«Исследование отдельных показателей качества лекарственного растительного сырья различных морфологических групп»

Объекты и методы исследования
Объектами диссертационного исследования явились образцы 23 фармакопейных видов
воздушно-сухого ЛРС 7 различных морфологических групп, заготовленные на территориях
Самарской, Оренбургской и Воронежской областей, Краснодарского края, Республики Марий Эл
и Чувашской Республики в период с 2017 по 2020 гг., а также промышленные образцы в виде ЛРП
различных производителей и серий.
В рамках диссертационной работы также исследованы водные и водно-спиртовые (70 % и
96 % этиловый спирт) извлечения из плодов шиповника, цветков пижмы обыкновенной и травы
зверобоя с использованием стандартных образцов (СО) и рабочих стандартных образцов (РСО),
полученных на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии ФГБОУ ВО
СамГМУ Минздрава России: аскорбиновой кислоты, рутина, лютеолина, цинарозида, тилианина,
акацетина и гиперицина.
Морфолого-анатомические методы использованы для подтверждения подлинности
заготовленных образцов ЛРС. Микроскопический анализ проводили в проходящем свете на белом
поле с помощью микроскопов Motic DM-39C-N9GO-A и DM-111 (Польша).
Определение влажности ЛРС проводили параллельно двумя способами: фармакопейным
способом – воздушно-тепловым (ВТ) с использованием сушильных шкафов (СШ) с температурой
нагрева 100-105 °C (электрический круглый 2В-15 (СССР), ШС-80-01МК СПУ (Россия)) и
инфракрасным термогравиметрическим (ИК ТГ) способом с использованием автоматических
анализаторов влажности c задаваемой температурой нагрева 103 °C (Sartorius MA-150, Sartorius
MA-35 (Германия), ViBRA MD-83 (Япония)).
Для количественного определения кислоты аскорбиновой в водных извлечениях плодов
шиповника применяли методы титриметрического анализа, основанные на восстановительных
свойствах кислоты аскорбиновой: индофенольный и йодатометрический.
Метод ТСХ применяли с целью определения основных групп БАВ и использовали
пластины марки Sorbfil типа ПТСХ-АФ-А-УФ (Россия). ВЭЖХ-анализ проводили с целью
качественного анализа аскорбиновой кислоты в водных извлечениях плодов шиповника на
жидкостном микроколоночном хроматографе «Милихром-6» с УФ-спектрофотометрическим
детектором (Россия).
Методы прямой и дифференциальной спектрофотометрии использованы для исследования
образцов водных и водно-спиртовых извлечений из шиповника плодов, пижмы обыкновенной
цветков и зверобоя травы. Анализ проведен на спектрофотометрах Specord 40 (Германия) и СФ-
2000 (Россия) в кварцевых кюветах с толщиной светопоглощающего слоя 10 мм в диапазоне длин
волн от 190 до 600 нм.
Статистическую обработку полученных данных проводили методами вариационной
статистики с оценкой однородности выборок, расчетом среднего значения ( ̅ ), дисперсии ( 2 ),
стандартного отклонения ( ), полуширины доверительного интервала (∆ ) и относительной
ошибки результата среднего определения ( ̅). Сравнение выборочных средних значений
проводили с помощью t-критерия Стьюдента с тестом Левина для оценки однородности
дисперсий. Величину уровня значимости (p) для t-критерия Стьюдента и теста Левина
устанавливали равной 0,05. Статистический анализ проведен в соответствии с требованиями
ОФС.1.1.0013.15 «Статистическая обработка результатов химического эксперимента» ГФ РФ XIV
издания с использованием программ STATISTICA 10.0 (USA) и ChemMetr 1.0
Валидационная оценка разработанных методик определения влажности ЛРС способом ИК
ТГ проведена в соответствии с требованиями ОФС.1.1.0012.15 «Валидация аналитических
методик» ГФ РФ XIV издания.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Исследования по разработке методик определения влажности воздушно-сухого
лекарственного растительного сырья инфракрасным термогравиметрическим способом
Диссертационное исследование выполнено с использованием автоматического ИК ТГ
анализатора влажности с керамическим нагревательным элементом Sartorius MA-150.
Важным условием прецизионного анализа является температура окружающей среды,
которая, по нашим данным, должна находиться в пределах 23±3 °С при стандартной влажности
воздуха (50-60 %).
Ежедневно, после калибровки весоизмерительной системы, прибор выводили «на режим»
путем высушивания отработанной навески ЛРС (холостой пробы). Нами определено, что
результат анализа после первого включения или длительного простоя в режиме ожидания всегда
завышен, поэтому для прецизионных измерений не следует допускать более длительных
временных затрат, чем требуется для остывания нагревательного блока до температуры
окружающей среды (23±3 °С). Несмотря на наличие запрограммированного режима
предварительно прогрева с поддержанием постоянной температуры внутри сушильной камеры
(минимально задаваемое значение – +40 °C), холостая проба предпочтительнее, так как более
высокая температура внутри сушильной камеры будет стимулировать высушивание уже на этапе
распределения навески ЛРС, что особенно критично для эфиромасличного сырья, когда потеря
веса регистрируется прибором начиная с 27 °С.
Первым этапом разработки методик был предварительный отбор значений степеней
измельчения ЛРС, который основывался, в первую очередь, на требованиях к степени
измельчения следующих разделов соответствующих ФС: «Определение основных групп
биологически активных веществ» и «Количественное определение». Кроме того, в обязательном
порядке нами учтены требования ФС в разделе «Измельчённость сырья». Второй этап заключался
в выборе оптимальной навески анализируемой пробы измельчённого ЛРС. Критерием выбора
минимально допустимой массы навески служило полное и равномерное покрытие измельчённой
пробой всей площади поверхности дна алюминиевой кюветы. Максимально допустимую массу
навески определяли нахождением баланса между воспроизводимостью и условной
достоверностью величины показателя влажности, а также временем, затраченным на анализ.
Обзор литературных данных, а также изучение методических рекомендаций показали, что
главным недостатком является тот факт, что ИК ТГ методики не разработаны для оценки качества
именно ЛРС, использующегося в фармации и медицине.
С целью разработки алгоритма определения влажности ИК ТГ способом воздушно-сухого
ЛРС нами на примере плодов расторопши пятнистой (Silybi mariani fructus) исследованы
различные комбинации степеней измельчения (0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 мм) и навесок (≈ 2,0; 3,0; 5,0;
10,0; 12,0; 15,0 г). В результате установлены оптимальные значения степени измельчения (2-3 мм)
и массы навески (10,0±1,0 г) для определения влажности ИК ТГ способом. Сравнительная
метрологическая оценка полученных результатов определения влажности при оптимальных
параметрах степени измельчения и массы навески, а также при фармакопейных значениях массы
навески в случае ВТ и ИК ТГ способов представлена в таблице 1.

Таблица 1 – Сравнительная метрологическая оценка результатов определения влажности
плодов расторопши пятнистой
Доверительный интервал
Способ (навеска, г) nХS²S
-95,00%+95,00%
ВТ (3-5)7 5,48 0,0034 0,05870,03780,12930,0222
ИК ТГ (10,0±1,0)7 5,72 0,0022 0,04680,03020,10310,0177
ИК ТГ (3-5)7 5,40 0,0086 0,09260,05970,20400,0350

Показано, что результаты определения влажности двумя способами сопоставимы (5,48 % и
5,40 %). Наименьшая ошибка среднего определения составила 0,0177 % для ИК ТГ влагомера с
массой навески плодов расторопши 10,0±1,0 г и влажностью 5,72 %.
Следовательно, при разработке методик определения влажности ЛРС способом ИК ТГ
необходимо использовать алгоритм, заключающийся в предварительном отборе степеней
измельчения и навесок. При определении влажности плодов семейства Сельдерейных (Apiaceae)
нами выявлены следующие особенности: анатомическое строение, химический состав и удельный
вес эфиромасличных плодов, поэтому разработку методик необходимо проводить с учётом
специфических особенностей конкретного вида ЛРС.
На наш взгляд, метрологическую оценку результатов определения влажности плодов
семейства Сельдерейных (Apiaceae) целесообразно привести на примере одного эфиромасличного
вида – плодов фенхеля обыкновенного (Foeniculi vulgaris fructus) со степенью измельчения 1,0 мм
(таблица 2).
Таблица 2 – Сравнительная метрологическая оценка результатов определения влажности
плодов фенхеля обыкновенного

Доверительный интервал
Способ (навеска, г)ХS²S
-95,00%+95,00%
ВТ (3-5)9,450,00120,03420,02200,07520,0129
ИК ТГ (4,5±0,5)10,950,00090,02970,01910,06540,0112
ИК ТГ (10,0±1,0)10,110,05270,22960,14800,50570,0868
ИК ТГ (1-2)8,300,32900,57360,36961,26320,2168

Из представленных данных видно, что наименьшая ошибка среднего определения (0,0112 %)
наблюдается при навеске 4,5±0,5 г. Показатель влажности в данной подгруппе выше (10,95 %),
чем показатель, полученный ВТ способом.
Оценим однородность дисперсий с последующим сравнением выборочных средних
результатов определения влажности плодов фенхеля обыкновенного с помощью t-критерия
Стьюдента и теста Левина (таблица 3).

Таблица 3 – Результаты сравнительного анализа выборочных средних значений влажности
плодов фенхеля обыкновенного
СпособЧислоКритерийУровеньКритерийp-
(навеска, г)степеней СтьюдентазначимостиЛевинаЛевина
свободы(t)(p)(F)
(f)
ВТ (3-5) и ИК ТГ (4,5±0,5)12-87,61970,0000000,56491 0,466773
ВТ (3-5) и ИК ТГ (10,0±1,0)12-7,57060,00000714,14205 0,002718
ВТ (3-5) и ИК ТГ (1-2)125,30140,0001889,16758 0,010509

В первую очередь следует обратить внимание на тест Левина. Уровень значимости
комбинации с навеской 4,5±0,5 г составил 0,466773>0,05 и, следовательно, дисперсии в данных
подгруппах однородны и использование критерия Стьюдента правомерно. Значения критерия
Стьюдента составили 87,6197, 7,5706 и 5,3014 для навесок 4,5±0,5 г, 10,0±1,0 г и 1-2 г
соответственно, что намного больше критического значения (2,18) при доверительной
вероятности 95 % и f=12. Так как разница между выборками статистически значима, то выборки
мы не можем считать принадлежащими одной генеральной совокупности. Уровни значимости
критерия Стьюдента для всех навесок составили p<0,05. Следовательно, в данном случае оптимальна навеска 4,5±0,5 г, так как тест Левина, в отличие от других навесок, не имеет статистическую значимость, а величины дисперсии, стандартного отклонения и относительной погрешности значительно меньше. Таким образом, в результате проведенных исследований установлены оптимальные значения степеней измельчения и массы навесок для 23 видов фармакопейных представителей воздушно-сухого ЛРС 7 морфологических групп (корни, коры, листья, плоды, семена, травы, цветки) для определения влажности ИК ТГ способом с помощью автоматического анализатора влажности с керамическим нагревательным элементом (таблица 4). Таблица 4 – Оптимальные значения степеней измельчения и массы навесок воздушно- сухого ЛРС для определения влажности ИК ТГ способом с использованием анализатора влажности с керамическим нагревательным элементом Степень №Номер ФС ГФ Видизмельче Навеска, г п/п РФ XIV издания ния, мм 1ФС.2.5.0001.15 Алтея корни (Althaeae radices)2≈3 Аниса обыкновенного плоды (Anisi vulgaris 2ФС.2.5.0057.1814,5±0,5 fructus) 3ФС.2.5.0005.15 Берёзы листья (Betulae folia)2≈2 Девясила высокого корневища и корни (Inulae 4ФС.2.5.0070.181≈ 2,5 helenii rhizomata et radices) 5ФС.2.5.0071.18 Дуба кора (Quercus cortex)1≈2 Душицы обыкновенной трава (Origani 6ФС.2.5.0012.151≈2 vulgaris herba) 7ФС.2.5.0015.15 Зверобоя трава (Hyperici herba)1≈2 Календулы лекарственной цветки (Calendulae 8ФС.2.5.0030.150,5≈2 officinalis flores) Кориандра посевного плоды (Coriandri sativi 9ФС.2.5.0018.1514,5±0,5 fructus) Крушины ольховидной кора (Frangulae alni 10ФС.2.5.0021.181≈2 cortex) 11ФС.2.5.0024.15 Липы цветки (Tiliae flores)1≈1 Льна посевного семена (Lini usitatissimi 12ФС.2.5.0026.152≈5 semina) Мяты перечной листья (Menthae piperitae 13ФС.2.5.0029.152≈ 1,5 folia) Пижмы обыкновенной цветки (Tanaceti 14ФС.2.5.0031.151≈ 2,5 vulgaris flores) Подорожника большого листья (Plantaginis 15ФС.2.5.0032.151≈ 1,5 majoris folia) Расторопши пятнистой плоды (Silybi mariani 16ФС.2.5.0035.152-310,0±1,0 fructus) Ромашки аптечной цветки (Chamomillae 17ФС.2.5.0037.152≈ 1,5 recutita flores) 18ФС.2.5.0040.15 Солодки корни (Glycyrrhizae radices)0,2≈1 Тмина обыкновенного плоды (Cari carvi 19ФС.2.5.0098.1814,5±0,5 fructus) Укропа пахучего плоды (Anethi graveolentis 20ФС.2.5.0043.1514,5±0,5 fructus) Фенхеля обыкновенного плоды (Foeniculi 21ФС.2.5.0102.1814,5±0,5 vulgaris fructus) 22ФС.2.5.0106.18 Шиповника плоды (Rosae fructus)5≈5 Эхинацеи пурпурной трава (Echinaceae 23ФС.2.5.0055.150,5≈1 purpureae herba) При этом определено, что ИК ТГ способ нецелесообразно использовать для определения влажности некоторых видов ЛРС морфологической группы «Почки» (берёзы и тополя), так как высокое содержание смолистых веществ приводит к спеканию частиц навески аналитической пробы между собой и с поверхностью кюветы, что препятствует нормальному испарению влаги. Определение влажности некоторых видов свежего ЛРС, в частности, сочных плодов (боярышника и шиповника) оказалось пока невозможным в связи с программным ограничением настроек ИК ТГ анализатора из-за продолжительности анализа. 2. Актуальные аспекты контроля качества и стандартизации отдельных видов лекарственного растительного сырья Исследования по определению оптимальных параметров подготовки проб воздушно-сухого ЛРС и разработке методик определения влажности ИК ТГ способом положили начало новому этапу обсуждения актуальных вопросов контроля качества некоторых видов ЛРС, содержащих флавоноиды: шиповника плодов, пижмы обыкновенной цветков и зверобоя травы. На наш взгляд, методологические и методические подходы, представленные в ГФ РФ XIV издания, достаточно противоречивы и не отвечают в полной мере современным тенденциям фармацевтического анализа ЛРС, несмотря на глубоко изученный химический профиль вышеуказанных видов. 2.1. Шиповника плоды (Rosae fructus) Результаты хроматографического разделения в тонком слое (рисунок 1) водных и водно- спиртовых извлечений из плодов шиповника показали возможность одновременной идентификации аскорбиновой кислоты и флавоноидов в данном виде ЛРС. Однако аскорбиновую кислоту в плодах низковитаминных видов обнаружить не удалось, что соответствует литературным данным (Вершинина В.В., Куркин В.А., 2011). Рисунок 1 – Хроматограмма извлечений из плодов шиповника в системе растворителей н-бутанол-уксусная кислота ледяная-вода очищенная (4:1:2): I – водное извлечение, детекция при дневном свете после обработки 0,044 % раствором натрия 2,6-дихлорфенолиндофенолята; II – водно-спиртовое извлечение, детекция в УФ-свете при длине волны 254 нм Обозначения: 1-7 – извлечения из образцов плодов шиповника; ASC – аскорбиновая кислота, RUT – рутин Разработка методики качественного анализа аскорбиновой кислоты в низковитаминных видах шиповника плодов методом УФ/Вид-спектроскопии В связи с тем, что чувствительность метода ТСХ не позволяет обнаружить аскорбиновую кислоту в плодах низковитаминных видов секции шиповников (Caninae Crep.), очевидна необходимостьиспользованияинструментальныхметодованализа.Кнаиболее распространённым, доступным и экспрессным методам относится УФ/Вид-спектроскопия. Сущность разработанного способа заключается в твердофазной экстракции водного извлечения на полиамиде для очистки от фенольных соединений и сопутствующих веществ. Оценка подлинности плодов шиповника проводится следующим образом: около 1,0 г измельченных плодов шиповника, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм, помещают в коническую колбу на 100 мл, прибавляют 30 мл воды очищенной и настаивают в течение 15 минут, периодически встряхивая. Извлечение фильтруют во флакон тёмного стекла через бумажный складчатый фильтр (раствор А). Твердофазную экстракцию раствора А проводят на полиамиде (около 1,0 г) в стеклянном фильтре, отбрасывая первые порции. 1,0 мл полученного аналита переносят в мерную колбу на 100 мл, доводят до метки водой очищенной и перемешивают. Оптическую плотность полученного раствора измеряют на спектрофотометре в диапазоне длин волн 190-500 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную. При изучении спектров поглощения водных извлечений из всех исследуемых образцов плодов шиповника после твердофазной экстракции на полиамиде обнаруживается характерный для аскорбиновой кислоты максимум поглощения при длине волны λ max=264±2 нм (рисунок 2), что может служить подтверждением подлинности ЛРС «Шиповника плоды». Рисунок 2 – Спектры поглощения водных извлечений из плодов шиповника Обозначения: 1 – раствор извлечения до твердофазной экстракции на полиамиде; 2 – раствор извлечения после твердофазной экстракции на полиамиде Определение аскорбиновой кислоты в низковитаминных видах шиповника плодов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии В качестве подвижной фазы для проведения ВЭЖХ-анализа была выбрана система ацетонитрил-вода в соотношении 1:9. Сравнение значений времени удерживания пиков на ВЭЖХ- хроматограмме извлечения плодов шиповника (2,133 мин) и времени удерживания пика РСО аскорбиновой кислоты (2,016 мин) при длине волны 266 нм позволило идентифицировать наличие аскорбиновой кислоты в ЛРС «Шиповника плоды». 2.2. Пижмы обыкновенной цветки (Tanaceti vulgaris flores) С целью обоснования нецелесообразности использования лютеолина в качестве СО методом ТСХ нами проанализированы водно-спиртовые излечения ЛРС «Пижмы обыкновенной цветки». Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии в извлечениях лютеолина и подтверждают тот факт, что доминирующим флавоноидом является тилианин со значением Rf ≈ 0,7. Кроме того, обнаруживаются цинарозид (Rf ≈ 0,6), акацетин (Rf ≈ 0,9) и соединения, по характеру флуоресценции, предположительно, фенилпропаноидной структуры со значениями Rf ≈ 0,8 и 0,15 (рисунок 3). Рисунок 3 – Хроматограмма водно-спиртового извлечения цветков пижмы обыкновенной в системе растворителей хлороформ-этанол 96 %-вода очищенная (25:18:2): А – детекция в УФ-свете при длине волны 365 нм; Б – детекция в УФ-свете при длине волны 365 нм после обработки спиртовым раствором алюминия (III) хлорида 3 % Обозначения: 1 – извлечение; 2 – СО лютеолина, 3 – СО цинарозида, 4 – РСО тилианина, 5 – РСО акацетина В случае отсутствия РСО тилианина возможно использовать СО цинарозида, но с уточнением значения Rst тилианина с величиной – около 1,2 относительно зоны адсорбции цинарозида. Кроме того, цинарозид, на наш взгляд, целесообразно использовать и для оценки количественного содержания суммы флавоноидов, так как в цветках пижмы обыкновенной преобладают флавоноидные гликозиды. Анализ раствора цинарозида методом дифференциальной УФ/Вид-спектроскопии с алюминия (III) хлоридом показал, что дифференциальный спектр поглощения имеет аналогичный максимум поглощения при 400 нм, что и дифференциальный спектр водно-спиртового извлечения из цветков пижмы обыкновенной с алюминия (III) хлоридом (рисунки 4-7). Рисунок 4 – Спектры поглощения водно-Рисунок 5 – Спектр поглощения водно- спиртового излечения из пижмыспиртового излечения из пижмы обыкновенной цветков. Обозначения: 1 –обыкновенной цветков раствор извлечения; 2 – раствор извлечения в(дифференциальный вариант) присутствии алюминия (III) хлорида Рисунок 6 – Спектры поглощения спиртовогоРисунок 7 – Спектры поглощения раствора цинарозида. Обозначения: 1 –спиртового раствора цинарозида исходный раствор; 2 – раствор в присутствии(дифференциальный вариант) алюминия (III) хлорида С использованием методики (Куркина А.В., Хусаинова А.И., 2010) при аналитической длине волны 400 нм нами количественно проанализирован ряд образцов цветков пижмы обыкновенной методом дифференциальной спектрофотометрии по содержанию суммы флавоноидов в пересчёте на цинарозид. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид в различных образцах цветков пижмы обыкновенной составило в пределах от 1,73 % до 2,44 %, что даёт основание предложить числовой показатель нижнего предела содержания флавоноидов в пересчете на цинарозид – не менее 1,7 %, в отличие от фармакопейного показателя – 2,5 %. Таким образом, использование лютеолина для целей определения подлинности и количественной оценки содержания флавоноидов в ЛРС «Пижмы обыкновенной цветки», как это имеет место в случае фармакопейных методик, нецелесообразно по двум причинам: 1) данное соединение агликоновой природы практически не обнаруживается; 2) в цветках пижмы обыкновенной преобладают флавоноидные гликозиды (тилианин и др.), обусловливающие спектральные характеристики, по характеру близкие к таковым цинарозида. 2.3. Зверобоя трава (Hyperici herba) При изучении ЛРП «Зверобоя трава» (образец № 5) обнаружено, что он представлен в основном стеблями – более 70 %, при допустимой норме – не более 50 %. Следовательно, образец № 5 не отвечает требованиям ФС.2.5.0015.15 «Зверобоя трава» ГФ РФ XIV издания по показателю «Посторонние примеси». В ходе подготовки водно-спиртовых извлечений из образцов травы зверобоя наблюдается интересная особенность – различный цвет. Спиртовое извлечение из заготовленной нами травы зверобоя (образец № 3) имеет насыщенный ярко-красный цвет в отличие от извлечения из ЛРП (образец № 5) – жёлто-зелёного цвета. Результаты количественного определения суммы флавоноидов в пересчёте на рутин свидетельствуют о формальном соответствии по данному показателю образца № 5: содержание составило 3,20±0,04 % при нижнем пределе содержания – не менее 1,5 %. Кроме того, анализируя спектры поглощения спиртового извлечения из образца № 3, заготовленного нами, отчетливо виден максимум поглощения при длине волны 591 нм, обусловленный антраценпроизводными, тогда как в образце № 5 данный максимум не наблюдается (рисунки 8 и 9). Рисунок 8 - Спектры поглощения водно-Рисунок 9 - Спектры поглощения водно- спиртового извлечения из зверобоя травы.спиртового извлечения из зверобоя травы. Обозначения: 1 – раствор извлечения изОбозначения: 1 – раствор извлечения из образца образца № 3; 2 – раствор извлечения из образца № 5; 2 – раствор извлечения из образца № 5 в № 3 в присутствии алюминия (III) хлоридаприсутствии алюминия (III) хлорида На наш взгляд, это связано с тем обстоятельством, что в образце № 5 низкий удельный вес цветков, в которых преимущественно накапливаются антраценпроизводные (гиперицин и псевдогиперицин). Учитывая тот факт, что антраценпроизводные наряду с флавоноидами обусловливают антидеперессантную активность, представляется целесообразным стандартизация по двум группам действующих веществ – флавоноидам и антраценпроизводным. Нами проанализирована серия образцов травы зверобоя, где содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин составило от 0,04 % до 0,51 %. На наш взгляд, оптимальным значением нижнего предела содержания антраценпроизводных будет – не менее 0,1 %, при этом следует подчеркнуть, что образец № 5 с низким содержанием суммы антраценпроизводных (0,04 %) не отвечает требованиям ФС ГФ РФ по показателю «Посторонние примеси». 3. Изменения и дополнения, предлагаемые в отдельные общие и частные фармакопейные статьи на лекарственное растительное сырье В результате проведённого исследования отдельных показателей качества ЛРС различных морфологических групп научно обоснованы изменения в ОФС.1.1.0005.15 «Отбор проб лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов» и изменения и дополнения в ОФС.1.5.3.0007.15 «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов», а также отдельные дополнения в частные ФС на исследованные виды воздушно-сухого ЛРС. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, проведенное исследование отдельных показателей качества ЛРС различных морфологических групп позволило сделать следующие общие выводы: 1.Установлено, что инфракрасный термогравиметрический (ИК ТГ) способ может быть использован для определения влажности 7 морфологических групп воздушно-сухого ЛРС: корней, коры, листьев, плодов, семян, травы и цветков. При этом определено, что способ ИК ТГ нецелесообразно использовать для определения влажности некоторых видов ЛРС морфологической группы «Почки», так как высокое содержание смолистых веществ приводит к спеканию частиц аналитической пробы между собой и с поверхностью кюветы, что препятствует испарению влаги. Определение влажности некоторых видов свежего ЛРС, в частности сочных плодов, невозможно в связи с программным ограничением настроек ИК ТГ анализатора. 2.Определены оптимальные параметры подготовки проб (степень измельчения и масса навески) 23 фармакопейных видов воздушно-сухого ЛРС 7 различных морфологических групп: алтея корни (Althaeae radices); аниса обыкновенного плоды (Anisi vulgaris fructus); берёзы листья (Betulae folia); девясила высокого корневища и корни (Inulae helenii rhizomata et radices); дуба кора (Quercus cortex); душицы обыкновенной трава (Origani vulgaris herba); зверобоя трава (Hyperici herba); календулы лекарственной цветки (Calendulae officinalis flores); кориандра посевного плоды (Coriandri sativi fructus); крушины ольховидной кора (Frangulae alni cortex); липы цветки (Tiliae flores); льна посевного семена (Lini usitatissimi semina); мяты перечной листья (Menthae piperitae folia); пижмы обыкновенной цветки (Tanaceti vulgaris flores); подорожника большого листья (Plantaginis majoris folia); расторопши пятнистой плоды (Silybi mariani fructus); ромашки аптечной цветки (Chamomillae recutita flores); солодки корни (Glycyrrhizae radices); тмина обыкновенного плоды (Cari carvi fructus); укропа пахучего плоды (Anethi graveolentis fructus); фенхеля обыкновенного плоды (Foeniculi vulgaris fructus); шиповника плоды (Rosae fructus); эхинацеи пурпурной трава (Echinaceae purpureae herba). 3.Разработаны методики определения влажности 23 фармакопейных видов воздушно- сухого ЛРС 7 различных морфологических групп ИК ТГ способом с использованием автоматического анализатора влажности с керамическим нагревательным элементом, заключающиеся в указании оптимальных параметров степени измельчения и массы навески, режима анализа: автоматический режим, температура сушильной камеры – 103 °С без предварительногопрогрева,ежедневнаякалибровкаспоследующейюстировкой весоизмерительной системы, проведение холостой пробы и остывание прибора до температуры 23±3 °С, распределение подготовленной аналитической пробы равномерным слоем по всей поверхности дна металлической кюветы. Внедрение ИК ТГ методик позволит значительно сократить трудо- и энергозатраты, продолжительность и погрешность определения. 4.Проведена сравнительная метрологическая оценка методик определения влажности воздушно-тепловым (фармакопейным) способом и ИК ТГ способом с помощью автоматического анализатора с керамическим нагревательным элементом. Установлено, что величины дисперсии, стандартного отклонения и относительной погрешности ИК ТГ методик, как правило, не превышают величин, рассчитанных в результате валидационной оценки фармакопейной методики. 5.Обоснована целесообразность определения аскорбиновой кислоты методом ТСХ только для плодов шиповника, использующихся для получения высоковитаминных лекарственных препаратов. С учетом значимости флавоноидов в плане проявления желчегонного эффекта обосновано введение нового числового показателя при определении ведущих групп БАВ методом ТСХ – наличие веществ флавоноидной природы с использованием СО рутина. 6.Предложены методические подходы к идентификации аскорбиновой кислоты в водных извлечениях плодов шиповника. Величины максимумов поглощения аскорбиновой кислоты в водном извлечении составили 242 нм и 264 нм для ионизированной и молекулярной форм соответственно. Разработана методика качественного обнаружения аскорбиновой кислоты в водных извлечениях плодов шиповника методом спектрофотометрии при λ max=264±2 нм с предварительной твердофазной экстракцией водного извлечения на слое полиамида. Предложены условия разделения методом ВЭЖХ: изократический режим; состав подвижной фазы – смесь ацетонитрила и воды в соотношении 1:9; объем пробы – 3 мкл; сорбент – Сепарон-C18; поток – 100 мкл/мин. 7.Показана объективность использования СО цинарозида и рабочего стандартного образца тилианина (доминирующего флавоноидного гликозида цветков пижмы обыкновенной) для подтверждения наличия ведущей группы БАВ – флавоноидов, а также их количественной оценки. Уточнена величина числового показателя содержания флавоноидов в пересчете на цинарозид в цветках пижмы обыкновенной – не менее 1,7 %. 8.Доказана необходимость внедрения нового числового показателя для травы зверобоя – суммы антраценпроизводных в пересчете на гиперицин (не менее 0,1 %). Установлено, что в качестве визуального признака доброкачественности данного вида может служить цвет водно- спиртового извлечения (ярко-красный). 9.Научно обоснованы изменения в ОФС.1.1.0005.15 «Отбор проб лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов», изменения и дополнения в ОФС.1.5.3.0007.15 «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов» ГФ РФ XIV издания: сокращено количество отбираемых аналитических проб путем объединения аналитических проб для определения влажности и золы и действующих веществ (аналитическая проба для определения влажности, содержания золы и действующих веществ). Наряду с воздушно-тепловым способом определения влажности добавлен ИК ТГ способ определения влажности воздушно-сухого ЛРС с использованием автоматического анализатора влажности с керамическим нагревательным элементом. Указаны основные требования к рабочему месту, настройке и работе с автоматическим анализатором, методика определения влажности. 10.Научно обоснованы предложения по внесению в частные фармакопейные статьи (пункт «Влажность» раздела «Испытания») на исследованные виды воздушно-сухого ЛРС, которые заключаются в уточнении параметров подготовки пробы для определения влажности ИК ТГ способом с использованием автоматического анализатора с керамическим нагревательным элементом, а также изменений касающихся фитохимического анализа плодов шиповника, пижмы обыкновенной цветков и зверобоя травы. Практические рекомендации. Разработанные методики определения влажности ИК ТГ способом с помощью автоматического анализатора влажности с керамическим нагревательным элементом и научно обоснованные подходы с установленными числовыми показателями содержания ведущих групп БАВ позволяют объективно оценить качество данных видов ЛРС, а также рекомендуются нами для включения в соответствующие статьи ГФ РФ. Результаты диссертационного исследования целесообразно использовать в учебном процессе, центрах контроля качества ЛС, а также отраслях промышленности, связанных с производством, хранением и переработкой лекарственного растительного сырья. Перспективы дальнейшей разработки темы. Продолжение исследований имеет научно- практическое значение, в первую очередь, для фармакогнозии и фармацевтической химии и заключается в экспериментально-аналитической работе по разработке ИК ТГ методик определения влажности для других видов и морфологических групп как воздушно-сухого, так и свежего ЛРС; разработке и совершенствовании объективных фармакопейных стандартов качества ЛРС и ЛРП, а также их унификации и гармонизации с мировыми фармакопейными стандартами.