данных группы контроля.
Итак, метаболические изменения, зафиксированные в группе «гиперхолестерине-
мия», отражают изменения глутатионового звена антиоксидантной защиты, которые,
очевидно, являются реакцией на пищевой стресс и отражают тенденцию к активации
защитных реакций, направленных на сохранение необходимых концентраций восста-
новленного глутатиона.
Метаболические изменения при гиперхолестеринемии и длительном введении
симвастатина
После длительного введения симвастатина у животных с эссенциальной гиперхо-
лестеринемией в мышечной ткани наблюдали (рисунок 4) понижение концентраций
ПВК на 53,01 % (p1<0,001) и лактата на 32,51 % (p1>0,001). В эритроцитах (рисунок
5), наоборот, было обнаружено увеличение лактата на 175,15 % (р1<0,001) и ПВК на 21,43 % (р1<0,05) относительно группы «гиперхолестеринемия», что указывает на ак- тивацию гликолиза, который в эритроцитах является основным источником АТФ и регулятором кислород-транспортной функции за счет изменения pH-среды. Избыточное количество молочной кислоты может нарушать структурно- функциональную полноценность клеточных мембран, образовывая комплексы с фос- фолипидами, и тем самым нарушая поступление кислорода в клетку (Сторожук П.Г., 2011). Изменения pH в свою очередь влияют на активность антиоксидантных процес- сов, сохраняющихся функциональную полноценность эритроцитов. 120% 100% 80% ****Гиперхолестериновая 60%**диета **** 40%****Гиперхолестериновая 20%диета + симвастатин 0% ПВК Лактат СДГ ЦХО GSH ГПОГР Рисунок 4 – Динамика биохимических показателей мышечной ткани животных с гиперхолестеринемией при длительном введении симвастатина относительно группы с эссенциальной гиперхолестеринемией Примечание: ** - достоверно относительно группы с гиперхолестеринемией (в процентах) 350% 300%** 250%Гиперхолестериновя диета 200% Гиперхолестериновя 150%диета + симвастатин 100% **** 50% 0% ПВКЛактатGSHГПОГР Рисунок 5 – Динамика биохимических показателей в эритроцитах животных с ги- перхолестеринемией, получавших симвастатин относительно группы с эссенциальной гиперхолестеринемией Примечание: ** - достоверно относительно группы с эссенциальной гиперхолесте- ринемией, получавшей симвастатин (в процентах) При анализе глутатионзависимых ферментов антиоксидантной защиты у групп с эссенциальной гиперхолестеринемией, получавшей симвастатин, в митохондриях вы- явлено снижение активности ГПО (p<0,001), увеличение активности ГР (p>0,05) и
уровня GSH (p<0,001) относительно группы контроля (рисунок 6). При анализе этих же показателей в эритроцитах (рисунок 7) установлено также снижение активности ГПО (р<0,001), но в отличие от данных в мышечной ткани до- стоверно уменьшается активность ГР (р>0,05). Уровень GSH (р>0,05) имеет тенден-
цию к росту сравнительно с контрольной группой. Полученные результаты отражают
процесс разбалансировки глутатионзависимых ферментов в исследуемых тканях.
200%
*
150%*
Контрольная группа

100%
Гиперхолестериновая
50%диета + симвастатин
***
0%
ПВК Лактат СДГ ЦХО GSH ГПОГР
Рисунок 6 – Динамика биохимических показателей мышечной ткани животных с
эссенциальной гиперхолестеринемией при длительном введении симвастатина отно-
сительно группы контроля
Примечание: * – достоверно относительно контрольной группы (в процентах)

500%

400%*
300%Контрольная группа

200%Гиперхолестериновая
диета + симвастатин
100%
*
*
0%
ПВКЛактатGSHГПОГР
Рисунок 7 – Динамика биохимических показателей в эритроцитах животных с эс-
сенциальной гиперхолестеринемией, получавших симвастатин относительно группы
контроля
Примечание: * – достоверно относительно контрольной группы (в процентах)

В митохондриях животных группы «гиперхолестеринемия + симвастатин» уста-
новлено значительное снижение активности СДГ на 67,90 % (p1<0,001) и ЦХО на 69,44 % (p1<0,001) относительно группы с эссенциальной гиперхолестеринемией. Угнетение активности ферментов дыхательной цепи II и IV комплексов могут отра- жать нарушение коллекторной функции СоQ. В связи, с этим уменьшается поставка протонов Н+ в дыхательную цепь, что чревато развитием кислородной недостаточно- сти (Микашинович З.И., Новодержкина Ю.Г., Белоусова Е.С., 2007). При анализе глутатионзависимых ферментов антиоксидантной защиты в группах с эссенциальной гиперхолестеринемией, получавших симвастатин как в мышцах, так и в эритроцитах выявлено достоверное снижение активности ГПО (p<0,001), что указы- вает на пониженную способность ГПО ликвидировать активные формы кислорода. Известно, что ГПО и ГР у интактных животных активно способствует регуляции пе- рекисного окисления липидов, усиливая защитную роль восстановленного глутатио- на. Обращает внимание то, что в мышцах в большей степени, чем в эритроцитах накапливается GSH, возможно за счет ГР, но не реализуется в глутатионперокси- дазной реакции. В эритроцитах способность восстанавливать глутатион в глутатион- редуктазной реакции достоверно снижена и, по-видимому, защитная роль на фоне угнетения ГПО не реализуется. Полученные результаты подтверждают данные о нарушении хода кислородзависимых процессов, полученных Е.В. Виноградовой (2020), показавших, что эритроциты усиливают образование 2,3-ДФГ, что подтвер- ждает наличие гипоксии. Таким образом, длительное введение симвастатина животным с эссенциальной ги- перхолестеринемией сопровождается неоднозначными сдвигами в мышцах и эритро- цитах на уровне ключевых метаболитов гликолиза. Разнонаправленные изменения уровня пирувата отражают разную функциональную значимость этого субстрата в эритроцитах и мышцах. Резкое увеличение лактата по сравнению с исходными дан- ными в эритроцитах свидетельствуют о высокой чувствительности клеток красной крови к изменению кислородного режима. Показатели антиоксидантной защиты, по- лученные в эритроцитах, указывают на прооксидантное действие симвастатина дис- балансирующего глутатионзависимые ферменты, что согласуется с результатами ра- бот Ланкина В.З., Иванова М.В., Коновалова Г.Г. и др. (2007), тогда как в мышцах разбалансировка глутатионзависимого звена выражена в меньшей степени. Сравнительный анализ изменений метаболических процессов в мышечной ткани и эритроцитах животных с экспериментальной гиперхолестеремией при комплексном введении симвастатина с убихиноном и с липоевой кислотой У животных с эссенциальной гиперхолестеринемией, при сочетанном введении симвастатина и убихинона (кофермента Q10), в мышечной ткани выявлено критиче- ское снижение уровня ПВК (p2<0,001), в то время как уровень лактата (p2<0,001) уве- личился (примерно в 2 раза) относительно показателей группы сравнения (с гиперхо- лестеринемией, получавшие симвастатин) (рисунок 8). Необходимо отметить, что также данная тенденция наблюдалась и относительно контрольной группы (рисунок 9). 350% 300%** ** ****Гиперхолестериновя 250%диета + симвастатин 200% Гиперхолестериновая 150%диета + симвастатин + 100%кофермент Q10 50% ** 0% ПВК Лактат СДГ ЦХО GSH ГПОГР Рисунок 8 – Динамика биохимических показателей мышечной ткани животных с гиперхолестеринемией при длительном введении симвастатина и кофермента Q10 от- носительно группы с эссенциальной гиперхолестеринемией получавшей симвастатин Примечание: ** - достоверно относительно группы с гиперхолестеринемией, полу- чавшей симвастатин (в процентах) 400% 350%* Контрольная группа 300% 250% 200%Гиперхолестериновая 150% *диета + симвастатин + кофермент Q10 100% 50%* * 0% ПВК Лактат СДГ ЦХО GSH ГПОГР Рисунок 9 – Динамика биохимических показателей мышечной ткани животных с гиперхолестеринемией при длительном введении симвастатина и кофермент Q10 от- носительно контрольной группы Примечание: * - достоверно относительно контрольной группы (в процентах) В группе с экспериментальной гиперхолестеринемией при одновременном введе- нии симвастатина и липоевой кислотой, относительно группы сравнения (рисунок 10.) можно отметить понижение уровня ПВК на (р2<0,001), тогда как уровень лактата (р2<0,05) повысился, но в меньшей степени (в 1,5 раза), чем у животных получавших в качестве метаболического корректора убихинон. При сравнении результатов с группой контроля (рисунок 11) не выявили достоверных изменений, можно лишь от- метить меньшую тенденцию к снижению уровня ПВК (р>0,05), на фоне повышения
уровня лактата (р<0,001). 900% 800%** 700%Гиперхолестериновая 600%диета + симвастатин 500%**** Гиперхолестериновая 400%диета + симвастатин + 300%липоевая кислота 200%** 100%**** 0% ПВК Лактат СДГ ЦХО GSH ГПОГР Рисунок 10 – Динамика биохимических показателей мышечной ткани животных с гиперхолестеринемией при длительном введении симвастатина и липоевой кислоты относительно группы с гиперхолестеринемией при сочетанном введении симвастати- на Примечание: ** - достоверно относительно группы с гиперхолестеринемией, полу- чавшей симвастатин (в процентах) 250% 200%* ** Контрольная группа 150%* * Гиперхолестериновая 100%диета + симвастатин + липоевая кислота 50%* 0% ПВК Лактат СДГ ЦХО GSH ГПОГР Рисунок 11 – Динамика биохимических показателей мышечной ткани животных с гиперхолестеринемией при длительном введении симвастатина и липоевой кислоты относительно контрольной группы Примечание: * - достоверно относительно контрольной группы (в процентах) В эритроцитах группы «гиперхолестеринемия + симвастатин + кофермент Q10» от- мечен существенный рост уровня ПВК в 4 раза (р2<0,001) при снижении уровня лак- тата (р2<0,001) относительно группы с эссенциальной гиперхолестеринемией полу- чавшей симвастатин (рисунок 12). В сравнении с группой контроля также установле- но увеличение уровня ПВК в 1,5 раза (р<0,001) при небольшом снижении уровня лак- тата (р<0,001) (рисунок 13). 450% 400%** 350%**** Гиперхолестериновая ** 300%диета + симвастатин 250% 200% 150%Гиперхолестериновая 100%диета + симвастатин + 50%кофермент Q10 ** 0% ПВКЛактатGSHГПОГР Рисунок 12 – Динамика биохимических показателей в эритроцитах животных с гиперхолестеринемией при одновременном применении симвастатина и кофермента Q10 относительно группы с эссенциальной гиперхолестеринемией получавшей только симвастатин Примечание: ** - достоверно относительно группы с эссенциальной гиперхолесте- ринемией, получавшей симвастатин (в процентах) 450% 400%* 350% Контрольная группа 300% ** 250% 200% Гиперхолестериновая 150% диета + симвастатин 100%+ кофермент Q10 * 50%* 0% ПВКЛактатGSHГПОГР Рисунок 13 – Динамика биохимических показателей в эритроцитах животных с эс- сенциальной гиперхолестеринемией, получавших симвастатин и кофермент Q10 отно- сительно группы контроля. Примечание: * - достоверно относительно контрольной группы (в процентах) При рассмотрении полученных результатов у животных с экспериментальной ги- перхолестеринемией при сочетанном введении симвастатина с липоевой кислоты по отношению к группе сравнения (рисунок 14) в эритроцитах установлено повышение уровня ПВК в 3,5 раза (р2<0,001), а уровень лактата (р2<0,001) заметно снизился. Од- нако, при сопоставлении показателей с группой контроля (рисунок 15) зафиксировано увеличение уровня ПВК в 2 раза (р<0,001) и незначительное снижение уровня лактата (р>0,05).

900%
800%**
700%
600%Гиперхолестериновая
500%диета + симвастатин
400%**Гиперхолестериновая
300%диета + симвастатин +
**
200%**липоевая кислота
100%
**
0%
ПВКЛактатGSHГПОГР
Рисунок 14 – Динамика биохимических показателей в эритроцитах животных с
гиперхолестеринемией при одновременном применении симвастатина и липоевой
кислоты относительно группы с эссенциальной гиперхолестеринемией, получавшей
только симвастатин
Примечание: ** – достоверно относительно группы с эссенциальной гиперхолесте-
ринемией, получавшей симвастатин (в процентах)
300%
250%*
200%*Контрольная группа

150%
Гиперхолестериновая
100%диета + симвастатин +
50%липоевая кислота

0%
ПВКЛактатGSHГПОГР
Рисунок 15 – Динамика биохимических показателей в эритроцитах животных с эс-
сенциальной гиперхолестеринемией, получавших симвастатин и липоевую кислоту,
относительно группы контроля.
Примечание: * – достоверно относительно контрольной группы (в процентах)

У экспериментальных групп, получавших как убихинон, так и липоевую кислоту
накапливается пируват, а избыточное его количество в мышцах может отражать при-
способительные изменения, запуская процесс окислительного декарбоксилирования,
тем самым способствуя возобновлению окислительно-восстановительного потенциа-
ла клетки и ускорению насыщения кислородом тканей.
В мышцах животных с эссенциальной гиперхолестеринемией при длительном вве-
дении симвастатина и убихинона (кофермент Q10) было зафиксировано повышение
активности ГПО в 2,5 раза (p2<0,001), на фоне незначительного повышения активно- сти ГР (p2>0,05) и уменьшения уровня GSH (p2>0,05) относительно результатов груп-
пы с эссенциальной гиперхолестеринемией, получавших симвастатин. Однако при
сопоставлении показателей с результатами группы контроля активность ГПО
(p<0,001) снизилась, а активность ГР (p<0,05) и уровень GSH (p>0,05) были увеличе-
ны.
При анализе ферментов глутатионзависимого звена в эритроцитах крыс с экспери-
ментальной гиперхолестеринемией при длительном введении симвастатина в ком-
плексе с липоевой кислотой было отмечено значительное увеличение активности
ГПО в 7 раз (р2<0,001), на фоне небольшого повышения активности ГР (р2<0,05) и уровня GSH относительно группы, получавшей симвастатин без метаболического корректора. Полученные результаты могут объясняться защитой пула глутатиона от окисления, за счет вступающих в реакции SH-групп липоевой кислоты, усиливая глу- татионпероксидазную реакцию, уменьшающей уровень радикальных соединений. Накопление перекисей, в частности Н2О2 ускоряет поступление цистеина в клетку, усиливая экспрессию генов синтеза GSH, активируя глутатионсинтетазу. В эритроцитах животных с индуцированной гиперхолестеринемией, получавших симвастатин и убихинон (кофермент Q10), относительно группы контроля отмечено увеличение уровня GSН в 3 раза (р<0,001) и ГР в 1,5 раза (р<0,001), в то время как ак- тивность ГПО понизилась (р<0,001). Полученные данные подтверждают немаловаж- ную значимость глутатионредуктазы, повышение активности которой, направленно на поддержание уровня глутатиона восстановленного для формирования адаптацион- ного антиоксидантного ответа в эритроцитах, что также согласуется с мнением с Ка- лининой Е.В. и соавторами (2010). У группы с гиперхолестеринемией при длительном введении симвастатина в соче- тании с липоевой кислотой в мышцах установлено увеличение уровня GSН в 1,5 раза (р<0,001) и незначительное повышение ГР (р>0,05), в то время как активность ГПО
достоверно не отличалась от показателей группы контроля. При сравнении результа-
тов экспериментальной группы относительно животных с гиперхолестеринемией, по-
лучавших симвастатин, зафиксировано значимое увеличение активности ГПО в 6,5
раз (р2<0,001), при небольшом повышении активности ГР (р2<0,001) и уровня GSН (р2<0,001). Сукцинатдегидрогеназа (II комплекс) и цитохромоксидаза (IV комплекс) являются кислородзависимыми ферментами митохондриальной дыхательной цепи и играют важную роль в процессах во взаимосвязи электронно-транспортной и окислительно- фосфорилирующей систем аэробного метаболизма. В мышцах животных с эссенциальной гиперхолестеринемией при введении симва- статина и убихинона (кофермента Q10), обнаружено увеличение активности СДГ в 1,5 раза (p2<0,001) и ЦХО практически в 2 раза (p2<0,001) относительно группы сравне- ния. Необходимо отметить, что комплексное введение симвастатина и убихинона способствовало восстановлению показателей активности СДГ и ЦХО до значений контрольной группы. У группы с эссенциальной гиперхолестеринемией при комплексном введении сим- вастатина с липоевой кислотой были повышены показатели активностей СДГ (р>0,001) и ЦХО (р>0,001) по сравнению с данными контроля, а относительно группы
получавшей только симвастатин оба показателя выросли практически в 4 раза
(р2<0,001). Данные результаты являются подтверждением особой роли липоевой кис- лоты в «активации» ситуации, направленной на окислительное фосфорилирование в митохондриях. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Анализируя полученные результаты, можно сделать вывод о том, что введение естественных метаболитов животным с эссенциальной гиперхолестеринемией при длительном применении симвастатина отражает динамику роста уровня лактата и тенденцию к снижению уровня ПВК, что позволяет говорить о превалировании анаэ- робного гликолиза и постепенном накоплении недоокисленных продукт в мышечной ткани. Необходимо отметить, судя по полученным данным, липоевая кислота наибо- лее эффективно снижает уровень лактоацидоза, чем кофермент Q10, что создает усло- вия для поддержания окислительного фосфорилирования в митохондриях миоцитов. Существенно отметить, что в эритроцитах липоевая кислота способствует накоп- лению GSH, активирует ГПО и в меньшей степени ГР, что позволяет полагать, что этот корректор повышает функциональную активность этих клеток, защищая от окислительной деструкции. Кроме того, комплексное введение симвастатином и с убихиноном, и с липоевой кислотой понижает тяжесть прооксидантного действия статина, за счет активации на уровне II и IV комплексов, входящих в схему дыхательной цепи, что позволяет в экс- тремальной ситуации стабилизировать и сохранять мышечную деятельность. ВЫВОДЫ 1. Продолжительное (в течение 3х месяцев) содержание животных на углеводно- жировой диете способствует росту содержания холестерина, накоплению конечных продуктов гликолиза в мышцах. Показатели активности сукцинатдегидрогеназы и ци- тохромоксидазы не изменены по сравнению с группой контроля. В эритроцитах обна- ружено снижение уровня пировиноградной кислоты, повышение содержания лактата и глутатиона на фоне синхронного уменьшения активности глутатионпероксидазы и увеличения активности глутатионредуктазы, как в мышцах, так и эритроцитах. 2. После введения симвастатина «гиперхолестеринимичным» животным наряду с нормализацией уровня холестерина, в мышцах и эритроцитах снижается содержание глутатиона и активность глутатионзависимых ферментов по сравнению с предыду- щей группой. В эритроцитах соотношение пируват/лактат сдвинуто за счет резкого накопления лактата. В митохондриях мышц выявлено угнетение активности работы дыхательной цепи на участке сукцинатдегидрогеназа – цитохромоксидаза. 3. В мышцах животных после ведения убихинона наблюдается увеличение актив- ности сукцинатдегидрогеназы и цитохромоксидазы достигающее контрольных значе- ний. В эритроцитах уровень восстановленного глутатиона превышает данные пред- шествующей группы, тогда как в мышцах наблюдается снижение содержания суб- страта. Активность глутатионпероксидазы синхронно в мышцах и эритроцитах рас- тет, но остается ниже контрольных значений. 4. В группе животных с эссенциальной гиперхолестеринемией после введения сим- вастатина и липоевой кислоты в мышцах регистрируется высокий уровень восстанов- ленного глутатиона и активность глутатионпероксидазы по сравнению с предыдущи- ми группами, достигающие в эритроцитах контрольных величин. 5. При введении липоевой кислоты в эритроцитах уровень лактата практически не отличался от контрольных величин, тогда как после введения убихинона был ниже данных группы сравнения и контроля. При включении в терапию метаболитов реги- стрировалось увеличение восстановленного глутатиона в меньшей степени, выражен- ной в группе с липоевой кислотой. После введения убихинона активность глутатион- редуктазы была резко увеличена по сравнению с предыдущими группами, а после введения липоевой кислоты не отличалась от контрольных величин. Соответственно активность глутатионпероксидазы в группе с убихиноном имела тенденцию к росту, а после введения липоевой кислоты активность фермента нормализовалась. 6. Метаболическая картина, складывающаяся при действии убихинона или липое- вой кислоты, позволяет выделить информативные звенья, отражающие специфиче- ские особенности каждого корректора: в митохондриях мышц на фоне убихинона нормализуется активность сукцинатдегидрогеназы и цитохромоксидазы, тогда как при введении липоевой кислоты регистрируется их активация; при нормализации уровня пирувата уменьшается степень лактоацидоза, в большей степени выраженная после введения липоевой кислоты. Изменения глутатионового звена, сбалансированы в большей степени при введении в комплекс липоевой кислоты, создающей опти- мальные условия для устойчивой адаптации к длительному воздействию статинов в мышцах. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Способ моделирования эссенциальной гиперхолестеринемии (патент на изобре- тение № 2733693 от 06.10.2020 г.) может использоваться в клинической диетологии для углубленного анализа особенностей нарушения обменных процессов у пациентов с гиперхолестеринемией и разработки рационов питания. А также при проведении медико-биологических испытаний новых диетических продуктов, направленных на борьбу с дислипидемиями. 2. Способ оптимизации кислородзависимых процессов при длительном введении симвастатина животным с использованием липоевой кислоты (патент на изобретение № 2741689 от 28.01.2021 г.) может быть применен для коррекции нарушений про- и антиоксидантного статуса, а также для улучшения энергетического обеспечения ме- таболических процессов, повышающих адаптационный потенциал организма. 3. Результаты диссертационной работы могут быть использованы для разработки стандартов доклинических испытаний терапевтических схем с целью профилактики и лечения осложнений статиновой терапии. ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ ИССЛЕДОВАНИ 1. Дальнейшего исследования требует изучение причин нарушения углеродно- энергетического обмена и поиски специальных корректоров влияющих на обмен глюкозы. 2. Поиск корректоров направленных на устранение лактоацидоза. 3. Перспективы разработки темы исследования могут быть связаны с созданием комплексных корректоров обеспечивающих длительную адаптацию к действию ста- тинов.