Лабораторная верификация клеточного повреждения головного мозга с помощью определения белков крови при легких черепно-мозговых травмах

Материалы и методы
Диссертационная работа проводилась на базе Клинико-диагностической
лаборатории ФГБУ «Клиническая больница №1» Управления делами Президента РФ
по разрешению Локального Этического Комитета (Протокол ЛЭК №16 от 03.09.2014).
Дизайн исследования. Проспективное сравнительное исследование пациентов,
разделенных по группам наблюдения: пострадавшие с легкой черепно-мозговой
травмой(основнаягруппа);пациенты,перенёсшиеплановоеоперативное
вмешательство на центральной нервной системе (ЦНС) (группа сравнения); здоровые
добровольцы (контрольная группа).
Согласноклиническимрекомендациям,утвержденнымАссоциацией
нейрохирургов России в 2016 году, легкая черепно-мозговая травма – это остро
развившееся нарушение функции мозга, являющееся следствием тупого удара, при
котором пациент находится в ясном сознании или уровень бодрствования снижен,
может отмечаться кратковременная потеря сознания и/или амнезия. Таким образом, на
сегодняшний день объективные критерии постановки диагноза отсутствуют.
Поскольку работа посвящена специальности «Клиническая лабораторная
диагностика» целью наблюдения основной группы является оценка диагностической и
прогностической значимости исследуемых белков. Целью наблюдения группы
сравнения является оценка диагностической чувствительности исследуемых белков.
Целью наблюдения группы здоровых добровольцев является оценка диагностической
специфичности исследуемых белков.
Для подтверждения роли биомаркеров (Tau-белок, GFAP, pNF-H) в диагностике
ЧМТ было проведено исследование сыворотки крови для определения концентрации
маркеров в динамике в первые сутки (1 проба), на следующий день (2 проба) и на 7-й
день (3 проба) – для основной и контрольной групп, а для группы сравнения были
выполнены два взятия крови: за сутки до оперативного вмешательства (1 проба) и на
следующий день после оперативного вмешательства на ЦНС (2 проба).
Взятие крови (1, 2, 3 проба) соответствовало срокам получения черепно-мозговой
травмы в основной группе. Сроки взятия биоматериала для исследования отличаются
от общепринятых (1,3,7 сутки), поскольку обусловлены скоростью метаболизма
исследуемых белков. Так, по данным литературы, уровень Tau-белка возвращается к
нормальным значениям через сутки после травмы, pNF-H – к 5-7 дню, а GFAP – через
месяц после травмы.
Характеристика пациентов, включенных в исследование. В проспективное
сравнительное исследование после подписания информированного согласия были
включены 121 человек разного пола, из которых 77 пострадавших с легкой ЧМТ
(основная группа), 14 пациентов, перенесших плановое оперативное вмешательство на
ЦНС (группа сравнения) и 30 здоровых добровольцев (контрольная группа).
Критерии включения в исследование были следующие – пострадавшие с
верифицированным диагнозом легкой ЧМТ; пациенты, перенесшие плановое
оперативное вмешательство на ЦНС; добровольцы без соматической патологии;
возраст старше 18 лет; пациенты без сопутствующей патологии в стадии обострения;
пациенты без клинически значимых отклонений в параметрах (лабораторных,
инструментальных),отражающихобщеесостояниеорганизма.Критериями
исключения являлись пострадавшие с тяжелыми ЧМТ; тяжелая печеночная или
почечная недостаточность (клиренс креатинина < 30 мл/мин); пациенты с тяжелой сердечно-сосудистой недостаточностью; детский возраст до 18 лет. Верифицированные клинические диагнозы извлекались из историй болезни пациентов и медицинской информационной системы (МИС) «Портал». Обобщенные данные выборки представлены в таблице 1. Лабораторно-диагностические методы исследования. Взятие крови для определения исследуемых маркеров (Tau-, GFAP-, pNF-белков) в динамике и уровня основных лабораторных показателей, отражающих общее состояние пациента, осуществлялось из локтевой вены. Для взятия крови использованы пробирки Greiner Bio-OneVacuette(GreinerBio-One,Австрия)на3млсЭДТА (этилендиаминтетраацетат калия 3) и на 5 мл с активатором свертывания (диоксид кремния (Si02) (CAT Serum Clot Activator)). Для получения сыворотки цельную кровь центрифугировали в течение 10 минут (3000 об/мин). Измерение уровня концентрации исследуемых биомаркеров проводили с использованием ИФА (иммуноферментный анализ). ИФА проводился с использованием следующего оборудования: планшетный ридер LABSYSTEMS iEMS Reader MF, Thermo Fisher Scientific (Финляндия), инкубатор-шейкер для микропланшетов iEMS, Thermo Fisher Scientific (Финляндия), устройство для промывки микропланшетов PW 40 BioRad (Финляндия). Таблица 1 Обобщенные данные выборки групп наблюдения характеристикииосновнаягруппаP поконтрольнаяP по клиническиегруппасравнениясравненгруппасравнени исходы(n=14)ию сюс (n=77)(n=30) основноосновной йгруппой группой Общие характеристики: Возраст (M±SD)50,84±22,0353,86±16,050,20433,87±6,85<0,001 Пол (% мужчин)50,65500,65500,65 Лабораторные показатели (М±SD): Глюкоза5,94±1,626,31±2,070,195,99±2,590,0011 (4,1-6,4 ммоль/л) Альбумин37,01±6,3836,2±5,310,95837,9±4,650,797 (35-52 г/л) Общий билирубин14,12±7,649,33±4,750,10310,56±6,360,286 (< 21 мкмоль/л) АЛТ25,43±29,827,64±19,900,16345,77±52,75<0,001 (< 50 ед/л) АСТ31,55±44,616,45±5,28<0,00136,77±63,030,0172 (< 40 ед/л) Мочевина5,58±2,216,49±2,170,9714,55±1,1260,00014 (2,8-8,1 ммоль/л) Креатинин90,43±19,478,0±8,740,0060387,43±14,230,0638 (44-115 мкмоль/л) ЛДГ433,9±312,8 662,5±392,440,436815,29±1760,8<0,001 (< 450 ед/л) КФК561,4±1073,1 193,0±49,497 0,0731513,61±1539,90,0642 (< 308 ед/л) Общий белок68,64±7,1665,45±8,510,38270,89±5,1950,0631 (64-87 г/л) Выявленная патология при инструментальных исследованиях (абс.ч./%): ЭКГ8 (10,39)3 (21,43)<0,054 (13,33)>0,05

МРТ4 (5,19)1 (7,14)>0,051 (3,33)>0,05

КТ21 (27,27)14 (100,0)<0,050 (0)<0,05 Клинические исходы (абс.ч./%): 28-дн. летальность2 (2,6)1 (7,14)>0,050 (0)>0,05

Летальность>281 (1,3)0 (0)>0,050 (0)>0,05
дней

Благоприятный74 (96,1)13 (92,86)>0,0530 (100)>0,05
ИФА проводился с использованием следующих тест-систем: набор GFAP
ELISA «Набор для определения глиофибриллярного кислого протеина (GFAP)
человека методом ИФА» (BioVendor); набор pNF-H ELISA «Набор для определения
фосфорилированных нейрофиламентов человека методом ИФА» (BioVendor); набор
Hu Tau «Иммуноферментный набор для определения человеческого Tau (нативного и
рекомбинантного)» (Invitrogen).
Измерение и анализ лабораторных данных, отражающих общее состояние
пациента (общий анализ крови (ОАК), глюкоза, общий билирубин, АСТ, АЛТ, общий
белок,мочевина,креатинин)проводились с использованием автоматических
анализаторов (Sysmex XT-4000i (Япония), Konelab 30i, Thermo Fisher Scientific
(Финляндия), COBAS INTEGRA 400 plus, Roche Diagnostics (Швейцария)) и ЛИС
«Алтэй». Измерение лабораторных показателей, отражающих общее состояние
пациента, проводилось с использованием наборов реагентов производства Sysmex,
Thermo Fisher Scientific, Roche.
Сбор данных по другим методам диагностики (КТ, МРТ, ЭКГ) проводился с
помощьюанализаисторийболезни,где отраженыпротоколыпроведенных
исследований, МИС «Портал».
Статистическая обработка результатов
Всвязисналичиемтрёхгруппнаблюдения,атакжеизмеряемых
(количественных) и неизмеряемых (качественных) параметров использовались
различные статистические методы. Проведена оценка всех исследуемых клинико-
лабораторных показателей в трех группах наблюдения последовательно: основная
группа сравнивалась с контрольной группой (с использованием критерия Фишера),
затем производилось сравнение в трех группах с использованием критериев Фридмана
и Крускала-Уоллиса. Для парных наблюдений использовался критерий Уилкоксона.
Ранговый коэффициент корреляции Спирмена использовался для анализа корреляции
между изменениями различных уровней биомаркеров после ЧМТ. Линейный
регрессионный анализ использовался для прогноза тяжести ЧМТ по уровням
биомаркеров. Площадь под характеристической кривой (AUC) рассчитана для всех
биомаркеров у пострадавших с ЧМТ против изменений биомаркеров в группе
пациентов, перенесших плановое оперативное вмешательство на ЦНС и здоровых
добровольцев.
Статистическая значимость определена при P<0,05. Все статистические расчеты были выполнены с использованием программного обеспечения SPSS версии 20.0 и GraphPad Prism версии 5.0 (GraphPad Inc). РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Оценка показателей концентрации биомаркеров клеточного повреждения мозга (Tau-, GFAP- и pNF-Н-белков в динамике) в трех группах наблюдения При проведении оценки показателей концентраций изучаемых биомаркеров (Tau-, GFAP- и pNF-Н-белков) в динамике в основной и контрольной группах (без клеточного повреждения мозга) было обнаружено, что показатели всех трех белковых маркеров клеточного повреждения мозга статистически значимо выше в группе пострадавших с легкими ЧМТ, но демонстрируют различную динамику значений концентрации между пробами (в зависимости от времени, прошедшего с момента травмы). Наиболее динамичными статистически значимыми показателями обладал Tau-белок и в меньшей степени pNF-Н–белок, а GFAP-белок практически не претерпел динамических изменений. Кроме того, нами выявлены статистически значимые различия в данных группах наблюдения по показателям уровня глюкозы, АЛТ, АСТ, мочевины и ЛДГ. Так, в основной группе у пострадавших с легкой ЧМТ статистически значимо преобладали высокие показатели глюкозы (р=0,001) и мочевины (р=0,0001), однако показатели АЛТ, АСТ, а также ЛДГ (р<0,0001) были статистически значимо ниже, чем в контрольной группе (здоровые добровольцы). Повышенные показатели глюкозы и креатинина могут косвенно подтверждать тяжесть течения ЧМТ, что соотносится с данными литературы. ЧМТЧМТ ЧМТ Рисунок 1. Оценка динамики концентраций Tau-белка по средним значениям в трех группах наблюдения: пострадавшие с легкой черепно-мозговой травмой; пациенты, перенёсшие плановое оперативное вмешательство на центральной нервной системе; здоровые добровольцы (стрелкой указаны разнонаправленные тренды динамики концентраций). Сравнение полученных результатов определения значений концентрации изучаемых биомаркеров (Tau-, GFAP- и pNF-Н-белков), а также их динамики по пробам (в зависимости от срока получения травмы) во всех трех группах наблюдения (пострадавшие с легкой черепно-мозговой травмой; пациенты, перенёсшие плановое оперативное вмешательство на центральной нервной системе; здоровые добровольцы) демонстрирует существенные доказательства подтверждения роли данных белковых маркеров в возможности оценки клеточного повреждения мозговой ткани (Рис.1). В основной группе и группе сравнения отмечается статистически значимое увеличение концентраций всех трех биомаркеров мозгового клеточного повреждения. Однакоприанализединамикиконцентрацийвтрехгруппахнаблюдения статистически значимые различия получены только для двух белков – Tau- и pNF-Н- белка, что свидетельствует о более стойком содержании GFAP-белка в крови при травматических повреждениях головного мозга. Также проведена оценка динамики исследуемых биомаркеров клеточного повреждения головного мозга в каждой группе наблюдения (Рис.2). Так в группе пациентов без признаков повреждения головного мозга (контрольная группа), отмечается незначительная динамика низких показателей концентраций Tau-, GFAP- и pNF-Н-белков, что подтверждает наличие процессов апоптоза в неповрежденной мозговой ткани. ЧМТОперации на ЦНС Рисунок 2. Динамика концентраций Tau-, GFAP- и pNF-Н-белков в трех группах наблюдения. Номер измерения: 1,2,7 сутки после травмы (основная группа), 1,2,7 сутки наблюдения (контрольная группа), 1 сутки до и в течение 1 суток после операции (группа сравнения) В основной группе отмечается выраженная динамика всех трех изучаемых биомаркеров: однонаправленная для Tau- и pNF-Н-белков, причем с более резким снижением концентрации Tau-белка; и разнонаправленная для GFAP-белка с повышением концентрации во 2-й пробе (на 2 сутки после травмы) и снижением в 3-й пробе (на 7 сутки после травмы). Вгруппесравнения(пациенты,перенёсшиеплановоеоперативное вмешательство на ЦНС) выявлено повышение концентраций всех исследуемых белковых маркеров клеточного повреждения мозга, более выраженное для pNF-Н- и GFAP-белков и менее выраженное для Tau-белка. Сравнение изучаемых клинико-диагностических параметров в трех группах наблюдения (результаты многофакторного анализа) Порезультатампроведенногомногофакторногоанализаневыявлено статистически значимых различий по ряду клинико-диагностических параметров в зависимости от групп наблюдения и клинических исходов, а именно: влияния пола, наличия патологии на ЭКГ и МРТ. По параметрам наличия/отсутствия патологии на КТ головного мозга в группах наблюдения и клиническим исходам обнаружены статистически значимые различия (р=0,000048 и р=0,011 соответственно). Так, по данным литературы КТ, как инструментальный метод диагностики, предназначенныйдлявизуализацииповрежденийголовногомозга,имеет субъективный характер, т.к. зависит от квалификации и опыта врача, проводящего и дающего заключение по исследованию. В нашем исследовании при проведении КТ головного мозга при легких ЧМТ патология была выявлена только в 27,3% случаев в отличие от пациентов, перенёсших плановое оперативное вмешательство на ЦНС, у которых закономерно, патология отмечалась в 100% случаев, что подтверждает существующие в клинической практике сложности диагностики и объективизации легких ЧМТ. При анализе КТ головного мозга в зависимости от клинических исходов патология нами была выявлена в 36,4% случаев при благоприятном исходе и в 100% - при летальном исходе, что косвенно свидетельствует о более точной диагностике при использовании КТ у пациентов с признаками клеточного повреждения мозга более тяжелого течения заболевания, однако по причине малочисленности группы с летальным исходом (n=4) утверждать данный факт не представляется возможным. С другой стороны слишком малый процент выявленной патологии на КТ у пациентов с исходом в улучшение подтверждает трудности объективизации легких ЧМТ при использовании данного диагностического метода. Сопоставление полученных данных с анализом значений концентрации исследуемых биомаркеров в зависимости от клинических исходов выявило статистически значимое преобладание высоких концентраций Tau-, GFAP- и pNF-Н- белков в группе летального исхода (р<0,05). Это свидетельствует о более высоких уровнях концентрации данных биомаркеров у пациентов с признаками клеточного повреждения мозга более тяжелого течения ЧМТ. По разности концентраций между пробами, взятыми в различные сроки после травмы, также были получены статистически значимые различия (р<0,05) по всем разностям концентраций между пробами (2 и 1: вторые и первые сутки после травмы, 3 и 1: седьмые и первые сутки после травмы, 3 и 2: седьмые и вторые сутки после травмы), что подтверждает данное предположение. Результаты ROC-анализа по оценке чувствительности /специфичности метода определения биомаркеров клеточного повреждения головного мозга (Tau- , GFAP- и pNF-Н-белков) В результате проведения ROC-анализа установлено, что статистически достоверную предиктивную значимость для отсутствия ЧМТ имеет разность концентрации Tau между 1, 2 и 3 измерениями, что подтверждает роль данного белкового маркера в патогенезе клеточного повреждения мозга по причине его минимального количества и отсутствия динамики за период наблюдения в крови у наблюдаемых без признаков клеточного повреждения мозга (Рис.3). Рисунок 3. Результаты ROC-анализа для оценки предиктивной роли изменений концентрации Tau-белка в отношении пациентов без признаков клеточного повреждения головного мозга (контрольная группа). Определениедиапазоновконцентрацийизучаемыхбиомаркеров клеточного повреждения мозга (Tau-, GFAP- и pNF-Н-белков) в группе пострадавших с легкими ЧМТ Далее была проанализирована частота встречаемости пострадавших с легкими ЧМТ в зависимости от диапазона концентрации изучаемых биомаркеров. Разделив весь диапазон концентраций от минимального до максимального значений по каждому белковому маркеру на 4 квартиля (Q1, Q2, Q3, Q4), провели сравнение по трем блокам квартилей: Q1, Q2-3 и Q4. Таким образом, определен диапазон концентраций при первичном измерении (в первые сутки после получения травмы) Tau -, GFAP- и pNF-Н-белков по квартилям для диагностики легких ЧМТ: по Tau - 9,24-78,07 нг/мл, по GFAP- 7,17-51,03 нг/мл и поpNF-Н-19,03-64,88нг/мл.УвеличениеконцентрациивдиапазонеQ4 свидетельствует о более тяжелой степени ЧМТ и риске неблагоприятного исхода, а именно: по Tau - >78,07 нг/мл, по GFAP- >51,03 нг/мл и по pNF-Н- >64,88 нг/мл.
В результате проведенного анализа обнаружено, что Q2-3 имеет максимальную
распространенность среди пострадавших основной группы по всем трем изучаемым
биомаркерам, а именно: по Tau -белку в 50,22%, по GFAP- белку в 50,65% и по pNF-Н-
белку в 53,25% случаев. А распространенность квартилей Q1 и Q4 заметно снижается
и составляет по всем биомаркерам от 22,07% до 25,97%. Таким образом, исходя из
распределения пострадавших с легкими ЧМТ по квартилям концентрации и
преобладания проб с диапазоном концентраций Q2-3 по всем трем изучаемым
биомаркерам, можно заключить, что легкие ЧМТ лежат в диапазоне концентраций Q1-
Q2-3 всех трех исследованных биомаркеров.
Оценка изучаемых клинико-диагностических параметров в трех блоках
сравнения по квартилям концентрации (результаты многофакторного анализа:
качественного и количественного)
При проведении многофакторного качественного анализа белковых маркеров
клеточного повреждения мозга, разделенных по квартилям концентрации на три блока
(Q1, Q2-3, Q4) и КТ показателей (патология есть/нет), а также клинических исходов
(улучшение или летальный исход) с использованием таблиц сопряженности и
определением χ2 Пирсона нами были получены статистически значимые различия
выборочно по исследуемым белковым маркерам и их концентрациям в зависимости от
времени взятия крови с момента травмы.
Так результаты сравнения непараметрических данных КТ при оценке
биомаркера GFAP2 в зависимости от уровня его концентрации в крови (р=0,019)
подтверждают предположение о том, что высокие концентрации данного биомаркера
коррелируют с наличием подтвержденной патологии на КТ, а чем меньше уровень
концентрации белка GFAP2, тем чаще отсутствует подтверждение патологии на КТ.
Схожие статистически значимые результаты были получены при сравнении
непараметрических данных КТ при оценке биомаркера GFAP3 в зависимости от
уровня его концентрации в крови (р=0,021).
Затем мы сопоставили уровни концентраций исследуемых биомаркеров по
квартилям в зависимости от клинических исходов и получили статистически значимые
различия по всем биомаркерам клеточного повреждения, но выборочно по времени
взятия крови. Так при анализе концентрации TAU2 были выявлены статистически
значимые различия при сравнении обоих клинических исходов: улучшение и
летальный исход (р=0,009). При исходе с улучшением преобладали концентрации
данного белкового маркера в Q1 и Q2-3 в 100% и несколько меньше в Q4 в 84,2%
случаев, тогда как при летальном исходе концентрации данного белкового маркера
были только в Q4 (15,8% случаев). Аналогичная картина обнаружена при анализе
концентрации TAU3, GFAP3, pNF-Н1 и pNF-Н2, где также были получены
статистически значимые различия (р=0,009) со схожими процентными показателями,
что подтверждает тенденцию определения более высоких концентраций белков
клеточногоповреждениямозгаприболеетяжелыхЧМТ,однакоиз-за
малочисленности выборки требует дальнейшего изучения.
При проведении многофакторного количественного анализа белковых маркеров
клеточного повреждения мозга, разделенных по квартилям концентрации на три блока
и клинико-лабораторных показателей с использованием критерия Фридмана были
обнаруженыстатистическизначимыеразличиямеждублокамиквартилей
концентраций, а именно: по возрасту (прямая зависимость) – чем старше возраст, тем
вышеконцентрациябиомаркеров:TAU1(р=0,024),TAU2(р=0,001)TAU3
(р=0,0000194), GFAP1 (p=0,008), GFAP2 (p=0,009), pNF-Н2 (p=0,009), pNF-Н3
(p=0,001); по уровню глюкозы (прямая зависимость) – чем выше уровень глюкозы, тем
выше концентрация биомаркеров: TAU2 (р=0,009) TAU3 (р=0,00027), GFAP1
(p=0,007), GFAP2 (p=0,009), GFAP3 (p=0,001), pNF-Н2 (p=0,008), pNF-Н3 (p=0,001); по
уровню альбумина (обратная зависимость) – чем выше уровень альбумина, тем ниже
концентрация биомаркеров: GFAP3 (p=0,045), pNF-Н3 (p=0,008); по уровню
креатинина крови (прямая зависимость) – чем выше уровень креатинина, тем выше
концентрациябиомаркера:pNF-Н2(p=0,033);поуровнюдиастолического
артериального давления (ДАД) (обратная зависимость) – чем выше ДАД, тем ниже
концентрация биомаркера: GFAP1 (p=0,043), GFAP2 (p=0,034).
Разработка клинико-лабораторного алгоритма верификации клеточного
повреждения мозга у пострадавших с легкими ЧМТ
По результатам проведенного исследования биомаркеров легких черепно-
мозговых травм: TAU-, GFAP-, pNF-Н- нами предложен новый клинико-лабораторный
алгоритм диагностики клеточного повреждения мозга (рисунок 4).

Рисунок 4. модифицированный клинико-лабораторный алгоритм верификации
легких черепно-мозговых травм

Алгоритм позволяет вне зависимости от результатов оценки состояния
сознания, наличия или отсутствия неврологического дефицита и подтверждения
повреждения головного мозга на КТ верифицировать черепно-мозговые травмы в 7-ми
дневный период от момента получения травмы и определить прогноз заболевания.
Пострадавшим с ЧМТ Категории 1 (ШКГ 15 и нет факторов риска) рекомендуется
провести определение концентрации Tau-, GFAP-, pNF-Н-белков в крови и, если
концентрации исследуемых белков будут в пределах Q1, а именно: по Tau- < 9,24 нг/мл, по GFAP < 7,17 нг/мл и по pNF-Н- < 19,03 нг/мл, то пострадавший может быть отпущен домой с рекомендациями по соблюдению покоя и ведению здорового образа жизни. Аналогичные рекомендации применимы и для пострадавших Категории 2 (ШКГ 15 + факторы риска) и Категории 3 (ШКГ 13-14) при отсутствии патологии на КТ и неврологическом обследовании, а также при отсутствии показаний к операции.Если же концентрации исследованных белков окажутся в пределах Q2-3 и выше, а именно: Tau- 9,24-78,07 нг/мл, GFAP- 7,17-51,03 нг/мл и pNF-Н- 19,03-64,88 нг/мл, то необходима госпитализация пострадавшего для наблюдения (не менее 24 часов)иуточнениядиагноза(КТ,МРТ,консультациянейрохирурга (нейротравматолога). Полученные нами данные о динамике концентрации Tau-, GFAP-, pNF-Н-белков в крови позволяют верифицировать клеточное повреждение головного мозга в течение первых 7 дней после получения травмы. Наиболее полная оценка тяжести повреждения, а также прогноз течения заболевания могут быть получены в 1 или 2 день нахождения пациента в стационаре, т.е. в минимальные сроки от момента получения травмы, особенно для двух белков Tau- и pNF-Н-, которые подвергаются выраженной статистически значимой динамике в отличие от GFAP- белка, который практически не подвергается динамике в указанный период времени. ВЫВОДЫ 1.Установлено, что у пострадавших с легкой черепно-мозговой травмой и пациентов, перенесших плановое оперативное вмешательство на центральной нервной системе, концентрации всех трех изучаемых биомаркеров (TAU, GFAP и pNF-Н), статистически значимо выше референсных значений, в отличие от группы здоровых добровольцев, не имеющих признаков клеточного повреждения мозга. 2. Установлено, что в семидневный период в зависимости от срока получения травмы, при легких черепно-мозговых травмах наблюдается снижениеуровня значений концентрации всех исследованных биомаркеров, более выраженное для TAU-белка (в основной группе ∆=45,29 нг/мл; в контрольной группе ∆=0,02 нг/мл, (р<0,05)), в меньшей степени - для pNF-Н-белка (в основной группе ∆=24,71 нг/мл; в контрольной группе ∆=0,04 нг/мл, (р<0,05)) и практически не выраженное для GFAP- белка (в основной группе ∆=0,67 нг/мл; в контрольной группе ∆=0,03 нг/мл, (р<0,05)) по сравнению с группой здоровых добровольцев, не имеющих признаков клеточного повреждения мозга. 3. Установлена связь травматического повреждения в повышении концентрации TAU, GFAP и pNF-Н-белков, выраженная статистически значимымиразличиями средних значений концентраций между пробами основной группы и группы сравнения: TAU1 ЧМТ > TAU1 операции на ЦНС (∆=10,59 нг/мл), TAU2 ЧМТ < TAU2 операции на ЦНС (∆=-39,65 нг/мл); (р<0,05); pNF1 ЧМТ < pNF1 операции на ЦНС (∆=- 24,16 нг/мл), pNF2 ЧМТ < pNF2 операции на ЦНС (∆=-161,64 нг/мл), (р<0,05). 4. Доказано, что определение концентрации TAU-, GFAP- и pNF-Н-белков в качествебиомаркеровклеточногоповреждениямозгапозволяетпровести объективную диагностику легких черепно-мозговых травм независимо от результатов КТ, которая оказалась информативной лишь в 27,3% случаев. 5. Определен диапазон концентраций при первичном измерении (в 1-e cутки после травмы) TAU-, GFAP- и pNF-Н-белков для диагностики легких черепно- мозговых травм: по TAU-белку 9,24-78,07 нг/мл, по GFAP- 7,17-51,03 нг/мл и pNF- 19,03-64,88 нг/мл. Увеличение концентрации выше этих пределов свидетельствует о более тяжелой степени черепно-мозговых травмы и риске неблагоприятного исхода, что рекомендуется использовать в качестве критерия тяжести и прогноза черепно- мозговых травм. 6. Разработан новый клинико-лабораторный алгоритм с использованием динамического измерения TAU-, GFAP- и pNF-Н-белков, которыйпозволяет объективно верифицировать клеточное повреждение головного мозга у пациентов с легкими черепно-мозговыми травмами. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Привнесенииклинико-лабораторногоалгоритмасиспользованием динамического измерения TAU-, GFAP- и pNF-Н-белков, которыйпозволяет объективно верифицировать клеточное повреждение головного мозга у пациентов с легкими черепно-мозговыми травмами, в Порядки и Стандарты оказания медицинской помощи таким пациентам, рекомендации применимы для ежедневной работы специалистов клинической лабораторной диагностики, врачей приемных отделений, травматологических, нейрохирургических, неврологических отделений. 1. Для диагностики ЧМТ в клинической практике рекомендуется: - проводить определение концентрации TAU-, GFAP- и pNF-белков в качестве маркеров повреждения мозговой ткани вне зависимости от результатов оценки сознания, неврологического дефицита, а также визуализации травмы головного мозга по КТ. - определять концентрацию TAU-, GFAP- и pNF-белков рекомендуется в 1-й/2-й день после получения травмы, но не позднее 7-го дня после получения травмы. - определять концентрацию TAU-, GFAP- и pNF-белков рекомендуется в динамике для исключения нетравматических причин повышения. 2. Определение всех трех биомаркеров – TAU-, GFAP- и pNF-белков в качестве маркеров черепно-мозговой травмы рекомендуется использоваться для оценки тяжести течения, прогноза и исхода черепно-мозговой травмы. 3. Увеличение концентрации Tau-белка более 78,07 нг/мл, GFAP более 51,03 нг/мл, pNF-Н более 64,88 нг/мл свидетельствует о более тяжелой степени течения черепно-мозговой травмы и риске неблагоприятного исхода, что можно использовать в качестве критерия тяжести и прогноза черепно-мозговой травмы. Перспективы дальнейшей разработки темы исследования Дальнейшее развитие на основании клинико-лабораторных исследований теоретической базы по изучению белковых маркеров повреждения головного мозга, определениетребованийипоказанийкусловиямвыявленияTau-белка, глиофибриллярного кислого протеина астроглии (GFAP), фосфорилированного нейрофиламента Н (pNF-Н), установление предела изменения концентраций и определение диагностической информативности каждого из них позволит расширить возможности клинической лабораторной диагностики как научной и прикладной специальности. Объективное подтверждение легкой черепно-мозговой травмы поможет сформировать критерии для принятия экспертного решения о тяжести причиненного вреда здоровью, а также в организации модельных экспериментов по оценке эффективности средств защиты головы (шлемов).