«Сравнительное фармакогностическое исследование листьев и побегов алоэ древовидного (Аloe arborescens Mill.) и алоэ вера (Аloe vera L. Ex Webb)»

Объекты и методы исследования
Объектами данной диссертационной работы являлись свежие образцы листьев и
побегов алоэ древовидного, алоэ вера, культивированные на кафедре управления и экономики
фармации, фармацевтической технологии и фармакогнозии Оренбургского государственного
медицинского университета (с 2015 по 2019 гг).
В рамках диссертационной работы исследовались лекарственные растительные
препараты: жидкий экстракт алоэ древовидного в ампулах – производитель ЗАО «Вифитех»,
Россия; сок алоэ древовидного – производитель ЗАО «Вифитех», Россия; линимент алоэ
древовидного – производитель ЗАО «Вифитех», Россия; разработанные нами ЛРП – мазь с
соком алоэ древовидного и суппозитории с соком алоэ древовидного; индивидуальные
вещества: барбалоин, алоэ-эмодин и алоэнин.
Анатомо-гистологическое исследование осуществляли с использованием цифровых
микроскопов марки «Motic DM-111» и «Motic DM-39C-N9GO-A», люминесцентного
микроскопа Альтами-ЛЮМ-2 с увеличениями x40, x100, x400. Изучение химического состава
листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера проводили методом адсорбционной
жидкостной колоночной хроматографии с использованием сефадекса LH–20, полиамида SC 6,
силикагеля L 40/100 и L 100/160. Для исследования извлечений из изучаемого сырья,
выделенных веществ и разработанных лекарственных растительных препаратов методом
тонкослойной хроматографии использовали пластинки «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» и
«Сорбфил ПТСХП-А-УФ» (Россия). Спектрофотометрическое исследование извлечений из
сырья и разработанных препаратов проводили на спектрофотометрах«Specord 40»
(AnalytikJena), «СФ-2000», «UNICO 2800» в кюветах с толщиной слоя 10 мм в диапазоне длин
волн от 190 нм до 700 нм. 1Н-ЯМР и 13С-ЯМР-спектры регистрировали на приборе «Bruker AM
300» (300 МГц). Масс-спектры электронного удара регистрировали на приборе «Kratos MS-30».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Сравнительное морфолого-анатомическое исследование листьев и побегов алоэ
древовидного и алоэ вера
Основные морфологические признаки листа алоэ древовидного: сочные, голые,
мясистые, мечевидные, зеленовато-сизого цвета, в ширину до 7 см, в длину до 50 см, в толщину
до 3 см, восковой налет, зубчатый край, стеблеобъемлющее влагалище, выпуклый с внутренней
и вогнутый с наружной стороны. У алоэ древовидного маловетвистый и очень короткий стебель
с огромным количеством рубцов, который в длину достигает до 60 см (в комнатной культуре),
но иногда в условиях естественного произрастания он достигает до 1 м, в толщину – до 12 мм
(рис. 1).
Листья алоэ вера сочные, гладкие, темно-зеленого цвета с короткими зубцами по краям.
Листья достигают 40 см в длину, в ширину – до 10 см, в высоту – до 1 м. Листья алоэ вера
формируют прикорневую розетку диаметром 80 см. У алоэ вера очень короткий, но достаточно
толстый ствол с малоразвитой корневой системой. На таком одревесневшем стволе остаются
«рубцы» – это следы опавших старых листьев (рис 1.)

АБ
Рисунок 1 – Образцы сырья алоэ.
Обозначения: А – алоэ древовидное (Аloe arborescens Mill.);
Б – алоэ вера (Aloe vera L. Ex Webb).
При рассмотрении листа алоэ древовидного с поверхности видны клетки верхнего
эпидермиса с мало извилистыми или почти прямыми стенками, нижнего – извилистые. Клетки
верхнего и нижнего эпидермиса имеют комбинированную форму. Поверхность листа покрыта
восковым слоем. Эпидерма однослойная, устьица с 4 околоустьичными клетками (тетрацитный
тип), причем они погружены в ткань листа. На верхнем эпидермисе диагностируются секреторные
клетки (рис. 2).
В качестве значимых анатомо-морфологических признаков листьев алоэ вера можно
выделить клетки мякоти листа: округлые, крупные, бесцветные. Игольчатые кристаллы оксалата
кальция располагаются по одному или несколько кристаллов вместе или собранные в пучок (рис.
3).Эпидерма однослойная, устьица с 4 околоустьичными клетками (тетрацитный тип). Эпидермис
подстилается слоем мезофилла, который содержат рафиды.

Рисунок 2– Препарат
листа с поверхности
алоэ древовидного
(х400).
Поперечный срез: А –
верхний эпидермис;
Б – нижний эпидермис.
Обозначения:
1 – устьице;
2 – хлоренхима;
3 – секреторная клетка.
Рисунок 3 – Препарат
листа с поверхности
алоэ вера (х400).
Поперечный срез: А –
верхний эпидермис;
Б – нижний эпидермис.
Обозначения:
1 – устьице;
2 – хлоренхима;
3 – секреторная клетка.

У алоэ древовидного наружная стенка эпидермальных клеток очень толстая,
кутинизированная (рис. 4). Эпидерма подстилается слоем хлоренхимы, у алоэ древовидного
состоящих из продолговатых клеток. В паренхиме данных видов растений содержится большое
количество рафидов. Внутренняя часть листа состоит из очень крупной паренхимы, содержащей
клеточный сок. На границе хлоренхимы с паренхимой располагаются в 1 ряд, на расстоянии друг
от друга коллатеральные закрытые проводящие пучки с флоэмой, обращенной к эпидермису
(рис.4). К флоэме снаружи примыкают крупные клетки с коричневатым, мелкозернистым
содержимым – так называемые алоиновые клетки – хорошо диагностируемые у алоэ древовидного
(рис. 4).
Внутренняя часть листа алоэ вера содержит гигантские клетки трубчатой формы с млечным
соком. Он желтоватого оттенка и имеет очень горький вкус.
На границе хлоренхимы с паренхимой располагаются в 1 ряд, на расстоянии друг от друга
коллатеральные закрытые проводящие пучки с флоэмой, обращенной к эпидермису. К флоэме
снаружи примыкают крупные клетки с коричневатым содержимым – так называемые алоиновые
клетки, длинной трубчатой формы, в которых локализуются фенольные вещества (рис. 4).

Рисунок 4 – Поперечный срез
листа алоэ древовидного (А) и
алоэ вера (Б).
Обозначения:
1 – эпидермис;
2 – палисадная ткань;
3 – «алоиновые» клетки;
4 –закрытый проводящий пучок;
5 – паренхима.
Рисунок 5– Поперечный срез
листа алоэ вера (х400).
Обозначения:
1 – эпидермис;
2 –хлоренхима;
3-закрытый проводящий пучок;
4- «алоиновые» клетки; 5 –
паренхима.

Особенности люминесценции клеточных стенок флоэмы проводящих пучков отличают
сравниваемые виды алоэ друг от друга. В частности, при облучении УФ-светом с длиной волны
λ=360 нм клеточные стенки флоэмы у листьев алоэ древовидного не светятся, в то время как в
аналогичных условиях освещения у алоэ вера клеточные стенки флоэмных клеток проводящего
пучка люминесцируют бурым цветом. Данная особенность может быть обусловлена видовой
специфичностью и использована в анализе подлинности сырья алоэ вера (рис. 6 и 7).
Гистологически эпидермис листа алоэ вера аналогичен эпидермису алоэ древовидного.
Однако заметна значительная разница в размерах хлоропластов клеток мезофилла. У алоэ вера
они имеют овальную форму (рис. 8) и значительный размер, превышающий размеры
хлоропластов в клетках мезофилла алоэ древовидного (рис. 9).

Рисунок 6 – Проводящие
элементы пучка алоэ
древовидного – поперечное
сечение
(х 400).
Обозначения:
А – видимый свет;
Б – облучение светом с
λ= 420 нм;
В – облучение светом с
λ= 360 нм.

Рисунок 7 –Проводящие
элементы пучка листа алоэ
вера – поперечное сечение
(х 100).
Обозначения:
А – видимый свет;
Б – облучение светом с
λ= 420 нм;
В – облучение светом с
λ= 360 нм.
Рисунок 8 – Эпидермис
листа алоэ древовидного –
вид с поверхности (х400).
Обозначения:
А – видимый свет;
Б – облучение светом с
λ= 420 нм;
В – облучение светом с
λ= 360 нм.

Рисунок 9 – Эпидермис
листа алоэ вера – вид с
поверхности (х400).
Обозначения:
А – видимый свет;
Б – облучение светом с
λ= 420 нм;
В – облучение светом с
λ= 360 нм.

2. Фитохимическое исследование алоэ древовидного и алоэ вера
Из листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера методом адсорбционной
колоночной хроматографией, с последующей кристаллизацией и перекристаллизацией
выделены 3 индивидуальных соединения: барбалоин, известный как смесь изомеров алоина А
(1) и алоина В (2), алоэнин (3) и алоэ-эмодин (4) (табл. 1), для которых с использованием 1Н-
ЯМР-, 13С-ЯМР-спектроскопии, спектрофотометрии и масс-спектрометрии установлена
структура (рис. 10-12).

Таблица 1 – Характеристики веществ, выделенных из экстракта листьев и
побегов алоэ древовидного и алоэ вера

№ п/пНазваниеХимическая формулаХарактеристики
соединения
Алоин АКристаллы желтого цвета
OH
OH

OH
O

O
HO
HOOH

OHH
2Алоин ВOH
Кристаллы желтого цвета
OH
O

O
HO
HOOH

OHH

OH

3АлоэнинHO
3′
2’CH3Светло-желтые игольчатые
4’кристаллы
OH1’OO
5′
O6’62
O53
HO1”4
HOOH
OCH3

4ЭмодинOHOOHИгольчатые кристаллы
оранжевого цвета

HOCH3
O

Известно, что барбалоин представляет собой смесь двух стереоизомеров – алоина А и
алоина В, молекулярная масса которых подтверждается данными масс-спектрометрии: m/z
441.1908 [M+Na]+.
В спектре ЯМР 1Н присутствуют однопротонные синглетные сигналы при 12.46 м.д. и
12.58 м.д., характерные для ОН-групп при С-1 и С-8 молекулы антраценпроизводных. В
спектре ЯМР 1Н обнаружены также сигналы ароматических протонов при 7.22 м.д. (1Н, д, J =
2.0, Н-2), 7.32 (1H, т, J = 7.5, Н-6), 7.69 (1Н, д, J = 2.0, Н-4), 7.80 (1Н, дд, J = 1.5 и 8.0, Н-7),
8.43 (1Н,), 7.87 (1Н, дд, J = 1.5 и 8.0, Н-5), подтверждающих наличие заместителей в молекуле
барбалоина (1 и 2) в положениях С-1, С-3 и С-8.
Природа заместителя (CH2OH-группа) в положении С-3 подтверждается наличием в
спектре ЯМР 1Н двухпротонного дублетного сигнала при 4.57 м.д. с константой спин-
спинового взаимодействия (КССВ) 7.5 Гц.
Кроме того, в спектре ЯМР 1Н антраценпроизводных 1 и 2 обнаружен при 4.63 м.д.
однопротонный дублетный сигнал протона при С-10 с КССВ 7 Гц. Этот вывод подтверждается
тем обстоятельством в спектр ЯМР 13С присутствует лишь один сигнал при 193.35,
принадлежащий карбонильной группе при С-9. Наличие в молекуле антраценпроизводных 1 и
2 β-D-глюкопиранозы подтверждается данными 1Н-ЯМР-спектроскопии: однопротонный
дублетный сигнал аномерного протона (Н-1’) при 4.78 м.д. с КССВ 7.2 Гц. О присоединении
глюкозы в положение С-10 с образованием С-С-связи свидетельствуют величины химических
сдвигов в 1Н-ЯМР-спектре протона при С-10 (4.78 м.д.) и углеродного атома С-10 в 13С-ЯМР-
спектре при 52.08 м.д.
В спектре ЯМР 1Н соединения 4 присутствуют сигналы ароматических протонов при
5.58 м.д. (1Н, J = 2, Н-3), 6.24 м.д. (1Н, J = 2, Н-5), 6.35 м.д. (1Н, J = 2, Н-5) и 6.48 м.д. (1Н, J = 2,
Н-5’). В спектре ЯМР 1Н соединения 4 обнаружены трехпротонные синглетные сигналы при
2.12 м.д. и 3.83 м.д., принадлежащие соответственно ароматической СН3-группе при С-2’ и
ОСН3–группе – при С-4 (рис. 10). Данные выводы подтверждаются также результатами 13С
ЯМР-спектроскопии: сигналы при 19.80 м.д. (C-2′, CH3) и 56.25 м.д. (C-4, CH3O) (рис. 11).
О наличии в молекуле соединения 4 свободной фенольной группы свидетельствует
однопротонный синглетный сигнал в спектре ЯМР 1Н при 10.87 м.д. Наличие в спектре ЯМР
С соединения 4 сигнала при 171.01 м.д. подтверждает тот факт, что в молекуле данного
вещества присутствует карбонильная группа.
Наличие в молекуле соединения 4 β-D-глюкопиранозы подтверждается данными 1Н-
ЯМР-спектроскопии: однопротонный дублетный сигнал аномерного протона (Н-1’’) при 4.82
м.д. с КССВ 7.0 Гц. О присоединении глюкозы в положение (C-6’), свидетельствует величина
химического сдвига в 13С-ЯМР-спектре углеродного атома 6’: 164.09 м.д.
Таким образом, соединение 4 имеет строение 4-метокси-6-(2′-β-D-глюкопиранозил-4′-
гидрокси-6′-метилфенил)-2-пирона и идентифицировано как алоэнин. Строение алоэнина (4)
подтверждается также данными масс-спектрометрии: m/z 411.1285 [M+H]+, m/z 433.1106
[M+Na]+,m/z 449.0855 [M+K]+ (рис. 12).
Соединение (4) идентифицировано нами как 1,6,8-тригидрокси-3-метилантрахинон
(эмодин) на основании физико-химическмих констант, а также данных УФ-, 1Н-ЯМР-, 13С-
ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии (m/z: М+ 270).
Таким образом, доминирующими компонентами побегов и листьев алоэ древовидного и
алоэ вера являются антраценпроизводныебарбалоин (1 и 2) и эмодин (4), а также алоэнин (3).
Соединения 1-4 впервые выделены из свежих побегов и листьев алоэ вера в Российской
Федерации.

Рисунок 10 ‒ 1Н-ЯМР-спектр алоэнина вРисунок 11 ‒ 13С-ЯМР-спектр алоэнина в
DMSO-d6.DMSO-d6.

Рисунок 12‒ Масс-спектр алоэнина.
3. Разработка методик качественного и количественного анализа листьев и побегов
алоэ древовидного и алоэ вера
Для определения подлинности листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера
разработаны методики тонкослойной хроматографии (ТСХ) и спектрофотометрии. В рамках
данной диссертационной работы в ходе фитохимического исследования листьев и побегов алоэ
древовидного и алоэ вера было обнаружено доминирующее антраценпроизводное– барбалоин.
Следовательно, на данное вещество целесообразно опираться при разработке методик
качественного и количественного анализа листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера.

3.1.Качественный анализ методом тонкослойной хроматографии

Рисунок 13 – Хроматографическийпрофиль водно-спиртового извлечения из листьев и
побегов алоэ древовидного и алоэ вера: А – идентификация в дневном свете;
Б – идентификация в УФ-свете при 254 нм;
В – идентификация в УФ-свете при 365 нм.
Обозначения: 1 – водно-спиртовое извлечение из листьев и побегов алоэ древовидного;
2 – водно-спиртовое извлечение из листьев и побегов алоэ вера;
3 – барбалоин; 4 – алоэнин; 5 – алоэ-эмодин.

В результате исследований проанализирован ряд систем (хлороформ ‒ спирт этиловый
96% ‒ вода (26:16:3); этилацетат – муравьиная кислота – вода (10:2:3); этилацетат – этанол –
вода (100:13,5:10)) и выявлена оптимальная по соотношению и составу для максимально
четкого разделения БАВ из сырья алоэ древовидного и алоэ вера система, а именно: хлороформ
– спирт этиловый 95% – вода (26:16:1,5). Детекцию исследуемых хроматографических
пластинок проводили при дневном свете и под УФ излучением при 365 и 254 нм.
При сравнительном анализе хроматографических профилей водно-спиртовых экстрактов
из сырья алоэ древовидного и алоэ вера под УФ излучением при 365 нм барбалоин
зафиксирован в форме пятна с лимонно-желтой флуоресценцией при Rf ≈ 0,52, пятно алоэнина
при Rf ≈ 0,45 с голубой флуоресценцией, пятно алоэ-эмодина при Rf ≈ 0,9 с темно-оранжевой
флуоресценцией (рис. 13).
Проведенные фитохимические исследования сырья алоэ древовидного и алоэ вера
позволили выявить диагностически значимые соединения, при этом размер и интенсивность
свечения пятна барбалоина из водно-спиртовых экстрактов сырья анализируемых растений дает
возможность предположить его высокое содержание в сырье.
3.2. Качественный анализ методом спектрофотометрии
Дополнительно для определения подлинности сырья рекомендовано проведение
спектрофотометрического анализа. Во время анализа изучались спектры щелочно-аммиачных
растворов водно-спиртовых извлечений из сырья алоэ древовидного и алоэ вера. О вкладе
антраценпроизводных в спектр лекарственного растительного сырья алоэ древовидного и алоэ
вера свидетельствует батохромный сдвиг длинноволновой полосы при прямой
спектрофотометрии и дифференциальные спектры с максимумом поглощения 412-416 нм. При
этом важно отметить, что в случае алоэнина не зафиксирован батохромный сдвиг кривой
поглощения в щелочно-аммиачной среде, что свидетельствует о возможности определения
суммы антраценпроизводных в присутствии данного вещества, несмотря на его относительно
высокое содержание. Исследование прямых и дифференциальных спектров водно-спиртовых и
щелочно-аммиачных растворов листьев алоэ древовидного и алоэ вера показало, что максимум
поглощения находится в длинноволновой области дифференциального спектра при длине
волны 412±2 нм, что характерно для барбалоина, в то время как при прямой
спектрофотометрии наблюдается лишь плечо. Пик при длине волны 412±2 нм свидетельствует
о наличии барбалоина в составе сравниваемых видов растений (рис. 14).

АБ
Рисунок 14 – Дифференциальные спектры растворов водно-спиртовых и щелочно-
аммиачных извлечений из листьев алоэ древовидного (А) и алоэ вера (Б)

3.3. Разработка методик количественного определения суммы антраценпроизводных в
листьях и побегах алоэ древовидного и алоэ вера
Определено, что выделенный из листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера
барбалоин во многом определяет характер кривой поглощения водно-спиртового извлечения, а
значит, является диагностически значимым веществом для данного вида лекарственного
растительного сырья.
С учетом того, что антраценпроизводные и, в частности, барбалоин, оказывают
существенное воздействие на электронный спектр и, принимая во внимание тот факт, что
максимум поглощения водно-спиртового извлечения сырья алоэ древовидного и алоэ вера, и
раствора барбалоина (смесь алоина А и алоина В) аналогичны, и зафиксированы в условиях
дифференциальной спектрофотометрии при 412 нм, в связи с этим целесообразно определение
содержания суммы антраценпроизводных в пересчете на барбалоин при 412 нм.
На начальном этапе разработки методики количественного определения экстракция из
анализируемых видов сырья проводилась с различными концентрациями экстрагента, в
различных соотношениях «сырье -экстрагент», а также с вариацией времени экстрагирования на
водяной ба не. На основании проведенных экспериментов зафиксированы условия, при которых
антраценпроизводные экстрагируются в максимальных количествах из сырья алоэ
древовидного и алоэ вера: экстрагент – 60% C2H5OH; соотношение «сырье – экстрагент» –10:50;
время экстракции – 30 мин на водяной ба не при температуре 80–90°С.
Измерение оптической плотности проводят при длине волны 412 нм через 40 минут
после приготовления всех растворов.
Методика количественного определения сырья: 10,0 г свежесобранного и измельченного
сырья алоэ древовидного (алоэ вера) отвешивают в термоустойчивую колбу с притертым
шлифом на 100 мл, прибавляют 60% C2H5OH 50 мл. Колбу, закупоренною пробкой,
взвешивают на аналитических весах. Далее колбу с присоединенным дефлегматором (h = 50 см)
30 мин подвергают воздействию температуры с использованием водяной бани при умеренном
кипении. Колбу с содержимым остужают, прикрывают пробкой, взвешивают и дополняют
массу до исходной 60% C2H5OH. Извлечение отфильтровывают через бумажный фильтр
(раствор А).
Испытуемый раствор: 2 мл (раствор А) отмеривают в колбу объемом 25 мл со шлифом
из стекла, устойчивого к повышенным температурам, добавляют до 25 мл щ-а раствором.
Оптическую плотность испытуемого раствора фиксируют после 40 минут при помощи
спектрофотометра при λ=412 нм.
Раствор сравнения: 2 мл раствора А отмеряют в колбу объемом на 25 мл из стекла,
устойчивого к повышенным температурам, доводят до метки 60% этиловым спиртом.
Оптическую плотность испытуемого раствора фиксируют после 40 минут при помощи
спектрофотометра при λ=412 нм.
Примечание: Приготовление раствора барбалоина. 0,0050 г барбалоина отвешивают в
колбу объемом на 25 мл со шлифом из термоустойчивого стекла, доливают 60% C 2H5OH до 25
мл (раствор А). 5 мл (раствор А) отмеривают в колбу на 25 мл со шлифом из стекла,
устойчивого к повышенным температурам, добавляют щелочно-аммиачный раствор до 25 мл
(раствор Б). Определяют значение оптической плотности раствора Б при λ=412 нм с
использованием спектрофотометра.
Раствор сравнения: 5 мл (раствор А) отмеряли в колбу объемом на 25 мл из стекла,
устойчивого к повышенным температурам, добавляли до метки 60% этиловым спиртом.
Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на барбалоин и абсолютно сухое
сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
∗ 0 ∗50∗25∗5∗100∗100
X= , где
0 ∗ ∗25∗2∗25∗(100− )
E0 – оптическая плотность раствора РСО барбалоина; m – масса навески сока, г; m0 –
масса РСО барбалоина, г; W – влажность, в процентах.
При отсутствии ста нда ртного обра зца ба рба лоина це ле сообра зно использова ть
те оре тиче ское зна че ние уде льного пока за те ля поглоще ния – 102:
∗50∗25∗100
X=, где
∗102∗2∗(100− )
E – оптиче ска я плотность; m – масса сырья, в г; W – влажность, в процентах.
1%
E1см
102 – удельный показатель поглощения () щелочно-аммиачного раствора РСО
барбалоина А при 412 нм.
Метрологические характеристики методики количественного определения содержания
суммы антраценпроизводных в листьях алоэ древовидного и алоэ вера представлены в таблицах
2 и 3.

Таблица 2 – Метрологические характеристики методики количественного
определения содержания суммы антраценпроизводных в листьях и побегах алоэ
древовидного
fXSP, %t (P,f)XE, %
102,460,227952,23±0,18±6,40

Таблица 3 – Метрологические характеристики методики количественного
определения содержания суммы антраценпроизводных в листьях и побегах алоэ вера
fXSP, %t (P,f)XE, %
102,290,198952,23±0,14±6,30
Таким образом, в результате проведенных исследований нами предложена методика
количественного определения суммы антраценпроизводных спектрофотометрическим методом
(дифференциальный вариант) для сырья алоэ древовидного и алоэ вера в пересчете на
барбалоин без предварительной стадии кислотного гидролиза и окисления антрагликозидов.
Содержание суммы антраценпроизводных в сырье алоэ древовидного находится в
пределах от 2,3 до 2,6%, а в алоэ вера от 2,1 до 2,4%. Опираясь на полученные данные
содержания антраценпроизводных в сырье алоэ древовидного и алоэ вера, в качестве нижней
границы целесообразней предложить концентрацию не менее 2%.

3.7. Числовые показатели для листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера.
Для листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера были рассчитаны числовые
показатели цельного сырья. В результате проведенных исследований мы можем рекомендовать
нижний предел содержания антраценпроизводных в сырье алоэ древовидного и алоэ вера 2%,
потеря массы при высушивании ≤ 10%, влажность ≥ 92%, не допускается наличие органических
примесей, общая зола ≤ 2%, поломанных листьев ≤ 10%, минеральные примеси ≤ 0,5%.
Числовые показатели, полученные в результате эксперимента, использовались при оформлении
проекта фармакопейных статей «Алоэ листья и побеги свежие».

4.Разработка и стандартизация лекарственных препаратов на основе сырья алоэ
древовидного
4.1.Состав, методика получения и стандартизации новых лекарственных растительных
препаратов на основе сырья алоэ древовидного
Первоначально при разработке состава для дерматологической мази и суппозиторий
нами проводились исследования по обоснованию введения в состав сгущенного сока алоэ
древовидного. Для сравнительного анализа мы использовали сок алоэ древовидного,
сгущенный сок алоэ древовидного (с содержанием влаги не более 30%), спиртовой экстракт
алоэ древовидного 1:10, густой экстракт алоэ древовидного (с содержанием влаги не более
25%) (табл. 4).
Таблица 4 – Результаты количественного содержания суммы антраценпроизводных в
различных извлечениях из сырья алоэ древовидного
№Виды извлечений из сырья алоэ древовидногоСодержание суммы
антраценпроизводных
в пересчете на барбалоин, %
1.Сок алоэ древовидного6,68±0,02
2.Сгущенный сок алоэ древовидного7,33±0,04
3.Спиртовой экстракт алоэ древовидного 1:106,81±0,03
4.Густой экстракт алоэ древовидного6,97±0,03
Количественное содержание в сгущенном соке алоэ древовидного по сравнению с
остальными извлечениями из сырья алоэ древовидного максимально, соответственно на
основании данных результатов именно его вводили в мазь и суппозитории.
При разработке дерматологической мази осуществляли подбор оптимальной основы,
способствующей формированию максимально положительному терапевтическому эффекту
мази. Для приготовления мазей использовали следующие основы, разрешенные к
медицинскому применению: липофильные, гидрофильные и комбинированные. В качестве
гидрофильной основы использовали: крахмал, воду и глицерин (мазевая основа № 3). Состав
липофильно-гидрофильной основы (консистентная эмульсия вода-вазелин): вазелин,
эмульгатор Т2 и вода (мазевая основа № 2), а компоненты комбинированной – безводный
ланолин, вазелин, масло какао (мазевая основа № 4); парафин, вазелин, безводный ланолин,
твин-80 и вода (мазевая основа № 1).
Все анализируемые дерматологические мази содержали 10% сгущенного сока алоэ
древовидного, который вводили с учетом физико-химических свойств и характера
основообразующих компонентов.
При выборе мазевой основы для разрабатываемой нами дерматологической мази
учитывались результаты анализа степени высвобождения действующих веществ и определения
антимикробной активности, при этом наилучшие результаты зафиксированы у мазевой основы
№2, которую, на основании вышеизложенного, мы утвердили в качестве основы.
Препарат готовили по следующей методике: 10,8 г вазелина с 1,8 г эмульгатора Т-2
сплавляли в фарфоровой чашке на водяной бане. Полученный сплав переносили в ступку и
добавляли 5,4 г горячей воды очищенной. Затем добавляли 2,0 г сгущенного сока алоэ
древовидного, тщательно перемешивали пестиком. Масса мази около 20 г. Анализ
ϲуммыантраценпроизводных в пересчете на барбалоин проводили методом спектрофотометрии.
Методика количественного определения: В колбу из термоустойчивого стекла на 25 мл
отвешивают 2 грамма мази, прибавляют 25мл 60% C2H5OH, нагревают до расплавления основы
на водяной бане и перемешивают на протяжении 3 минут. Далее остужают и отфильтровывают
в мерную колбу на 25 мл (раствор А). Р-а А (2 мл), отмеривают в колбу на 25 мл и добавляют
щелочно-аммиачный раствор до метки.
Раствор сравнения: р-р А (2 мл) отмеривают в колбу на 25 мл и добавляют H2O
очищенную до 25 мл. При длине волны 412 нм измеряют оптическую плотность раствора на
спектрофотометре.
Расчет содержания барбалоина в мази проводят по формуле:
×25×25 × ×1000
Х=1%, где
1см × ×2×50
1%
E – оптическая плотность исследуемого раствора; 1см– – удельный показатель
поглощения рабочего стандартного образца барбалоина при длине волны 412 нм;m – масса
навески, г;P- масса мазевой массы, г.
Содержание антраценпроизводных в полученном препарате составило 6,9 мг.
Метрологические характеристики методики количественного определения содержания
суммы антраценпроизводных в мази с соком алоэ древовидного представлены в таблице 5.

Таблица 5 – Метрологические характеристики метода количественного определения
антраценпроизводных в мази из сгущенного сока алоэ древовидного
fXSP, %t (P,f)XE, %
106,90,03405952,25±0,07595±5,90

В качестве основного действующего компонента, вводимого в состав суппозиториев,
использовали сгущенный сок алоэ древовидного, выбранный на основании результатов
исследований, описанных в таблице 4.
Далее для получения суппозиториев с соком алоэ древовидного подбирали основу,
обеспечивающую максимальный терапевтический эффект:
-суппозитории с соком алоэ древовидного на липофильной основе №1 (состав основы:
эмульгатор твин-80 и масло какао).
– суппозитории с соком алоэ древовидного на гидрофильной основе №2 (состав основы:
желатин, вода и глицерин).
При выборе суппозиторной основы для разрабатываемых нами суппозиторий
учитывались результаты испытаний, в соответствии с ОФС «Суппозитории», а именно:
распадаемость, температура плавления, степень высвобождения действующих веществ, что
позволили считать гидрофильную основу № 2 (желатин, вода и глицерин) оптимальной основой
для суппозиторий с соком алоэ древовидного.
Для приготовления 5 суппозиториев с соком алоэ древовидного на гидрофильной основе
№2 (состав основы: желатин, вода и глицерин)желатин медицинский в количестве 3 г
помещают в фарфоровый стакан, заливают водой и дают набухнуть 30-45 мин, затем добавляют
глицерин в количестве 15 г и помещают на водяную баню, перемешивая до однородной массы.
Потом добавляют 2 г сгущенного сока алоэ древовидного и охлаждают массу до температуры,
близкой к температуре застывания.
Приготовленную массу заливают в разъемные суппозиторные пластмассовые формы,
предварительно смазанные вазелиновым маслом. Получают 5 суппозиториев состава:
– 0,3 г – сгущенного сока алоэ древовидного;
– 2,7 г – желатино-глицериновой суппозиторной основы.
Анализ суммы антраценпроизводных в пересчете на барбалоин проводили методом
спектрофотометрии.
Методика количественного определения: в фарфоровой посуде на водяной бане
расплавляют5 г суппозиториев, охлаждают. В колбу из термостойкого стекла на 50 мл
отвешивают 2 г полученной массы, прибавляют 25 мл 60% C2H5OH из мерного цилиндра,
нагревают на водяной бане продолжительностью 15 мин, смешивают в течение 3 мин,
остужают и отфильтровают в колбу на 25 мл (раствор А). Р-а А (2 мл), отмеривают в колбу на
25 мл добавляютщелочно-аммиачным раствором до метки.
Раствор сравнения: р-р А (2 мл) отмеривают в колбу на 25 мл и добавляютH2O
очищенную до 25 мл. Оптическую плотность раствора измеряютпри 412 нм на
спектофотометре.
Расчет содержания суммы антраценпроизводных в пересчете на барбалоин в
суппозиториях проводят по формуле:
×25×25 × ×1000
Х = 1% × ×2×50 , где
1см
1%
E – оптическая плотность; 1см- удельный показатель поглощения РСО барбалоина
(102); Р-масса суппозитория (3 грамма); m – масса точной навески (2 грамма).
Метрологические характеристики методики количе ственного определения содержания
суммы антраценпроизводных в суппозиториях с сгущенном соком алоэ древовидного
приведены в таблице 6.

Таблица 6 – Метрологические характеристики методики количественного определения
суммы антраценпроизводных в суппозиториях со сгущенным соком алоэ древовидного
fXSP, %t (P,f)XE, %
107,200,0447952,25±0,0997±6,80

4.2. Стандартизация лекарственных препаратов на основе сырья алоэ древовидного
Нами были исследованы следующие образцы ЛП на основе алоэ древовидного,
представленные на фармацевтическом рынке РФ:
– Жидкий экстракт алоэ в ампулах (ЗАО «Вифитех»), Россия, состав – листья алоэ
древовидного 360 мг;
– Сок алоэ (ЗАО «Вифитех»), Россия, состав – 80 мл сока из листьев алоэ древовидного;
– Линимент алоэ (ЗАО «Вифитех»), Россия, состав – 7,8 г сока из листьев алоэ.
Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на барбалоин в различных
препаратах представлено в таблице 7.
Таблица 7 – Результаты количественного содержания суммы антраценпроизводных в
пересчете на барбалоин в различных препаратах на основе алоэ древовидного

№Лекарственный растительныйСодержание суммы антраценпроизводных
препаратв пересчете на барбалоин, %
1Жидкий экстракт алоэ в ампулах (ЗАО5,4
«Вифитех»), Россия
2Сок алоэ (ЗАО «Вифитех»), Россия4,4
3Линимент алоэ (ЗАО «Вифитех»),5,6
Россия
Метрологические характеристики методики количественного определения содержания
суммы антраценпроизводных в промышленных препаратах алоэ древовидного представлены в
таблице 8.
Таблица 8 – Метрологические характеристики методики количественного определения
суммы антраценпроизводных в промышленных препаратах алоэ древовидного и алоэ вера
ПрепаратыfXSP, % t (P,f)XE, %
Жидкий экстракт алоэ
105,400,01952,25±0,0223±5,90
древовидного в ампулах
Линимент алоэ105,600,0144952,25±0,0323±6,10
Сок алоэ древовидного104,400,01702952,25±0,0379±6,20
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенное сравнительное фармакогностическое исследование листьев и побегов алоэ
древовидного (Аloe arborescens Мill.) и алоэ вера (Аloe vera L. Ex Webb) дало возможность
сформулировать следующие общие выводы:
1. Проведенное сравнительное морфолого-анатомическое исследование листьев и
побегов алоэ древовидного и алоэ вера, что позволило выявить основные отличительные
признаки изучаемых видов алоэ, которые заключаются в различной форме алоиновых клеток у
алоэ древовидного и алоэ вера, различной форме и размерах клеток эпидермиса сравниваемых
объектов, наличие пучков рафид на нижнем эпидермисе алоэ вера, наличие секреторных клеток
на верхнем эпидермисе алоэ древовидного и алоэ вера.
2. В результате проведенной люминесцентной микроскопии было выявлено общее
анатомическое строение: толстая кутикула у листьев рода алоэ; равная степень развития
ксилемы и флоэмы; наличие в клетках водоносной ткани кристаллов оксалата кальция.
3. Проведенный фитохимический анализ листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ
вера с использованием метода ТСХ позволил обнаружить следующие соединения: барбалоин,
алоэ-эмодин и алоэнин. Зафиксирован одинаковый максимум кривой поглощения водно-
спиртового извлечения из листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера при 412±2 нм с
помощью дифференциальной спектрофотометрии.
4. Из листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера с использованием колоночной
хроматографии, реакций кислотного и ферментативного гидролиза, ТСХ, УФ-спектроскопии,
ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии выделены и идентифицированы индивидуальные
вещества – барбалоин, алоэ-эмодин и алоэнин, причем установлено, что барбалоин является
доминирующим компонентом сырья данных растений.
5. Разработана методика качественной оценки листьев алоэ древовидного и алоэ вера
методом тонкослойной хроматографии с использованием стандартного образца барбалоина.
Кроме того, оценка подлинности листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера возможна
при использовании спектроскопии: кривые поглощений водно-спиртового извлечения из
листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера имеют максимум при длине волны 412±2 нм.
6. Разработана методика количественного определения суммы антраценпроизводных в
пересчете на барбалоин и абсолютно сухое сырье в листьях и побегах алоэ древовидного
методом дифференциальной спектрофотометрии при длине волны 412 нм без предварительного
гидролиза и окисления. Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на барбалоин и
абсолютно сухое сырье в листьях и побегах алоэ древовидного варьирует от 2,3 до 2,6%%
7. Разработана методика количественного определения суммы антраценпроизводных в
пересчете на барбалоин и абсолютно сухое сырье в листьях и побегах алоэ вера методом
дифференциальной спектрофотометрии при длине волны 412 нм. Содержание суммы
антраценпроизводных в пересчете на барбалоин и абсолютно сухое сырье в листьях и побегах
алоэ вера варьирует от 2,1-2,4%.
8. Разработаны методики количественного определения суммы анраценпроизводных в
пересчете на барбалоин и абсолютно сухое сырье методом дифференциальной
спектрофотометрии в разработанных нами препаратах из сока листьев алоэ древовидного в
мази и суппозиториях.
9. При проведении исследований препаратов на основе сока алоэ древовидного согласно
ОФС «Мази» и «Суппозитории» было обосновано применение данных лекарственных
растительных препаратов в качестве противомикробных и ранозаживляющих средств.
10. Основные положения разработанных нами методик качественного, количественного
анализа, а также числовые показатели для листьев и побегов алоэ древовидного и алоэ вера
нашли отражение в проекте ФС на ЛРС – «Алоэ листья и побеги свежие».
Практические рекомендации
Результаты диссертационной работы позволяют усовершенствовать подходы к
стандартизации лекарственного растительного сырья, содержащего антраценпроизводные, и
могут быть использованы в учебном процессе по курсам «Фармакогнозия» и
«Фармацевтическая химия», а также в центрах сертификации и контроля качества
лекарственных средств и на фармацевтических предприятиях.
Перспективы дальнейшей разработки темы
Проведение диссертационного исследования имеет научно-практическое значение для
фармакогнозии и фармацевтической химии в том числе с целью дальнейшего изучения
химического состава растений, содержащих антраценпроизводные, а также разработки
объективных методик анализа и подходов к стандартизации лекарственного растительного
сырья и лекарственных растительных препаратов.