Фармакогностическая характеристика Artemisia adamsii Вess. и Artemisia macrocephala Jaque. ex Bess. флоры Бурятии и Монголии и разработка лекарственных средств на их основе

Объекты и методы исследований
Объектами исследования являются образцы гербаризованных растений и
образцы надземной части растений Artemisia adamsii Bess. и Artemisia
macrocephala Jaque. ex Bess., собранные в Иволгинском и Селенгинском районах
Республики Бурятия и Монголии с 2015 по 2018 гг. на разных фазах их
развития.
В работе использованы реактивы, растворители и стандарты, отвечающие
требованиям, соответствующей нормативной документации.
Микроскопические исследования проводили на микроскопах ЛОМО μVizo-
102. Качественный состав A. adamsii и A. macrocephala проводили методом
тонкослойной хроматографии на пластинках ПТСХ-ПА-УФ-254 «Sorbfil» и на
высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «Милихром А-02» (ЗАО
«ЭКОНОВА», РФ) с последующей компьютерной обработкой результатов
исследования с помощью программы «Мультихром для Windows».
Определение компонентного состава эфирного масла и жирных кислот A.
adamsii и A. macrocephala проводили на газовом хроматографе Agilent 6890В с
масс-спектрометром типа тройного квадруполя 7000С в качестве детектора и
Agilent 7890 с квадрупольным масс-спектрометром (Agilent Technologies, США).
Элементный состав определяли атомно-эмиссионным методом с индуктивно
связанной плазмой (ICP) на спектрометре Profile plus (Teledyne, США) после
предварительного разложения объектов в микроволновой системе MARS 6 с
использованием специальных сосудов из фторполимерных материалов XP-1500
Plus. Ртуть определяли на атомно-абсорбционном спектрометре Solaar 6M (Thermo
Scientific, США), оснащенном электротермическим атомизатором FS90 и ртутно-
гидридной приставкой VP-100.
Спектрофотометрическое определение биологически активных веществ
проводили на спектрофотометре ПЭ 5400 УФ (Экохим, РФ) в кварцевых кюветах
с толщиной поглощающего слоя 10 мм.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета
программ Microsoft Excel (Microsoft office 365) и IBM SPSS Statistics 22 (IBM, Inc).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Запасы сырья, стандартизация А. adamsii herba и A. macrocephala herba
Установлено, что урожайность A. adamsii на трех конкретных зарослях
составляет от 76,67±10,63 г/м2 до 118,58±9,93 г/м2, эксплуатационный запас – от
40,11 до 78,07 кг, биологический запас – от 70,90 до 108,97 кг. Возможный
ежегодный объем заготовок с исследованных зарослей составляет 33,62 кг сырья.
Определены внешние признаки цельного, измельченного сырья и порошка
А. adamsii. Цельное сырье – это высушенная надземная часть растения или
облиственные верхушки, размером до 30 см, с одревесневшей нижней ветвистой
частью стебля, покрытой бурой корой. Однолетние травянистые побеги двух
типов – вегетативные и плодоносящие. Листья зеленые, точечно-железистые и
паутинисто-волосистые. Характер края листа – цельный. Корзинки шаровидные,
2-4 мм в диаметре, поникающие, расположены в узком метельчатом соцветии.
Наружные листочки обертки коротковолосистые, овально-продолговатые,
внутренние – округлые, голые. Цветоложе голое. Краевые цветки пестичные, в
числе 11-12. Срединные цветки обоеполые, в большом числе 40-44
(диагностический признак). Цвет стеблей – серый; листьев – от зеленого до темно-
зеленого, снизу сероватый, цветков – от светло-желтого до желтого. Запах
сильный, характерный. Вкус водного извлечения пряно-горький. Измельченное
сырье – это смесь кусочков стеблей, листьев, соцветков, проходящих сквозь сито с
отверстиями размером 7 мм. Цвет от темно-зеленого со желтовато-зелеными
вкраплениями. Запах сильный, характерный. Вкус водного извлечения пряно-
горький. Порошок. Смесь кусочков стеблей, листьев, соцветий, проходящих
сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Цвет от темно-зеленого со желтовато-
зелеными, светло-коричневыми вкраплениями. Запах сильный, ароматный
своеобразный. Вкус водного извлечения – пряно-горький.
Установлены микроскопические признаки цельного и измельченного сырья:
клетки нижнего эпидермиса сильноизвилистые, верхнего – слабоизвилистые.
Устьица крупные овальные окружены 3-6 клетками эпидермиса (аномоцитный тип
устьичного аппарата).
Полынь Адамса – эфирномасличное растение, поэтому на поверхности
листовой пластинки и листочков обвертки встречаются многочисленные
эфирномасличные железки. Фрагменты листовой пластинки с эпидермисом из
сильноизвилистых клеток и устьицами, окруженными 3-5 клетками (аномоцитный
тип). На поверхности листовой пластинки видны многочисленные
эфирномасличные железки и многоклеточные волоски. Эфирномасличные
железки крупные, характерны для семейства Asteraceae овальной формы,
двухрядные, 3-4- ярусные с 6-8 выделительными клетками. На поверхности
трубчатых цветков встречаются железистые волоски. На верхней и нижней
стороне листовой пластинки просматриваются Т-образные волоски. На
поверхности трубчатых цветков встречаются железистые волоски. Простые Т-
образные волоски состоят из короткой многоклеточной ножки, несущей длинную
тонкостенную клетку с заостренными концами, прикрепленную к ножке
посередине и лежащую горизонтально. Места прикрепления волосков к
эпидермису имеют вид круглых валиков (Рисунок 1).

Рисунок 1 – Микроскопическое строение A. adamsii herba: поверхность
эпидермиса А, Б – листочков обвертки: 1 – эфирномасличная железка (вид сбоку),
2 – эфирномасличные железки (вид сверху), 3 – Т-образный волосок; В –
эпидермис трубчатого цветка: 4 – железистый волосок, Г – нижний эпидермис, Д –
верхний эпидермис, 1 –устьице, 2 – клетки эпидермиса, Е – Т-образный волосок,
2-многоклеточная ножка, 3-место прикрепления волоска (×400).

Определены показатели испытаний доброкачественности сырья и
установлены нормы для цельного, измельченного сырья и порошка A. adamsii:
экстрактивных веществ, извлекаемых спиртом этилового 70% (не менее 30%),
влажность (не более 10%), золы общей (не более 10%) и золы, нерастворимой в
10% хлористоводородной кислоте (не более 2%), листьев, побуревших и
почерневших (не более 2%), частиц, непроходящих сквозь сито с отверстиями
размером 7 мм (не более 1%), частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями
размером 0,18 мм (не более 5%), органической примеси (не более 1%),
минеральной примеси (не более 1%).
A. adamsii herba по показателю «Микробиологическая чистота»
соответствует требованиям Государственной фармакопеи XIV.
Установлено, что урожайность A. macrocephala herba на двух конкретных
зарослях составляет от 105,16±14,97 до 116,75±15,76 г/м2, биологический запас –
до 370,69 кг, эксплуатационный запас – до 213,07 кг. Возможный ежегодный
объем заготовок с исследованных зарослей составляет 80,25 кг сырья. Цельное
сырье представляет собой облиственные верхушки размером до 25 см. Листья
ямчато-железистые, с верхней стороны зеленые, снизу сероватые или беловатые.
Средние и нижние стеблевые листья от широко до удлиненно-эллиптических.
Пластинка их дважды или трижды перисторассечена, конечные дольки
продолговато-яйцевидные, длиной 1,5-4 см, шириной 1-2 см, (диагностический
признак). Характер края листа – цельный. Корзинки шаровидные, 5-10 мм в
диаметре, расположены в рыхлой кисти. Цвет стеблей – серый; листьев – от
зеленого до светло-зеленого, снизу сероватый, цветков – от светло-желтого до
желтого. Запах сильный, характерный. Вкус водного извлечения пряно-горький.
Измельченное сырье. Смесь кусочков стеблей, листьев, соцветий, проходящих
сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет от зеленого с желтовато-зелеными
и светло-коричневыми вкраплениями. Запах сильный, характерный. Вкус водного
извлечения пряно-горький. Порошок. Смесь кусочков стеблей, листьев, соцветий,
проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Цвет от зеленого со
желтовато-зелеными, светло-коричневыми вкраплениями. Запах сильный,
характерный. Вкус водного извлечения пряно-горький.
Установленыдиагностическиемикроскопическиепризнаки:при
рассмотрении листа с поверхности видно, что клетки нижнего эпидермиса
сильноизвилистые, верхнего – прямостенные, местами слабоизвилистые. Устьица
крупные овальные окружены 4-6 клетками эпидермиса (аномоцитный тип
устьичного аппарата).
Листья густо опушены Т-образными волосками, состоящими из двух-,
четырех-клеточной ножки, к которой горизонтально прикреплена длинная клетка с
заостренными концами и одноклеточными бичевидными волосками. В сырье
присутствуют эфирномасличные железки ярусного типа (рисунок 2).

Рисунок 2 – Микроскопическое строение A. macrocephala herba: А. нижний
эпидермис листьев: 1- устьице, аномоцитного типа, 2- место прикрепления
волоска; Б. верхний эпидермис: 3 – эфирномасличная железка (вид сверху), 4- Т-
образный волосок; B. 1 – бичевидные волоски, 2-место прикрепления; Г. Т-
образного волоска, 3- Т-образный волосок, 4-эфирномасличные железки, 5- клетки
эпидермиса (×400)

Определены показатели испытаний доброкачественности сырья и
установлены нормы для цельного, измельченного сырья и порошка A.
macrocephala: экстрактивных веществ, извлекаемых спиртом 70% – не менее 20%,
влажность – не более 8%, золы общей и золы, нерастворимой в 10%
хлористоводородной кислоте – не более 8% и не более 3%, соответственно.
Рекомендуемые показатели для примесей, включающие части, изменившие
окраску (потемневшие и почерневшие) – не более 2%, частиц, непроходящих
сквозь сито с отверстиями размером 7 мм – не более 1%, частиц, проходящих
сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм – не более 4%, органической примеси
– не более 1%, минеральной примеси – не более 1%.
A. macrocephala herba по показателю «Микробиологическая чистота»
соответствует требованиям Государственной фармакопеи XIV.

Компонентный состав эфирного масла A. adamsii herba и A. macrocephala
herba
Подобраны оптимальные условия выделения эфирного масла из A. adamsii
herba в зависимости от степени измельчения сырья и продолжительности
гидродистилляции (Рисунок 3).

Рисунок 3 – Выход эфирного масла A. adamsii herba (%) в зависимости от
степени измельчения сырья и продолжительности гидродистилляции

По результатам анализа видно, что наибольший выход эфирного масла
получен при гидродистилляции сырья с размером частиц 1 мм – 0,33%, а
наименьший выход наблюдается при 7 мм – 0,08%. Чтобы получить значительный
выход эфирного масла и его наиболее разнообразный компонентный состав
необходимо экстрагировать сырье не менее 3 часов. Изучен компонентный состав
эфирных масел A. adamsii herba, собранной на территории Монголии
(Архангайский, Хэнтэйский и Сухэ-Баторский аймаки и район Баганур) и России
(районы Республики Бурятия: Иволгинский, Селенгинский районы – окр. моста
через река Баян-гол, г. Гусиноозерск) в 2015-2018 гг. Выход масла варьирует от
0,32 до 1,30 %.
В образцах эфирного масла A. adamsii обнаружено свыше 70 соединений.
Доминирующими компонентами эфирного масла во всех образцах (кроме
образцов из района Баганура) являются монотерпеновые соединения: камфора
(8,70 – 48,44 %), 1,8 цинеол (0,70 – 41,71 %), камфен (0,55% – 16,6 %), терпинеол-4
(1,10 – 9,02%), о-цимен (0,49 – 9,02%), α-терпинеол (0,60 – 4,11 %), α-бисаболол
(0,59 – 17,34 %), спатуленол (0,90 – 10,58 %), бициклогермакрен (1,88 – 11,06%). В
образцах масла из Монголии, в отличие от масла из сырья, собранного в Бурятии,
обнаружены сабинен (до 0,28%), α-терпинен (до 2,67%), транс-β-оцимен (0,42%),
терпинолен (до 1,07%), β-копаен (до 0,1%), 1-метил-4-ацетил циклогексен (до
2,95%) (рисунок 4).

Рисунок 4 – Хроматограмма эфирного масла A. adamsii herba из
Архангайского аймака, Монголия; 1 – камфора, 2 – 1,8-цинеол, 3 – камфен, 4 –
борнеол

Оптимальным сроком сбора сырья является фаза цветения, в данный период
наблюдается наибольший выход масла (0,40-1,30%) (рисунок 5).

Выход эфирного масла, %
1,5
1,26
0,5
0,69
00,05
листьясоцветиястебли

Рисунок 5 – Накопление эфирного масла в различных частях растения A.
adamsii herba

Выход эфирных масел из разных морфологических частей: соцветий,
листьев и стеблей, различен (0,05-1,26%)
Результаты изучения динамики накопления эфирного масла по фазам
вегетации A. adamsii herba показали, что выход эфирного масла в разные фазы
развития растения отличается (таблица 1).
Таблица 1 – Выход эфирного масла по фазам вегетации A. adamsii herba
№Место сбораФаза развития и дата сбораВыход эфирного масла, %
Фаза начала вегетации, 23.06.20150,78

окр с. Ганзурино,Фаза бутонизации, 19.07.20150,57
1Иволгинский район,
Фаза цветения, 22.08.20181,30
Бурятия, Россия
Фаза плодоношения, 28.09.20150,03

Наибольший выход эфирного масла наблюдается в фазу цветения (до
1,30%). Кроме того, выход эфирного масла и его компонентный состав будут
важными показателями для установления оптимальных сроков заготовки сырья. В
таблице 2 представлен компонентный состав эфирного масла A. adamsii,
собранного на разных фазах развития растения.
Таблица 2 – Компонентный состав эфирного масла в зависимости от фазы
развития A. adamsii
Содержание компонентов, в % от цельного
масла
№Компоненты*J
Собственные данные
Ф.вегетФ. бутонФ.цветФ.плод
Монотерпеноиды
1α-пинен9320,59-**++
2камфен9471,597,2923,476,32
3β-пинен9750,110,23+0,29
42-карен1000-0,270,530,66
53-карен1010-0,552,210,6
6n-цимен1024-4,43-4,5
71,8-цинеол103121,1414,6610,7510,74
8o-цимен10392,72+6,59+
9γ-терпинен1058+0,370,990,46
10филифолон11032,52—
11хризентенон11264,01—
12камфора114448,7238,1527,9836,84
13борнеол1166+5,782,75,35
14терпинеол-411773,321,220,491,73
15α-терпинеол11912,011,040,58+
16борнилацетат1287+1,390,730,84
17тимол1292—1,09
Сумма монотерпеноидов86,7375,3877,0268,61
Сесквитерпеноиды
18α-копаен1378-0,15-0,27
19кариофиллен1422+0,08+0,07
20аллоаромадендрен1464+1,57+2,06
21бициклогермакрен1500++1,250,62
Продолжение таблицы 2

22спатуленол15801,764,427,663,80
23кариофиллен оксид1586-+-0,35
24α-бисаболол16881,511,052,281,19
Сумма сесквитерпеноидов3,277,2711,198,36
Ациклические соединения
25эйкозан2000–+0,39
26генейкозан2100+0,21++
27гексакозан2600-++0,52
Прочие соединения
28месителен992-0,431,940,95
29октанол1003-0,15-0,14
Сумма всех компонентов90,0083,4490,1578,97
Примечание: *в таблице представлены компоненты, содержание которых в масле более 0,4%.

По данным исследования видно, что основными доминирующими
компонентами эфирного масла растений, собранных в разные фазы развития
являются камфора (27,98-48,72%), 1,8-цинеол (10,74-21,14%), камфен (1,59-
23,47%), спатуленол (1,76-7,66%), борнеол (2,7-5,75%), α-бисаболол (1,05-2,28%).
Эфирное масло, полученное из A. macrocephala методом перегонки с
водяным паром, имеет характерную темно-синюю окраску, что связано с
присутствием хамазулена. С целью подбора оптимальных условий выделения
эфирного масла A. macrocephala была определена зависимость выхода эфирного
масла A. macrocephala herba от времени гидродистилляции (рисунок 6).

Рисунок 6 –Выход эфирного масла A. macrocephala herba в зависимости от
времени гидродистилляции.

Проведенный анализ показал, что максимальный выход масла наблюдался
при 3 и 5 часах (0,33%). Чтобы получить значительный выход масла и высокое
содержание хамазулена в нем перегонку необходимо проводить в течение 3 часов.
На территории Монголии из надземной части A. macrocephala выделено
эфирное масло темно-синего цвета, выход составил от 0,30 до 0,66% в пересчёте
на воздушно-сухую массу. В составе эфирного масла идентифицировано свыше 60
соединений, что составляет 95,7-99,8% от суммы компонентов. Основу эфирного
масла составляют моно- и сесквитерпеноиды.
МГК-анализ эфирных масел полыни крупноголовчатой, произрастающих в
России (Республика Алтай), Пакистан, Монголия (Хувсгел аймак, Заалтайское
Гоби) показывает, что образцы из Монголии, несмотря на некоторые отличия в
составе эфирных масел, образует единый кластер. Внутри которого можно
последить тенденцию к разделению по подгруппам в соответствии с
географическим происхождением образцов, на их распределение наибольшее
влияние оказывают содержание в масле
1,8-цинеола, β-селинена и сложных
эфиров нерола и гераниола (рисунок 7).

Рисунок 7 – Метод главных
компонент. Биплот (ГК1–ГК2) данных по
химическому составу эфирных масел
Artemisia macrocephala Jacque ex Besser.
На рисунке обозначены: квадратом
синего цвета – эфирное масло полыни
крупноголовчатой, произрастающей в
России (Республика Алтай); квадратом
зеленого цвета – в Пакистане; квадратами
красного цвета – в Монголии, в том числе
собственные и литературные данные (4 –
аймак Хувсгел, 5 – Заалтайское Гоби).

Основным компонентом эфирного масла A. macrocephala является
хамазулен (7,4-16,1%), что совпадает с данными литературы (Дудко В.В., 1974;
Ханина М.А., 1992) и Монголии (Володя Ц., 2008). Другим веществом,
обладающим противовоспалительным действием и содержащимся в изученных
маслах в заметных количествах (3,4-20,7%), является α-бисаболол. Обращает на
себя внимание значительное содержание производных нерола (нерил-2-
метилбутаноат, нерил-3-метилбутаноат, нерилпентаноат) и его изомера гераниола
(геранил-2-метилбутаноат, геранил-3-метилбутаноат) в сумме 20-28,9%.
Основными константными компонентами во всех органах растения
являются камфора (1,03-4,95%), нерил-2-метилбутаноат (10,50-26,35%), α-
бисаболол (17,54-27,88%), хамазулен (8,30-20,46%).
Результаты изучения динамики накопления эфирного масла по органам A.
macrocephala herba показали, что наибольший выход наблюдается в соцветиях
(0,66%), наименьший – стеблях (0,16%); в листьях же выход составил (0,33%).
Основными константными компонентами во всех органах растения являются
камфора (1,03-4,95%), нерил-2-метилбутаноат (10,50-26,35%), α-бисаболол (17,54-
27,88%), хамазулен (8,30-20,46%) (таблица 3).
Таблица 3 – Компонентный состав эфирного масла A. macrocephala herba в
зависимости от морфологической части растения
Содержание, %-от цельного
Jмасла
№Компонент
листья соцветиястебли

1сабинен9731,281,28-
2β-пинен9751,55–
3β-мирцен991-2,19-
42-карен1000-0,57-
5α-терпинен10170,76–
6п-цимен1024-1,06-
7о-цимен10391,35–
81,8-цинеол103120,6810,85+
9γ-терпинен10581,041,85-
10камфора11444,951,031,14
11терпинеол-411771,970,92-
12α-терпинеол11915,582,42-
13кариофиллен1422-1,52-
14дегидро сесквицинеол14716,4824,45-
15селина-4,11-диен14770,890,49-
16гермакрен D1484-0,99-
17β-селинен14882,602,30-
18нерил-2-метилбутаноат157912,8510,5026,35
19β-Эвдесмол1651–10,60
20α-бисаболол168817,5427,8818,97
21хамазулен173020,469,668,30
22октадекан1800–5,40
23трикозан2300–10,88
24тетракозан2400–11,42
Сумма всех компонентов99,9899,9693,06
*Примечание: знак «-» означает, что компонент отсутствует; знак«+» означает, что компонент
присутствует, но его содержание меньше 0,1%.
Фитохимическая оценка A. adamsii и A. macrocephala
В A. adamsii herba и A. macrocephala herba с помощью качественных
реакций по общепринятым методикам обнаружены следующие группы
биологически активных веществ: эфирное масло, аскорбиновая кислота,
дубильные вещества, флавоноиды, кумарины, сапонины, жирные кислоты. В A.
adamsii herba методом ТСХ и ВЭЖХ идентифицированы флаваноид – лютеолин и
кумарин – скополетин (Рисунок 8)
А.Б.
Рисунок 8 – А. Хроматограмма водно-спиртого извлечения A. adamsii herba: пик
14 – лютеолин, Rt=15,49 мин, Б. Хроматограмма водно – спиртового извлечения A.
adamsii herba: пик (12- скополетин). В A. macrocephala herba данным методом
идентифицированы флаваноиды – лютеолин-7-глюкозид и рутин, кумарин –
умбеллиферон.

Рисунок 9 – Хроматограмма водно-спиртового извлечения A. macrocephala herba:
пик (10) – лютеолин-7-глюкозида, (11) – рутин

Количественное определение БАВ в A. adamsii и A. macrocephala проводили
с использованием химических и физико-химических методов. Метрологические
характеристики методик представлены в таблице 4.
Таблица 4 – Метрологические характеристики методикколичественного
определения БАВ в A. adamsii и A. macrocephala
БАВXср, %SS2P,Т(p,f)∆xE, %
%
Аскорбиновая0,890,0140,0002952,770,022,52
кислотаA. adamsii
A. macrocephala0,530,0130,0002952,770,012,95
ДубильныеA. adamsii5,020,0600,0020952,770,514,13
вещества
(титриметричесA. macrocephala3,440,1020,0100952,770,233,68
кий метод)
СуммаA. adamsii0,370,0120,0001952,770,024,19
кумариновA. macrocephala0,160,0040,00002952,770,013.35

Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов A.
adamsii в пересчете на лютеолин методом УФ-спектрофометрии. На первом этапе
исследований проведен анализ спектров спиртовых извлечений и спиртовых
извлечений после кислотного гидролиза из травы A. adamsii (1:50). Установлено,
что максимумы поглощения составляют 392-400 нм, что соответствует спектру
поглощения СО лютеолина.
Для разработки методики подбирали оптимальные условия экстракции: тип
экстрагента, степень измельчения сырья, соотношение сырья и экстрагента, время
экстрагирования. На основании полученных результатов предложены
оптимальные условия и методика определения суммы флавоноидов с
использованием в качестве стандартного образца лютеолина.
Оптимальными условиями извлечения суммы флавоноидов из A. adamsii
herba являются: экстрагент – этанол 70% с 1% HCl , степень измельчения – 0,25
мм, соотношение сырья и экстрагента – 1:50, экстракция в течение 30 минут.
Таблица 5 – Метрологические характеристики методики количественного
определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин в A. adamsii herba
fХср, % S2SP, %t (P,t)∆XE,%
50.710.01040.0001952,570,011,56
Установлено, что содержание суммы флавоноидов в A. adamsii herba
составляет 0,71±0,01.
Разработана и валидирована методика количественного определения суммы
флавоноидов A. macrocephala в пересчете на лютеолин-7-глюкозид методом УФ-
спектрофометрии. С целью выбора аналитической длины волны изучен УФ-
спектр поглощения 70 % спиртового извлечения сырья на спектрофотометре с
программой сканирования по длине волны для спектрофотометра ПЭ 5400 ВИ.
Установлено, что максимумы поглощения составляют 399 – 401 нм, что
соответствует максимуму поглощения СО лютеолин-7-глюкозида (рисунок 10).
Рисунок 10 – Спектры поглощения комплексов 70% спиртового извлечения
A. macrocephala herba и СО лютеолин-7-глюкозида с алюминия хлоридом
Для количественной оценки содержания БАВ в сырье A. macrocephala
предлагается спектрофометрическое определение суммы флавоноидов в пересчете
на СО лютеолин-7-глюкозида.
Оптимальными условиями извлечения суммы флавоноидов из A.
macrocephala herba являются: экстрагент – этанол 70%, степень измельчения –
0,25 мм, соотношение сырья и экстрагента 1:100, экстракция с обратным
холодильником в течение 1 часа. Результаты анализа представлены в таблице 6.
Таблица 6 – Метрологические характеристики методики количественного
определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид в A.
macrocephala herba
F Хср,%SS2P, %t (P,t)∆XE,%
5 1,530.060.003952,770.084,90
Установлено, что содержание суммы флавоноидов в A. macrocephala herba
составляет 1,53±0,08 %.
Основными жирными кислотами в исследуемых видах полыней являются
пальмитиновая, линолевая и линоленовая, содержание, которых в A. adamsii
составило 16:0 (11,78 – 20,62%), 18:2ω6 (16,48 – 22,21%), 18:3ω3 (24,12 – 27,56%),
и в A. macrocephala – 16:0 (16,50% – 17,25%), 18:2ω6 (16,59% – 17,34%), 18:3ω3
(24,91% – 26,04%).
В надземной части A. adamsii и A. macrocephala определены следующие
микроэлементов – Al, Mn, Fe, Zn, Cu, Ni, Cr, Mo и Pb, As, Cd. Высокое содержание
среди исследуемых микроэлементов приходится на Al, Mn и Fe. В A. adamsii AI
составляет от 15.3-45.33 мг/кг, Mn – 25,04-55,58 мг/кг, Fe – 15,94-80,59 мг/кг, а в A.
macrocephala – 18,41-38,58 мг/кг, – 84,6-99,88 мг/кг и 28,81-58,97мг/кг,
соответственно. По содержанию тяжелых металлов исследуемые образцы сырья
A. adamsii и A. macrocephala соответствуют ПДК, указанных в ГФ XIV.
Разработка лекарственных средств на основе A. adamsii herba и A.
macrocephala herba
Для прижигания (цзю-терапия) в старину применялись конусы, а в
настоящее время папиросы (сигареты), изготовленные из полыни. Название
метода чжень-цзю терапии означает чжень-укол иглой и цзю-прижигание: метод
заключается в нанесении укола или ожога (прогревания) в определенные точки
тела. Полынь легко воспламеняется и выделяет большое количество тепла. Хотя
нет никаких сообщений о каких-либо эффектах, кроме тепла, в используемом
методе в классической традиционной китайской медицине (ТКМ), вполне
вероятно, что эфирное масло, содержащееся в моксах, играет определенную роль в
терапевтическом эффекте прижигания. В ТКМ применяют более 10 различных
полыней в моксах (A. argyri, A. igniaria, A. verbenacea, A. verlotorum, A. vulgaris)
(Wright C.W., 2008).
Полынные сигары из A. adamsii herba получали по технологии для
курительных сборов (Species fumales) и традиционными методами [ГФ XIV, Гаваа
Л., 1991]. Прижигание (цзю-терапия) производится путем наложения на активные
точки полынных сигар, которые зажигают и тем самым прогревают активные
точки. Полынь Адамса для получения сигар собирали в фазу цветения, так как в
этот период происходит максимальное накопление биологически активных
веществ. Согласно рекомендациям Гаваа Л. «Очерки методов восточной
рефлексотерапии», собранное сырье высушивают в тени, затем высушенные
листья толкут и теребят с измельчителем, выбрасывая стебельки и прожильки,
остаются мелкие шелковистые волокна как бархат (так называемый полынный
бархат). Считается, что полынь должна храниться в сухом виде 3 года. По мнению
древневосточных врачей, «семилетняя болезнь вылечивается трехлетней
полынью» [Гаваа Л., 1991]. Приготовление полынных сигар: полынь заворачивают
в тонкую бумагу длиной 20 см и шириной 4 см. Бумагу туго сворачивают в
сигарету диаметром 1,2 см, края ее склейвают яичным белком. Определен состав
летучих веществ сигары из A. adamsii herba. Доминирующими компонентами
дыма сигар являются характерные соединения для эфирного масла A. adamsii
herba – это камфора от 52,0% до 55,72%, камфен от 7,14% до 12,15%, лимонен D
от 4,1% до 11,83%, 1,8-цинеол от 4,83% до 8,68%. Токсичных и канцерогенных
веществ в дыме не обнаружено.
Разработан способ получения настойки A. macrocephala herba: экстрагент –
70% спирт, степень измельчения сырья – 0,5мм, соотношение экстрагента и сырья
– 1:8, экстракция в течение 120 мин методом мацерации или настаиванием (при
постоянном встряхивании) в течение 5 суток. Полученная настойка A.
macrocephala herba представляет собой прозрачную жидкость коричневого цвета с
характерным запахом, горького, слегка вяжущего вкуса. В настойке определены:
аскорбиновая кислота, флавоноиды, кумарины. Методом ТСХ обнаружены
лютеолин-7-глюкозид (Rf = 0,75, коричневого цвета).
Количественное определение суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-
7-глюкозид составило 0,60±0,01% (УФ-спектрофотометрии, таблица 4).
Таблица 7 – Метрологические характеристики методики количественного
определения суммы флавоноидов в A. macrocephalae herbaе tinctura
NХср, %SS2P, %t (P,t)∆XE,%
50.600.010.0001952.770.014,51
Рекомендуемая норма содержания суммы флавоноидов в A. macrocephalae
herbaе tinctura – не менее 0,50%.
Выявлено, что полученная настойка соответствует требованиям по
показателю «микробиологическая чистота» ГФ XIV, ОФС.1.2.4.0002.15.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. Установлены анатомо-диагностические признаки A. adamsii herba: клетки
нижнего эпидермиса сильноизвилистые, верхнего – слабоизвилистые, тип
устьичного аппарата – аномоцитный, встречаются Т-образные волоски и
эфирномасличные железки ярусного типа; для A. macrocephala herba характерны
клетки нижнего эпидермиса сильноизвилистые, верхнего – прямостенные,
местами слабоизвилистые, тип устьичного аппарата – аномоцитный, Т-образные и
одноклеточные бичевидные волоски, эфирномасличные железки ярусного типа.
Определены их урожайность – A. adamsii в трех конкретных зарослях составляет
от 76,67±10,63 г/м2 до 118,58±9,93 г/м2 в районах Республики Бурятии и аймаках
Монголии, а A. macrocephala herba, произрастающей в аймаках Монголии, на двух
конкретных зарослях составляет от 105,16±14,97 до 116,75±15,76 г/м2.
2. Установлено содержание флавоноидов, жирных кислот, макро- и
микроэлементов в A. adamsii herba и A. macrocephala herba: в A. adamsii herba
обнаружены лютеолин и скополетин, а в A. macrocephala herba – лютеолин-7-
глюкозид и рутин; основными жирными кислотами в A. adamsii herba являются
пальмитиновая (11,78 – 20,62%), линолевая (16,48 – 22,21%), линоленовая (24,12 –
27,56%), а в A. macrocephala herba –пальмитиновая (16,50 – 17,25%), линолевая
(16,59-17,34%), α-линоленовая (24,91-26,04%).
3. Константными компонентами A. adamsii herba являются камфора (8,70 –
48,44 %), 1,8 цинеол (0,70 – 41,71 %), камфен (0,55% – 16,6 %), терпинеол-4 (1,10 –
9,02%), о-цимен (0,49 – 9,02%), α-терпинеол (0,60 – 4,11 %), α-бисаболол (0,59 –
17,34 %), спатуленол (0,90 – 10,58 %), бициклогермакрен (1,88 – 11,06%), а
основным компонентом эфирного масла A. macrocephala herba является хамазулен
с содержанием от 8,30 до 20,46%.
4. Проведена стандартизация лекарственного растительного сырья A. adamsii
herba и A. macrocephala herba. Разработана методика количественного
определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин в A. adamsii herba.
Подобраны оптимальные условия извлечения суммы флавоноидов из A. adamsii
herba: экстрагент – этанол 70% с 1% HCl , степень измельчения – 0,25 мм,
соотношение сырья и экстрагента – 1:50, экстракция в течение 30 минут.
Установлена норма не менее 0,70%. Оптимальными условиями извлечения суммы
флавоноидов из A. macrocephala herba являются: экстрагент – этанол 70%, степень
измельчения – 0,25 мм, соотношение сырья и экстрагента 1:100, экстракция с
обратным холодильником в течение 1 часа. Установлена норма не менее 1,50%.
5. Разработаны и предложены способы получения А. macrocephalae herbae
tinctura и полынных сигар на основе A. adamsii herba, созданы и утверждены
проекты ФС «Artemisiae adamsii herba», ФС «Artemisiae macrocephalae herba»,
ФСП «Аrtemisiae macrocephalae herbae tinctura», инструкция по изготовлению
полынных сигар на основе A. аdamsii herba.

Благодарности
Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю, зав.
кафедрой фармации Медицинского института, зав. лабораторией химии
природных систем, д.х.н.,профессору Раднаевой Ларисе Доржиевне за
руководство диссертационным исследованием, особую благодарность автор
выражает к.фарм.н. Рандаловой Туяне Эрдэмовне за всестроннюю поддержку, а
также коллективам кафедры фармации Медицинского института БГУ и
Монгольскогоуниверситета фармацевтических наук, лаборатории химии
природных систем БИП СО РАН за профессиональную помощь.