Разработка методики определения ртути методом инверсионной вольтамперометрии в лекарственных средствах

Образцы исследуемых ЛВ: субстанция протамина
сульфат (Производитель Biochemcorporation, Япония); раствор для внутривенного введения «Протамина сульфат» с концентрацией 10 мг/мл (Производитель ОАО «Новосибхимфарм», Новосибирск). Лекарственные препараты: Диклофенак («Диклофенак») – раствор для в/м введения 25 мг/мл; Ибупрофен («Ибупрофен») – суспензия для внутреннего применения 100 мг/5мл; Мелоксикам («Артрозан») – раствор для в/м введения 6 мг/мл; Дротаверина гидрохлорид («Но-шпа») – раствор для в/в и в/м введения 20 мг/мл; «Алфлутоп» – раствор для инъекций; Карведилол («Карведилол») – таблетки 25 мг; Лизатов бактерий смесь [S.pneumoniae, type I, II, III, V, VIII, XII + Haemophilusinfluenzae, type B + Klebsiellapneumoniaesspneumoniae + Staphylococcusaureusssaureus + Acinetobactercalcoaceticus + Moraxellacatarrhalis + Neisseriasubflava + Neisseriaperflava + S.pyogenesgroup A + S.dysgalactiaegroup C + Enterococcusfaecium + Enterococcusfaecalis + S.group G]. («ИРС 19») – спрей назальный; Метамизол натрия («Анальгин») – раствор для в/в и в/м введения 500 мг/мл, «Актовегин» – раствор для инъекций 40 мг/мл; «Церебролизин» – раствор для инъекций 5 мл. Реактивы и оборудование: вода бидистиллированная, калия хлорид 1М, азотная кислота концентрированная (ч.д.а.), ГСО золота 10000 мг/л, ГСО ртути 1000 мг/л. Для разработки методики инверсионной вольтамперометрии использовали электрохимический анализатор ТА-4 (ООО НПП «Томьаналит», г. Томск) с программным обеспечением VALabТх в комплекте. Методы исследования: инверсионная вольтамперометрия, атомно-адсорбционная спектрометрия, рентген-флуоресцентный анализ, экстракционно-фотометрическое определение ртуть (II) – иона с дитизоном. Статистическая обработка данных проводилась в программе MSExcel.
Разработка методики определения примеси ртути в субстанции протамина сульфат методом инверсионной вольтамперометрии. Для определения примеси ртути в субстанции протамина сульфат методом ИВА были использованы золотоуглеродсодержащие электроды, аналогичные, как и в аттестованной методике определения ртути в питьевой воде. Для работы с этими электродами необходима подготовка и проверка на правильность воспроизведения результатов с раствором ГСО ртути.
8
Электроды считаются чистыми, если на вольтамперограммах фона отсутствуют пики ртути. (рисунок 1, а). Проверка работы золотоуглеродсодержащего электрода проводилась методом «введено-найдено». Перед проведением измерений сначала проводили отмывку электрохимической ячейки (стаканчиков и электродов). Отмывка проводилась при потенциале 0,75 В в течение 30 с при перемешивании с уровнем вибрации 6 Гц, повторяли 2-3 раза. Ячейка считалась чистой, если на вольтамперограмме отсутствовал пик ртути, затем добавляли 50 мкл раствора с концентрацией 0,1 мг/л ртути, приготовленного из раствора ГСО. Отмечали наличие пика ртути в пределах от 0,35-0,65В. (рисунок 1, б). В конце добавляли добавку – 50 мкл аттестованного раствора ртути 0,1 мг/л, сигнал увеличивался в два раза. Результаты проверки электрода приведены на рисунке 1, в.
а) б) в) Рисунок 1 – Проверка электрода методом «введено-найдено»: а) вольтамперограмма чистого фона (голубая линия), б) вольтамперограмма для пробы (синяя линия), в) вольтамперограмма
с добавкой (розовая линия)
На этапе растворения при потенциале 0,75 В в течение 10 с происходит
подготовка поверхности электрода. На этапе накопления при потенциале 0,6 В ртуть концентрируется на поверхности рабочего электрода в течение 60 с. Система выдерживается 5 с при потенциале 0,35 В, соответствующим началу развертки потенциала. Растворение концентрата ртути с поверхности электрода происходит при развертке потенциала от 0,35 В до 0,75 В со скоростью 40 мВ/с. Регистрируемый ток имеет вид пика. Для расчета использовали метод стандартных добавок. Программное
обеспечение прибора делает расчеты в автоматическом режиме. Если результаты
9

единичного анализа ртути перед началом измерений входят в интервал 0,0038-0,0063 мг/л — это значит, электроды готовы к работе и на них можно производить дальнейшие измерения исследуемой субстанции.
Для понимания специфичности работы золотоуглеродсодержащего электрода сделали снимки срезов, используя микроскоп МИКРО200-01. Для сравнения использовали чистый срез углеродсодержащего электрода, срез с накопленной пленкой золота, срез с накоплением раствора ртути и срез с накоплением протамина сульфат. Срезы смотрели при увеличениях в 50, 100 и 200 раз. Золото накапливалось точечно на поверхности углеродного электрода и данный электрод можно использовать в качестве рабочего электрода.
Определение параметров измерений ртути в протамине сульфат. Разработку методики начали с проверки определения примеси ртути в протамине сульфат (раствор для инъекций серии 50216) при стандартных параметрах измерений, применяемых для определения ртути в воде.
Измерения при стандартных условиях. После проверки электродов на работоспособность, провели исследование по определению ртути в протамине
сульфат при стандартных условиях. При добавлении пробы на вольтамперограммах пика ртути не наблюдали (рисунок 2). Очевидно, что при стандартных параметрах, пригодных для определения ртути в воде определить содержание ртути в протамине сульфат невозможно, поэтому проводился подбор оптимальных параметров, при которых был бы виден аналитический сигнал в виде пика.
Рисунок 2 – Вольтамперограмма протамина сульфат при
стандартных условиях (время накопления 60 с) Для установления оптимальных параметров определения ртути в пробе протамина сульфат параметры измерений для метода ИВА менялись поочередно – время растворения, время накопления, уровень вибрации на стадии растворения и стадии
накопления, время успокоения. Результаты изложены ниже.
Изменение значений времени растворения. Время растворения, необходимое для подготовки электрода к началу измерений изменялось с интервалом 5 с, начиная с 10 с до 25 с. Каждое измерение проводилось по 10 раз. Как показали исследования, среднее значение содержания ртути при времени растворения 10, 15, 20 и 25 с. составляет 0,00027±0,00003 мг/л. Увеличение времени растворения не влияет на определение ртути в пробе, установили оптимальное время растворения 10 с. Изменение уровня вибрации на стадии растворения. Измерения проводили, изменяя уровень вибрации от 6 до 9 Гц. Как показали исследования, среднее значение содержания ртути при уровнях вибрации 6, 7, 8 и 9 Гц составляет 0,00027±0,00003 мг/л. Следовательно, увеличение уровня вибрации на стадии растворения не влияет на определение ртути в пробе, установили оптимальный уровень вибрации – 6 Гц. Изменение времени накопления. Измерения проводили при времени накопления 20 с, 40 с, 60 с, 80 с, 100 с, 120 с, 140 с, 160 с. Проверяли влияние времени накопления в 10-и повторностях. Время растворения 10 с, уровень вибрации при растворении 6 Гц, время успокоения 5 с. При времени накопления 20 с, 40 с, 60 с. аналитического сигнала в виде пика не наблюдается, что позволяет сделать вывод, что этого времени накопления недостаточно. Результаты исследования зависимости содержания ртути от времени накопления приведены в таблице 1.
Таблица 1 – Содержание ртути в зависимости от времени накопления
Номер измерения
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Время накопления, с
20
40
60
80
100
120
140
160
180
Среднее значение содержания ртути, мг/л 0,00011 0,00020 0,00027 0,00049 0,00047 0,00045 0,00031 0,00028 0,00024
SR, стандартное отклонение
0,00004 0,00005 0,00004 0,00002 0,00005 0,00007 0,00005 0,00004 0,00005
Коэффициент вариации, %
36,6 25,0 14,8 4,5 10,6 15,5 16,1 14,3 20,8
По результатам исследования был посчитан коэффициент вариации. Все совокупности можно считать однородными, за исключением данных, полученных при времени накопления 20 с. По результатам исследования было выбрано оптимальное время накопления – 80 с.
Изменение уровня вибрации на стадии накопления. В анализаторе ТА-4 перемешивание анализируемого раствора происходит путем вибрации рабочего электрода. Уровень меняется от 1 до 9 Гц. Измерения проводили при уровне вибрации 6 и 9 Гц. При вибрации 9 Гц разбрызгивания анализируемого раствора не наблюдалось. Результаты исследования приведены на рисунке 3 и в таблице 2. Таблица 2 – Влияние уровня вибрации на содержание примеси ртути в протамине сульфат
Параметр
Содержание ртути при уровне вибрации
6 Гц, мг/л
Содержание ртути при уровне вибрации
9 Гц, мг/л
1-е измерение 2-е измерение 3-е измерение 4-е измерение 5-е измерение 6-е измерение 7-е измерение 8-е измерение 9-е измерение 10-е измерение Среднее значение, мг/л
Стандартное отклонение Коэффициент вариации, % Относительная ошибка, ɛ, %
0,00043 0,00047 0,00044 0,00051 0,00043 0,00050 0,00037 0,00049 0,00042 0,00048 0,00038 0,00047 0,00039 0,00051 0,00040 0,00049 0,00043 0,00048 0,00044 0,00050
0,000413 0,00049 0,0000245 0,0000144 6,25 3,04 0,000817 0,000471
Рисунок 3- Вольтамперограмма протамина сульфат при уровне вибрации 9 Гц на стадии накопления (время накопления 80 с).
Как видно из результатов, уровень вибрации повлиял на процесс накопления ртутина рабочем электроде. При вибрации 9 Гц аналитический сигнал увеличивается и точнее определяется содержание ртути в исследуемом растворе.
Изучение параметров скорости развѐртки. Проверили измерения при скорости развертки 30 мВ/с, 40 мВ/с, 50мВ/с и 60 мВ/с. Установили, что скорость развертки в 40 мВ/с – оптимальная величина для определения примеси ртути в растворе.
Таким образом, установили параметры, при которых определяется содержание примеси ртути в протамине сульфат. Время растворения – 10 с, уровень вибрации на стадии растворения – 6 Гц, время накопления – 80 с, уровень вибрации на стадии накопления – 9 Гц, время успокоения – 8 с.
Измерение при многократном внесении добавок стандарта. Для повышения точности эксперимента провели анализ с многократным внесением добавок стандарта. Установлено, что при добавлении 2-х и более добавок результат меняется незначительно. Для проведения анализа достаточно одной добавки.
Изучение влияния мешающих ионов. Проверили влияние ионов Cu2+, Pb2+, Fe2+, Cd2+, Zn2+ на содержание ртути в протамине сульфат. Результаты представлены ниже в таблице 3.Катионы тяжелых металлов не оказывают существенного влияния на результат измерения содержания ртути в протамине сульфат.
Таблица 3 – Количественное определение ртути в протамине сульфат с введением добавок мешающих ионов
Добавки ионов
Без добавок Cu2+ Pb2+ Fe2+ Zn2+ Cd2+
Среднее содержание ртути, мг/л
0,000633±0,00019 0,000606±0,00015 0,000661±0,00018 0,000651±0,00019 0,000686±0,00020 0,000658±0,00022
Проверка режимов развертки. Все определения проводили при постояннотоковой развертке, поскольку именно этот режим необходим для предварительного концентрирования определяемого металла на поверхности электрода. Проверили другие режимы развертки – квадратно-волновую, дифференциально-импульсную и ступенчатую. Поскольку при других видах развертки на вольтамперограммах отсутствовал аналитический сигнал, либо пик был слишком размыт, сделали заключение, что проверенные виды не пригодны для определения примеси ртути в протамине сульфат.
Определение ртути в образцах с предварительной пробоподготовкой. Провели определение ртути в образцах с предварительной пробоподготовкой. Использовали варианты подготовки проб протамина сульфат путем разбавления с водой и
классические методы осаждения белков. Из таблицы 4 видно, что для определения примеси ртути в протамине сульфат не требуется предварительная пробоподготовка. Таблица 4 – Содержание ртути в образцах протамина сульфат с различной пробоподготовкой
Вариант пробоподготовки Протамина сульфат с.10217 Разбавление водой 1:2 Разбавление водой 1:1
Осаждение солью вольфраматом натрия и серной кислотой (вариант 1) Осаждение солью вольфраматом натрия и серной кислотой (вариант 2) Осаждение солью ZnSO4 и щелочью (вариант 3)
Содержание ртути, мг/л 0,000423±0,00121 0,000417±0,00140 0,000420±0,00152
0,000462±0,00131
0,000459±0,00121 0,000533±0,00113
Определение ртути в субстанциях и растворах для инъекций протамина сульфат. Ртуть определяли в субстанциях серии 515091, 514111, 514061 и в растворах для инъекций протамина сульфат с концентрацией 10 мг/мл серии 10217, 50216, 40216. Результаты приведены на рисунке 4 и в таблице 5.
а) б) в)
Рисунок 4 – Определение содержания ртути в протамине сульфат:
а) – серия 10217, б) –серия 40216, в) – серия 50216
Образцы были предоставлены ОАО «Новосибхимфарм». Для исследования субстанции протамина сульфат готовили водные растворы с концентрацией 10 мг/мл. Каждая из серий проверялась на предмет содержания в ней ртути с применением разработанной методики. По результатам исследований можно сделать заключение, что качество субстанции протамина сульфат по показателю содержания ртути (не более 10 ppm) соответствует сопроводительному документу – сертификату анализа. В
14

серии 10217 содержание ртути составило 0,000414 мг/л, в серии 40216 – 0,000443 мг/л, в серии 50216 – 0,000487 мг/л. Полученные результаты соответствуют НД. Таблица 5 – Сравнительные результаты определения содержания ртути в субстанциях и растворах для инъекций разных серий
Проба
Субстанция протамина сульфат
Раствор для инъекций протамина сульфат, 10 мг/мл
Серия
Содержание ртути, мг/л (среднее значение)
515091 0,000472 514111 0,000432 514061 0,000411
10217 0,000414 50216 0,000487 40216 0,000443
Валидация методики определения ртути в субстанции протамина сульфат методом инверсионной вольтамперометрии. Проведена валидация методики по следующим параметрам: правильность, прецизионность, специфичность, линейность, предел количественного определения. Повторяемость методики была оценена по независимым 10-и результатам, полученным в одинаковых условиях в одной лаборатории. Относительное стандартное отклонение составило 0,000186. Коэффициент вариации составил 6,68%.
Внутрилабораторная прецизионность проверялась двумя аналитиками по результатам шести измерений. Полученные результаты представлены в таблице 8. Коэффициенты вариации у двух разных аналитиков составил 6,52 и 6,09 % соответственно. Значение t-критерия Стьюдента (t) = 0,01. Различия статистически не значимы (p = 0,994841). Полученные результаты удовлетворяют критериям приемлемости по показателю «Внутрилабораторная прецизионность».
Доказательство правильности и специфичности проводили путем сравнения результатов анализов реальных объектов, полученных одновременно с использованием валидируемой (ИВА) и другой, заведомо специфичной методики (ААС). Экстракционно-фотометрическое определение ртуть (II)-иона с дитизоном выполняли совместно с ОАО «Новосибхимфарм». Содержание примеси ртути в протамине сульфат (растворе для инъекций серии 40216) составило ≤ 0,08 мг/л.Показатели воспроизводимости не всегда удовлетворяли требованиям. Атомно- адсорбционный метод был выполнен в институте неорганической химии им.
А.В.Николаева (ИНХ СО РАН). Содержание примеси ртути в протамине сульфат (растворе для инъекций серии 40216) составило ≤ 0,5 мг/л.
Метрологическую характеристику метода проводили путем статистической обработки выборок, полученных при анализе образцов стандартного раствора ГСО ртути (μ = 0,1 мг/л). Измерения проводили на аттестованном растворе ртути с концентрацией 0,1 мг/л. Рассчитанный критерий Фишера составил 1,22, в то время как F(P, f1, f2) при доверительной вероятности 0,99 и заданных числах степеней свободы равно 10,97, что позволяет сделать вывод, что различие значений дисперсий незначимо. Расчетное значение критерия Стьюдента (t) составило 1,87 для метода ААС и 1,59 для метода ИВА, значения меньше табличного (t (P, f) – 2,57), следовательно, методика правильна, систематическая ошибка отсутствует. Результаты представлены в таблице 6.
Проводили метрологическую характеристику сравнения методов ААС и ИВА при определении примеси ртути в растворе для инъекций протамина сульфат серии 40216. Рассчитанный критерий Фишера составил 10,24, в то время как F(P, f1, f2) при доверительной вероятности 0,99 и заданных числах степеней свободы равно 10,97, что позволяет сделать вывод, что различие значений дисперсий незначимо. Расчетное значение критерия Стьюдента (t) = 0,02. Различия статистически незначимы (p = 0,983519). Результаты представлены в таблице 7.
Так как метод ААС применяется для определения содержания ртути согласно ГФ XIV, за истинное значение μ взяли средний результат, полученный методом ААС. Ошибка метода ИВА в сравнении с ААС составляет 2,7%. Результаты представлены в таблице 8.
Линейность методики была подтверждена результатами анализа 5-и разных разведений модельной смеси с концентрациями от 10-1 до 10-5 мг/л. Полученное уравнение линейности имеет следующий вид: y= 0,958*x + 0,016.
Для определения предела количественного определения (ПКО) были приготовлены растворы с концентрацией от 1,0∙10-1 до 1,0∙10-7 мг/л. Добавкой служил раствор ртути с концентрацией 0,1 мг/л. Определен предел количественного определения – от 10-1 до 10-6 мг/л.
Таблица 6 – Сравнительная метрологическая оценка методов ААС и ИВА на стандартном растворе ГСО ртути с концентрацией 0,1 мг/л
μfP
ААС 0,1 5 0,091 1,21*10-5 0,011 95 2,57 0,0142 0,2502 1,87 10,97 1,314 9,23
ИВА 0,1 5 0,109 1,59*10-4 0,013 95 2,57 0,0162 0,7439 1,59 9,00
Таблица 7 – Сравнительная метрологическая оценка методов ААС и ИВА при определении примеси ртути в протамине сульфат (раствор для инъекций серии 40216)
X
S2
S
t (P,f) (табл)
∆x
ɛ
tвыч
F (P,f1,f2) (табл.)при P =99%
Fвыч
δ
Метод
Метод
f
X
S2
S
P
t (P,f) (табл)
∆x
ɛ
F (P,f1,f2) (табл.) при P =99%
Fвыч
ААС 5 0,500 1,62*10-5 0,004062 95 2,57 0,005 0,18 ИВА 5 0,487 1,69*10-4 0,012981 95 2,57 0,015 0,58
10,97
10,24
μ, мг/л
Таблица 8 – Метрологическая характеристика среднего результата метода ИВА в сравнении с ААС
Хср, мг/л S2 S ±∆x ɛ, % δ, % tвыч
0,50
0,49
-4 2,07*10
0,0144
0,3
0,455
2,7
2,96
Апробация методики определения ртути методом инверсионной вольтамперометрии на других лекарственных препаратах. Для апробации методики мы подобрали лекарственные средства (ЛС), которые применяют в клинической медицине и разделили на три группы 1- имеют раздел «тяжелые металлы» в своих фармакопейных статьях («Но-шпа», «Анальгин», «Артрозан», «Ибупрофен, «Диклофенак» (рисунок 5, в), «Карведилол»), 2- полученные из биообъектов («Алфлутоп», «Актовегин»(рисунок 5, б), «Церебролизин»), 3- имеющие в составе ртуть в качестве консерванта («ИРС 19» ( рисунок 5, а)). Сравнительные результаты определения примеси ртути в ЛС представлены в таблице 9.В препаратах «Но-шпа» и «Анальгин» примеси ртути обнаружено не было. Содержание ртути в другихЛС соответствует ФС и НД.
а) б) в) Рисунок 5 – вольтамперограммы ЛС «Ирс 19» (а), «Актовегин»(б), «Диклофенак»(в)
Апробировали разработанную методику ИВА определения ртути (как консерванта) в ЛС «ИРС-19» и провели сравнительную метрологическую оценку с фармакопейным методом экстракционно-фотометрического определения ртуть (II)- иона с дитизоном. Количественное содержание ртути составило 4,81 мг/л и 4,95 мг/л соответственно. Значение t-критерия Стьюдента = 0,02, а t (P, f) = 2,26). Полученные данные не отягощены систематической ошибкой. Различия статистически незначимы (p =0,984513). Критерий Фишера составил 1,98, а F(P, f1, f2) при Р = 0,99 и заданных f = 10,15. Различие значений дисперсий незначимо.
18

Таблица 9 – Сравнительные результаты определения примеси ртути в ЛС
Группы лекарственных средств
No измерения
ЛП
mв-ва в ЛС, мг/мл
mв-ва в пробе, мг/50мкл
mТМ в пробе, мг/50мкл
mТМ в пробе, мг/л
mHg, мг/л
1. ЛС, полученные из биообъектов
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Алфлутоп Актовегин Церебролизин Но-шпа Анальгин Артрозан Ибупрофен Диклофенак Карведилол
Нет данных — 40 — Нет данных —
20 1 500 25 6,0 0.3
20 1.0
25 1.25 Нет данных —
—— —— ——
2*10-5 0,4
5*10-4 10 3,0*10-6 0,06 1,0*10-5 0,2
1,25*10-5 0,25 — —
0,0037 0,6756 0,8101 —
— 0,0880 0,0024 0,0714 0,0642
2. ЛС, содержащие ТМ в ФС
3. ЛС, содержащие ртуть как консервант
10
ИРС-19
0,012
0,0006
0,00029
5,95
4,99
Примечание – 0,001 мас. % = 10 ppm; 1 мг/л = 1 ppm
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. Изучены существующие методы количественного анализа ртути в фармацевтических субстанциях и лекарственных препаратах. Ртуть определяется экстракционно-фотометрическим методом с дитизоном, хроматографическими, спектрофотометрическими и электрохимическими методами. Электрохимические методы являются наиболее перспективными, поскольку позволяют повысить экспрессность и точность анализа.
2.Установлены технологические параметры определения ртути (электрод сравнения – хлорсеребряный, рабочий электрод – модифицированный золотоуглеродсодержащий, в качестве электролита используем раствор хлорида калия 1М. Время растворения 10 с., уровень вибрации на стадии растворения – 6 Гц, время накопления 80 с., уровень вибрации на стадии накопления – 9 Гц, время успокоения 5 с.) методом вольтамперометрии с использованием модифицированного углеродсодержащего электрода в субстанции протамина сульфат.
3.Разработана методика вольтамперометрического определения ртути в биологических субстанциях протамина сульфат (Производитель Biochemcorporation, 84-3, HiratsukaKawagoeSaitama, 350-0814, Japan, Япония. Нормативная документация: ФС 001078-211216, 2016, Протамина сульфат; 1800 грамм) и инъекционном растворе протамина сульфат.
4. Проведена валидация разработанной методики количественного определения примеси ртути в протамине сульфат. Определен предел количественного определения – от 10-1 до 10-6 мг/л. Сходимость методики проверяли по 10 измерениям, коэффициент вариации составил 6,58%. Внутрилабораторную прецизионность определяли по 6-и измерениям 2-мя разными аналитиками, коэффициент вариации составил 6,52% и 6,09% соответственно. Для определения линейности измеряли зависимость концентрации от аналитического сигнала (в пересчете на концентрацию). Уравнение линейности имеет следующий вид: y= 0,958*x + 0,016. Специфичность и правильность доказаны путем сравнения результатов анализов ГСО ртути, полученных одновременно с использованием валидируемой (ИВА) и другой, заведомо специфичной методики (ААС). Рассчитанный критерий Фишера составил 1,22, а F(P, f1, f2) при Р = 0,99 и заданных f = 10,97, что означает, что различие
значений дисперсий незначимо. Значение t-критерия Стьюдента (tвыч) =1,87 для метода ААС и 1,59 для метода ИВА, а t(P, f) = 2,57). Результаты не отягощены систематической ошибкой.
5. Проведено сравнение разработанной методики с другими методами определения примесей тяжелых металлов – атомно-адсорбционной спектрометрией, рентген-флуоресцентным анализом и экстракционно-фотоколориметрическим определением ртуть (II) – иона с дитизоном. Доказана специфичность, правильность методики на образцах протамина сульфат (раствор для инъекций) серии 50216, 10217, 40216. Согласно ААС, содержание примеси ртути составило ≤ 0,5 мг/л, по результатам рентген-флуоресцентного анализа содержание примеси ртути составило 0,1 мг/л, методом экстракционно-фотоколориметрическим определением ртуть (II) – иона с дитизоном содержание примеси ртути составило ≤ 0,08 мг/л.При сравнительной метрологической оценке методов ААС и ИВА критерий Фишера составил 10,24, а F(P, f1, f2) при Р = 0,99 и заданных f = 10,97, что означает, что различие значений дисперсий незначимо. Значение t-критерия Стьюдента (t) =0,02, а t(P, f) = 2,306. Результаты не отягощены систематической ошибкой.Различия статистически незначимы (p = 0,983519). Ошибка метода ИВА в сравнении с ААС составляет 2,7%.
6. Проведен анализ образцов протамина сульфат с предварительной пробоподготовкой – разбавлением водой и осаждением белка. Результаты показали, что для препарата протамина сульфат специальная пробоподготовка не требуется.
7. Изучено влияние мешающих ионов на содержание ртути в протамине сульфат. По результатам можно сделать заключение, что ионы Cu2+, Pb2+, Fe2+, Cd2+, Zn2+ не оказывают влияния на результат, что говорит о высокой избирательности методики.
8. Применена методика определения примеси ртути на двух группах препаратов: 1- имеют раздел «тяжелые металлы» в своих фармакопейных статьях («Но-шпа», «Анальгин», «Артрозан», «Ибупрофен, «Диклофенак», «Карведилол»), 2- полученные из биообъектов («Алфлутоп», «Актовегин», «Церебролизин»)). Содержание примеси ртути составило в «Алфлутопе» – 0,0037 мг/л, в «Актовегине» – 0,6756 мг/л, в «Церебролизине» – 0,8101 мг/л, в «Диклофенаке» – 4,03 мг/л, в
«Ибупрофене» – 0,0024 мг/л, в «Артрозане» – 0,0879 мг/л, в «Карведилоле» – 0,0642 мг/л. В ЛС «Но-шпа» и «Анальгин» примеси ртути не обнаружено.
9. Апробировали разработанную методику ИВА количественной оценки определения ртути (как консерванта) в ЛС «ИРС-19» и провели сравнительную метрологическую оценку с фармакопейным методом экстракционно- фотометрического определения ртуть (II)-иона с дитизоном. Количественное содержание ртути составило 4,81 мг/л и 4,95 мг/л соответственно.
10. Разработанная методика не нуждается в пробоподготовке, является высокочувствительным экспресс-методом определения ртути как примеси, так и основного компонента в лекарственных средствах, с высокой воспроизводимостью и низкой себестоимостью анализа.
Практические рекомендации
Разработанную методику количественного определения примеси ртути в протамине сульфат и других ЛС содержащих примесь ртути, целесообразно использовать на заводах на стадии контроля качества лекарственного средства как экспресс-метод наряду с существующим фармакопейными методами. Также методику можно использовать в учебном процессе на кафедрах фармацевтической химии как учебное пособие для ординаторов и студентов.