Сравнительное иммуногистохимическое исследование клеточных реакций в нестабильных и в стабильных атеросклеротических поражениях у человека

Объектом исследования служил архивный материал, полученный от 45 мужчин (средний возраст – 60±8 лет), умерших от острой сердечно-сосудистой недостаточности атеросклеротической этиологии. Непременным условием для отбора материала являлось отсутствие тяжелых, сопутствующих заболеваний, способных оказывать воздействие на иммунологическую реактивность. Исследовали сегменты аорты (из района дуги, грудного и брюшного отделов), коронарные артерии и a. basilaris, а также парааортальные лимфатические узлы из тех же районов аорты – всего 345 образцов ткани.
Подготовка материала для гистологического исследования. Иссеченные образцы ткани фиксированы в 4% параформальдегиде (Merck, Германия) на 0.1М фосфатном буфере (pH 7.2–7.4). Для окраски по методу Браше образцы фиксировали в жидкости Карнуа (Меркулов, 1969). На санном микротоме (Leica SM2000R, Германия) и криокате (нефиксированный материал) (Leica CM1510S, Германия) изготавливали парафиновые и замороженные срезы толщиной 3–5 мкм.
Обзорные гистологические окраски. Для верификации типов атеросклеротических поражений и отбора нестабильных, обладающих признаками прогрессирующего роста бляшек, препараты окрашивали красителем Oil Red O (Sigma- Aldrich, США). Выявление эластических и коллагеновых волокон в сосудистой стенке осуществляли с помощью специальной гистологической окраски по методу Вейгерта – Ван-Гизона (набор реактивов Bio Optica). Для выявления степени инфильтрации сосудистой стенки мононуклеарами использовали окраску гематоксином Майера и водно-спиртовым раствором эозина. Для дифференциации лимфоидных клеточных форм, входящих в мононуклеарные инфильтраты, использовали окраску метиловым зеленым-пиронином по Унна-Паппенгейму (метод Браше).
Иммуногистохимическое исследование. Иммуногистохимическое исследование поражений осуществляли высокочувствительным двухступенчатым авидин-биотиновым методом (Коржевский и соавт., 2012). С этой целью использовали поликлональные антитела к IL-8 (в концентрации 50 мкг/мл, «Sigma»), Т-лимфоцитам (CD3, 50 мкг/мл, «Sigma»), Т-лимфоцитам хелперам (CD4 FLEX, клон 4В12, ready to use, «Dako»), Т- лимфоцитам супрессорам (CD8, клон С8/144В, 50 мкг/мл, «Dako»), CD20 (CD20cy/HRP, клон L26, 50 мкг/мл, «Dako»), гладкомышечным клеткам (SMC/HRP, клон 1A4, «Dako»), интерлейкину-17 (IL-17, 50 мкг/мл, «R&D Systems»), макрофагам (CD68, клон КР1, ready to use, «Dako»), CD163 (CD163, клон SP96, 50 мкг/мл, «Sigma» ), интерлейкину-18 (IL-18, 100 мкг/мл, «Sigma»), интерферону-гамма (INF-ɤ, 500 мкг/мл, «Sigma»), TNF – альфа (TNF-a, 50 мкг/мл, «Sigma»), интерлейкину-4 (IL-4, 50 мкг/мл, «Sigma»), FOXP3 (Anti-FOXP3, 1 мг/мл, «Sigma»). Продукт реакции выявляли с помощью готового набора
реагентов «R&D Systems» (Cell&Tissue Staining Kit, HRP-DAB System). Докрашивание ядер производили метиловым зеленым (готовый раствор Methyl Green, «Dako»).
Фотосъемка объектов. Полученные препараты исследовали в световом микроскопе «Leica» DM 2500 (Германия). Микрофотографии получали с использованием цифровой фотокамеры «Leica» DFC 420 (Германия) и компьютерной программы «Leica Application Suite Version 3.4.0» (Германия).
Морфометрический и статистический анализ. Морфометрический анализ осуществлялся в следующих зонах сосудистой стенки: в интиме нормальных участков артерий, в зонах интимы под липидным пятном, в фиброзной покрышке нестабильных и стабильных бляшек, в их атероматозных ядрах, а также в участках адвентиции подлежащих под соответствующими атеросклеротическими поражениями. Численность клеток определяли в 10 полях зрения в пределах изучаемых структурных элементов. Подсчеты производили без морфометрической сетки при увеличении х600 под микроскопом Olympus CX41 (Япония). Статистический анализ полученных данных проводился с использованием компьютерной программы Statistica Version 10. Значимость различий между изучаемыми выборками определяли с помощью Т-критерия Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Морфологические особенности и классификация
нестабильных атеросклеротических поражений
В результате проведенного гистологического исследования нами было выделено несколько типов нестабильных и стабильных атеросклеротических поражений сосудистой стенки.
Классический тип нестабильной атеросклеротической бляшки характеризуется присутствием крупного атероматозного ядра и истонченной фиброзной покрышки с участками деформации и надрывов. Отличительной особенностью такой бляшки часто является увеличенное содержание липидов в поверхностных участках ее покрышки и в субэндотелиальном слое интимы, как в виде диффузных внеклеточных, так и внутриклеточных отложений с образованием слоев пенистых клеток. В фиброзной покрышке нестабильной атеросклеротической бляшки часто наблюдается уменьшение содержания гладкомышечных клеток и разрыхление соединительной ткани в результате деструкции коллагенового каркаса, что может способствовать ее разрыву и последующему обнажению липидных масс, часть из которых может попадать в просвет сосуда.
Кроме классического, нами обнаружен прогрессирующий тип нестабильной атеросклеротической бляшки, характерной особенностью которой, является отсутствие липидного или атероматозного ядра. В таких бляшках наблюдается чередование слоев вновь образующихся липидных отложений со слоями фиброзной соединительной ткани. При этом самые поверхностные участки липидных отложений представлены пенистыми клетками. Такая структурная особенность указывает на прогрессирующий рост бляшки, что в итоге способствует сужению просвета сосуда (Рис.1а).
Проведенное нами гистологическое исследование сосудистой стенки показало, что в отличие от нестабильных поражений, стабильная бляшка характеризуется выраженной фиброзной покрышкой. В ней содержится незначительное количество липидов, причем чаще они выявляются в виде очаговых внеклеточных, диффузных отложений, пенистые клетки либо единичны, либо отсутствуют совсем. Покрышка такой бляшки имеет монолитный вид, в ней отсутствуют эрозии, истончения и разрывы (Рис.1б). Она состоит из плотной соединительной ткани, большая часть которой представлена компактно расположенными коллегановыми волокнами. Межклеточное
вещество такой покрышки представлено в основном нейтральными гликозаминогликанами. Некоторые стабильные бляшки не имеют липидного ядра и в их основании наблюдаются отложения солей кальция. В других – атероматозные ядра, как правило, состоят из старых, деградирующих и разрушенных пенистых клеток и в таких ядрах часто наблюдаются многочисленные кристаллы холестерина. Для этого типа бляшки не характерна многослойность с чередованием слоев пенистых клеток и соединительной ткани.
а
2
2
б
1
Рис.1. Варианты нестабильных и стабильных атеросклеротических поражений в сосудистой стенке человека
а – свежие липидные отложения (1) чередуются со слоями соединительной ткани (2) в поверхностном отделе фиброзной покрышки нестабильной атеросклеротической бляшки в коронарной артерии; б – классический вариант стабильной атеросклеротической бляшки с массивной, монолитной фиброзной покрышкой (1) и с незначительным содержанием липидов преимущественно в виде диффузных внеклеточных отложений в зоне атероматозного ядра (2).Окраска Oil red 0 и гематоксилином. Ув.:а – х400, б – х200.
Исходя из вышесказанного, на основании собственных и литературных данных создана морфологическая классификация, в основе которой лежат обобщенные типы состоявшихся нестабильных и стабильных атеросклеротических поражений.
Состояние эластико-коллагенового каркаса в нестабильных и стабильных атеросклеротических поражениях
Известно, что при формировании атеросклеротической бляшки наряду с отложениями липопротеинов, образованием пенистых клеток, наблюдаются выраженные изменения волокнистых структур.
Иммуногистохимический анализ гладкомышечных клеток в атеросклеротических поражениях показал резкое снижение их числа в нестабильной бляшке вплоть до их полного исчезновения в отдельных случаях (Рис.2а, б).
Рис.2. Единичные гладкомышечные клетки (ГМК) в покрышке нестабильной атеросклеротической бляшки (а); и многочисленные ГМК в покрышке стабильной бляшки (б). Иммуногистохимическая окраска. Ув. х250.
а
б
В отличие от нестабильного поражения в покрышке стабильной бляшки выявлялись многочисленные гладкомышечные клетки. Известно, что гладкомышечные клетки в сосудистой стенке, наряду с фибробластами, активно участвуют в синтезе эластических и коллагеновых волокон, которые составляют каркас покрышки атеросклеротического поражения и определяют ее прочность.
В результате проведенного гистологического исследования (окраска по методу Вейгерта – Ван-Гизона) в разных зонах изучаемых типов атеросклеротических поражений были выявлены деструктивные изменения эластико-коллагенового каркаса. Так, в покрышке нестабильной атеросклеротической бляшки наблюдались истончение и атрофия эластических и коллагеновых волокон. Причем иногда такие изменения сопровождались практически полным разрушением эластического и коллагенового каркаса под фиброзной покрышкой. На более поздних стадиях нестабильной бляшки выявлялось нарушение прочности фиброзной покрышки, в виде ее истончения и разрыва.
В отличие от нестабильной бляшки, в стабильном атеросклеротическом поражении деструктивные изменения эластических и коллагеновых волокон в соединительнотканном каркасе покрышки бляшки либо были выражены минимально, либо отсутствовали совсем.
Следует подчеркнуть, что в литературе практически отсутствуют данные о патологических изменениях коллагеновых и эластических волокон, возникающих при формировании нестабильной атеросклеротической бляшки. Имеются лишь единичные свидетельства о том, что нестабильность (склонность бляшек к разрыву) возможно связана с изменением соотношения компонентов экстрацеллюлярного матрикса в покрышке бляшки. В частности, показано, что при увеличении числа коллагеновых и снижении содержания эластических волокон повышается «жесткость» покрышки бляшки, что делает ее более хрупкой (Шишкина и соавт., 2011). Наши же исследования свидетельствуют о том, что на всем протяжении покрышки нестабильной бляшки происходит истончение и атрофия, не только эластических, но и коллагеновых волокон. Причем на более поздних стадиях нестабильного поражения за счет их прогрессирующей дегенерации наблюдалось практически полное нарушение прочности фиброзной покрышки, в виде ее истончения и разрыва. В отличие от нестабильной бляшки, в стабильном атеросклеротическом поражении деструктивные изменения эластических и коллагеновых волокон в соединительнотканном каркасе покрышки бляшки, как правило, были выражены минимально.
Роль хемоадгезивного фактора IL-8 в формировании нестабильной атеросклеротической бляшки
Известно, что при формировании атеросклеротических поражений важную роль играют иммуновоспалительные реакции. Источником этих реакций служат, проникающие из тока крови в интиму артерий мононуклеарные клетки. Для их полноценной адгезии на эндотелиальную поверхность и последующую миграцию в интиму необходимы хемоадгезивные факторы и хемоаттрактанты. Среди которых ключевую роль играет интерлейкин-8 (IL-8) (Пигаревский и соавт., 2016).
Сравнительный иммуногистохимический анализ показал, что в эндотелиальных клетках, выстилающих поверхность молодых и выраженных нестабильных бляшек в аорте, коронарных артериях и в a. basilaris человека наблюдается выраженная экспрессия IL-8. В то время как в эндотелиальном слое стабильных поражений секреция IL-8 либо обнаруживается в единичных эндотелиоцитах, либо отсутствует совсем.
Одновременно с эндотелиальными клетками выраженная экспрессия IL-8 выявляется в мононуклеарных клетках, которые обнаруживаются как на поверхности
эндотелия (иногда в виде компактных групп), так и в субэндотелиальном пространстве в нестабильных атеросклеротических бляшках (Рис.3).
Рис.3. Многочисленные эндотелиальные и мононуклеарные клетки, экспрессирующие IL- 8 (стрелки) в поверхностных отделах интимы нестабильной атеросклеротической бляшки. Иммунопероксидазный метод. Ув. х600.
Наряду с поверхностными отделами, мононуклеары, экспрессирующие IL-8, выявляются и в глубоких отделах поврежденной покрышки нестабильной атеросклеротической бляшки. Эти факты могут свидетельствовать в пользу гипотезы об активной адгезии мононуклеарных клеток с последующим их проникновением в интиму нестабильных атеросклеротических поражений.
Одновременно проведенный морфометрический анализ показал, что максимальное число эндотелиальных клеток, экспрессирующих IL-8, выявлялось в нестабильном атеросклеротическом поражении. Так, их количество было выше в 2,8 раза (p <0,05) по сравнению с нормой, в 1,8 раза по сравнению со стабильной бляшкой и в 1,3 раза по сравнению с липидным пятном. Наряду с этим экспрессия IL-8 также выявлялась в мононуклеарных клетках. В нестабильном атеросклеротическом поражении наблюдалось выраженное увеличение числа мононуклеаров с IL-8 в 3,8 раза (p<0,05) по сравнению с нормой, в 1,4 раза по сравнению со стабильной бляшкой и в 1,7 раза по сравнению с липидным пятном (Рис.4). Рис. 4. Количественное содержание эндотелиальных и мононуклеарных клеток, экспрессирующих IL-8, в норме и в различных типах атеросклеротических поражений интимы артерий. Из литературы известно, что при атеросклерозе IL-8 обеспечивает полноценную адгезию мононуклеарных клеток на поверхность эндотелия и их последующую миграцию в интиму сосудистой стенки (Cimmino et al., 2017; Abdolmaleki et al., 2019). Показано, что концентрация IL-8 в нестабильных атеросклеротических поражениях значительно выше по сравнению с другими стадиями развития атеросклеротической бляшки (Рагино и соавт., 2012; Velasquez et al., 2014). Наши иммуноморфологические и морфометрические исследования подтвердили эти данные. Наибольшая адгезионная активность IL-8, являющегося мощным хемоаттрактантом, наблюдается в эндотелиальных клетках, выстилающих поверхность, как молодых, так и уже сформировавшихся нестабильных атеросклеротических бляшек. Интересно, что в цитоплазме моноцитов, проникающих в интиму, также выявляется экспрессия этого интерлейкина, что может говорить о генерализованном характере адгезионного процесса в сосудистой стенке при формировании нестабильных поражений. Мононуклеарно-клеточная инфильтрация стенок артерий После активации эндотелиальных клеток, под воздействием модифицированных ЛПНП и адгезионных факторов, таких как IL-8, происходит адгезия мононуклеарных клеток (лимфоцитов и макрофагов) на эндотелиальную поверхность с их последующим проникновением в сосудистую стенку и образованием инфильтратов в пораженных участках интимы артерий. Проведенное гистологическое исследование сосудистой стенки показало, что для нестабильной атеросклеротической бляшки характерна инфильтрация ее покрышки и участков интимы, соседствующих с атероматозным ядром, мононуклеарными клетками, среди которых преобладают моноциты/макрофаги и лимфоциты. Важно, что в этих инфильтратах наблюдается тесный контакт между лимфоцитами, моноцитами и пенистыми клетками. На более выраженной стадии такие инфильтраты, как правило, выглядят в виде массивных очаговых скоплений, которые часто соседствуют с очагами кровоизлияний (Рис.5). Рис. 5. Выраженный мононуклеарно-клеточный инфильтрат в районе деструкции покрышки нестабильной бляшки, рядом видны очаги кровоизлияния (стрелки). Окраска гематоксилином и эозином. Ув. х600. Основные места локализации таких инфильтратов – покрышка, краевые отделы или плечи бляшки, участки интимы, располагающиеся в основании или под липидным ядром. Важно отметить, что наиболее выраженные и массивные инфильтраты, как правило, располагались в зоне эрозий и разрывов покрышки нестабильной бляшки. Возможно, клетки, составляющие эти инфильтраты, являются источником иммуновоспалительных реакций, которые развиваются при формировании нестабильных поражений. В интиме и адвентиции нормальных участков артерий мононуклеарно-клеточная инфильтрация отсутствовала. Аналогичная картина отсутствия инфильтрации наблюдалась и в фиброзной покрышке стабильных атеросклеротических поражений. Параллельное морфометрическое исследование мононуклеарных клеток в аорте, коронарных артериях и артерии basilaris человека подтвердило приведенные выше данные. Удалось установить, что количественное содержание малых и средних лимфоцитов и макрофагов в нестабильном атеросклеротическом поражении значительно выше по сравнению с нормой, начальной стадией поражения и стабильной атеросклеротической бляшкой. Наряду с ними в сосудистой стенке также выявляются лимфобласты и плазматические клетки, но в значительно меньшем количестве. Число мононуклеарных клеток в интиме нестабильного поражения возрастает в 5,7 раза (p<0,05) по сравнению с нормой и в 3,3 раза (p<0,05) по сравнению с интимой стабильной бляшки, а также почти в 1,7 раза по сравнению с начальной стадией поражения (Рис.6). Рис. 6. Количественное содержание мононуклеарных клеток в норме и в различных типах атеросклеротических поражений интимы артерий. Интересно, что численность мононуклеарных клеток возрастает не только в интиме, но и в подлежащих под атеросклеротическими поражениями участках адвентиции артерий. Полученные результаты согласуются с литературными данными в том, что нестабильная бляшка характеризуется инфильтрацией ее покрышки и участков интимы, соседствующих с атероматозным ядром мононуклеарными клетками, среди которых преобладают моноциты/макрофаги и лимфоциты (Шлычкова и соавт., 2005; Кактурский, 2007; Kubatova et al., 2020). В ходе впервые проведенного морфометрического анализа по дифференциации клеточных элементов, входящих в состав мононуклеарно- клеточных инфильтратов, нами было установлено, что большая часть клеток, как в интиме, так и в адвентиции артерий в норме и во всех видах атеросклеротических поражений представлена малыми и средними лимфоцитами. Показано, что в нестабильной атеросклеротической бляшке лимфоидные клетки преобладают над макрофагами. Нами было установлено, что при формировании нестабильного поражения ключевую роль играют малые и средние лимфоциты, а также лимфобласты, что возможно связано с развитием в сосудистой стенке Т-иммунного ответа. Иммуногистохимический и морфометрический анализ популяций лимфоцитов и макрофагов в сосудистой стенке человека Как было отмечено ранее, в составе мононуклеарно-клеточных инфильтратов нестабильных атеросклеротических поражений преобладают различной степени зрелости лимфоидные клетки и макрофаги. Проведенный иммуногистохимический анализ показал, что лимфоидные клетки представлены в основном Т-лимфоцитами (CD3-клетками), в то время как В-лимфоциты либо единичны, либо отсутствуют совсем. При этом CD3-клетки выявляются как в поверхностных, так и в более глубоких отделах покрышки нестабильной атеросклеротической бляшки (Рис.7 а,б). В атероматозном ядре нестабильной атеросклеротической бляшки Т-лимфоциты не выявляются. В стабильных атеросклеротических поражениях Т-лимфоциты обнаруживаются либо в незначительном количестве, либо отсутствуют совсем. Морфометрическое исследование сосудистой стенки показало, что по мере формирования атеросклеротических поражений количество Т-лимфоцитов заметно увеличивается как в интиме, так и в адвентиции артерий. Так, в интиме на начальной стадии поражения число Т-лимфоцитов возрастает в 1,8 раза, а в нестабильной бляшке их численность увеличивается в 3,7 раза (p<0,05) по сравнению с нормой. Кроме этого, в интиме нестабильного поражения содержание Т-лимфоцитов оказалось в 3,1 раза (p<0,05) выше по сравнению со стабильной бляшкой и в 2 раза (p<0,05) по сравнению с липидным пятном. Аналогичная закономерность наблюдается и в участках адвентиции, располагающихся под соответствующими поражениями. Рис.7. Т-лимфоциты (CD3) (стрелки) в поверхностных (а) и более глубоких (б) отделах покрышки нестабильной атеросклеротической бляшки. Иммунопероксидазный метод. Ув. а, б – х 600. Общая популяция Т-лимфоцитов представлена двумя основными иммунорегуляторными субпопуляциями: CD4 (хелперными) и CD8 (супрессорными/цитотоксическими) клетками. При иммуногистохимическом анализе изучаемых поражений удалось установить, что хелперные CD4-лимфоциты в повышенном количестве обнаруживаются в поверхностных отделах поврежденной интимы нестабильной бляшки, а также в районе деструкции и отслоения ее покрышки. В стабильных атеросклеротических поражениях они обнаружены не были. В отличие от Т-лимфоцитов хелперов, в интиме нестабильных атеросклеротических поражений выявлялись лишь единичные CD8-клетки. Помимо Т-лимфоцитов, при формировании нестабильных атеросклеротических поражений важную роль, играют макрофаги. Проведенный иммуногистохимический анализ различных типов атеросклеротических поражений в артериях человека показал, а б что отличительной особенностью интимы нестабильной бляшки является наличие в них большого количества макрофагов (CD68-клеток). Однако в соединительнотканной фиброзной покрышке стабильного атеросклеротического поражения выявлялись либо единичные макрофаги, либо они отсутствовали совсем. При морфометрическом исследовании сосудистой стенки удалось установить заметное увеличение численности макрофагов, как в интиме, так и в адвентиции артерий. Их количество оказалось значительно выше в интиме нестабильной бляшки в 21 раз (p<0,05) по сравнению с нормой, в 1,3 раза по сравнению с липидным пятном и в 2,4 раза по сравнению со стабильным атеросклеротическим поражением. Параллельно с интимой, в зонах адвентиции расположенных под липидным пятном и нестабильной бляшкой выявлено увеличение количества макрофагов (от 5,2 до 6,8 раза) по сравнению с нормальными участками сосудистой стенки. Данные о количественном соотношении макрофагов/лимфоцитов в нестабильных бляшках разнятся. Одни авторы связывают степень нестабильности поражения, изъязвленность ее покрышки и последующий разрыв с выраженностью макрофагальной инфильтрации. Другие, напротив, отдают приоритет в этих процессах Т-лимфоцитам (Пигаревский и соавт., 2013). Проведенный нами сравнительный анализ общей численности Т-лимфоцитов и макрофагов позволил установить факт преобладания первых над вторыми во всех видах атеросклеротических поражений. Так, в нормальной интиме сосудов содержание Т- лимфоцитов было выше в 10,7 раза (p<0,05) по сравнению с макрофагами, в липидном пятне в 1,2 раза, в нестабильной бляшке в 2 раза и в стабильной в 1,5 раза (Рис. 8). Рис. 8. Количественное содержание Т-лимфоцитов и макрофагов в интиме артерий. В еще более выраженной степени эта закономерность выявлялась в соответствующих участках адвентиции. Таким образом, результаты наших исследований подтверждают литературные данные о том, что лимфоциты и макрофаги, проникающие в стенку артерий, являются основными клеточными формами (Шлычкова и соавт., 2005; Пигаревский и соавт., 2013). Первые состоят из субпопуляции Т-лимфоцитов (CD3-клеток), среди которых преобладают хелперные CD4-клетки, которые наряду с макрофагами, способствуют развитию иммуновоспалительных реакций. В результате проведенного нами иммуноморфологического и морфометрического анализа мононуклеарных инфильтратов установлено, что при формировании атеросклеротического поражения численность Т-лимфоцитов и макрофагов существенно увеличивается как в интиме, так и в адвентиции артерий. В ходе исследования нами установлен факт количественного преобладания Т-лимфоцитов над макрофагами во всех видах атеросклеротических поражений, что может поставить точку в многолетней дискуссии исследователей о численном превосходстве одной из этих двух основных клеточных популяций при развитии атеросклероза. Иммуноморфологическое исследование парааортальных лимфатических узлов Как было отмечено выше, при формировании нестабильной атеросклеротической бляшки основную роль играют малые и средние лимфоциты, а также лимфобласты, что возможно связано с развитием в кровеносных сосудах клеточного иммунного ответа по Т-типу. На основании этих данных нами была выдвинута гипотеза о том, что возможным источником Т-лимфоцитов в сосудистой стенке могут быть регионарные к ней парааортальные лимфатические узлы. Проведенное нами гистологическое исследование парааортальных лимфатических узлов, регионарных к аорте, содержащей нестабильные поражения, показало резкое увеличение численности посткапиллярных венул в них, по сравнению с узлами, контролирующими нормальные участки аорты (Рисунок 9 а, б). Такие морфологические изменения указывают на возросшую миграционную активность и усиленную рециркуляцию лимфоидных клеток в парааортальных лимфатических узлах. При гистологическом анализе коры и мозгового слоя парааортального лимфатического узла, регионарного к участку аорты с нестабильными атеросклеротическими поражениями, наблюдались многочисленные лимфобласты. Скопление этих клеток в лимфатическом узле может свидетельствовать об активной пролиферации и развитии реактивных процессов, возможно, приводящих к формированию Т-иммунного ответа, направленного против накапливающихся в сосудистой стенке атерогенных мЛПНП. Рис.9. Резкое увеличение численности посткапиллярных венул, заполненных эритроцитами в парааортальном лимфатическом узле, регионарном к аорте с нестабильными поражениями (б), по сравнению с нормальным узлом (а). Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение а, б – х 550. Как было установлено ранее, в нестабильных атеросклеротических бляшках мононуклеарно-клеточные инфильтраты состоят преимущественно из различной степени зрелости лимфоидных клеток (малых и средних лимфоцитов) и макрофагов. Лимфоидная клеточная популяция в сосудистой стенке представлена в основном Т- лимфоцитами (CD3-клетками). Аналогично сосудистой стенке, при иммуногистохимическом анализе, в паракортикальной зоне парааортального лимфатического узла выявлялись многочисленные Т-лимфоциты (CD3-клетки). Как было показано выше, среди Т-лимфоцитов (CD3-клетки) в сосудистой стенке преобладает в основном субпопуляция Т-хелперных лимфоцитов (CD4-клетки), которые а б могут являться инициаторами иммунного воспаления в сосудистой стенке в ответ на мЛПНП и влиять на формирование атеросклеротических бляшек в артериях (Hansson, 2005; Нагорнев и соавт., 2008). При иммуногистохимическом анализе коркового вещества парааортального лимфатического узла, регионарного к участку аорты с нестабильными атеросклеротическими бляшками были выявлены CD4-лимфоциты и многочисленные FOXP3 (CD4+CD25)-клетки. Последнее обстоятельство указывает на высокую функциональную активность выявляемых хелперных лимфоцитов. Таким образом, на основании собственных и литературных данных, нами сделано предположение о том, что источником Т-лимфоцитов в сосудистой стенке могут являться регионарные к ней парааортальные лимфатические узлы. Полученные нами данные согласуются с точкой зрения Gaddis D. E. et al. (2019) о том, что CD4-клетки мигрируют из парааортальных лимфатических узлов в аорту, где они будут способствовать развитию иммунного ответа (Gaddis et al., 2019). Морфометрическое исследование Th-1 и Th-2-клеток в сосудистой стенке при атерогенезе Как было показано выше, Т-лимфоциты, инфильтрирующие атеросклеротические поражения, представлены в основном CD4+ клетками. Однако, согласно самым последним данным, Т-хелперные лимфоциты не являются однородной популяцией и разделяются на две субпопуляции: Th1 и Th2 клетки. Предполагается, что они выполняют противоположные функции в стенке артерий и, прежде всего, в отношении мЛПНП. Суммируя основные свойства этих клеток, следует отметить, что Th1 Т- лимфоциты секретируют IFN-γ, TNFα, IL-2 и включаются в активацию макрофагов с последующим провоспалительным эффектом. Th2 Т-лимфоциты синтезируют противовоспалительные IL-4, IL-5, IL-10 и стимулируют продукцию В-лимфоцитами антител. Th1 и Th2 лимфоциты в сосудистой стенке – ключ к возможному в дальнейшем управлению иммунным ответом при атерогенезе. Анализ содержания в интиме аорты человека INF-γ позитивных клеток показал, что уже на начальной стадии атерогенеза численность мононуклеаров с этим цитокином в цитоплазме возрастает в 7 раз (p<0,05), по сравнению с нормальными участками сосуда. Столь же высокое их содержание сохраняется и на следующей стадии атеросклероза – в липидно-фиброзных бляшках. А в выраженных фиброзных бляшках с мощной соединительнотканной покрышкой количество таких мононуклеаров снижается до нормального уровня (Таблица 1). Сходная закономерность отмечается и в отношении многочисленных звездчатых клеток, цитоплазма которых оказывается заполнена INF-γ. На стадии липидного пятна и липидно-фиброзной бляшки численность таких клеток в зоне поражений увеличивается в 8 раз (p<0,05), а на стадии выраженной фиброзной бляшки – в 12 раз (p<0,05), по сравнению с нормальными участками сосуда (Таблица 1). При изучении распределения противовоспалительного IL-4, за одним исключением, выявлена противоположная закономерность. По мере прогрессирования заболевания численность мононуклеаров, экспрессирующих в своей цитоплазме IL-4 снижается и в липидно-фиброзных и фиброзных бляшках падает более чем в 2 раза (p<0,05), по сравнению с нормальными участками сосуда (Таблица 1). По сути, такой же процесс наблюдается и в звездчатых клетках. Так, в фиброзных бляшках IL-4 позитивных звездчатых клеток не удалось обнаружить вообще, а в липидно-фиброзных бляшках их количество было снижено в 2 раза (p<0,05), по сравнению с нормальным уровнем. Исключение составила самая ранняя стадия атерогенеза. В липидных пятнах численность этих клеток возрастала в 3 раза (p<0,05), по сравнению с нормой (Таблица 1). Таблица 1. Содержание иммунорегуляторных лимфоцитов и макрофагов, экпрессирующих различные цитокины в интиме аорты человека. Среднее количество клеток в 10 полях зрения. Характер поражения интимы аорты. С экспрессией INF- С экспрессией IL-4 CD3- CD20- клетки клетки CD68- клетки Мононукл. клетки Звездчатые клетки Мононукл. клетки Звездчатые клетки Нормальный участок сосуда 2,5±1,4 5,3±2,0 10,7±3,9 10,6±3,5 26,0±1,7 1,3±0,5 23,0±5,9 Липидное пятно 18,0±6,7 43,8±6,0 7,3±2,4 36,0±8,6 22,3±4,2 0,5±0,3 62,7±19,5 Липидно- фиброзная бляшка 17,5±8,4 38,0±8,9 1,3±0,5 4,5±1,8 32,8±6,8 0,5±0,3 55,2±9,5 Фиброзная бляшка 2,0±0,5 64,0±18,0 4,0±1,2 0 24,7±10.2 3,0±1,7 33,3±5,7 Морфометрическое исследование макрофагов показало, что в липидных пятнах их количество возрастает в 2,7 раза (p<0,05), а в липидно-фиброзных бляшках – в 2,4 раза (p<0,05), по сравнению с нормальными участками сосуда. И лишь на стадии выраженных фиброзных бляшек численность макрофагов падает и приближается к норме (Таблица 1). В ходе наших исследований удалось установить, что на самых ранних стадиях атеросклеротических поражений наблюдается скопление Th1 лимфоцитов и звездчатых клеток, синтезирующих INF-γ, что способствует развитию проатерогенного Th1- иммунного ответа, при этом одновременно снижается численности Th2 клеток, экспрессирующих противовоспалительный цитокин IL-4. Показано, что на начальных стадиях формирования атеросклероза, в интиме аорты резко возрастает количество макрофагов, значительная часть которых преобразуется в пенистые клетки, а оставшаяся, также, как и дендритные клетки, принимает участие в презентации антигенов (Nilsson et al., 2005). Такие изменения, возможно, могут служить реакцией на откладывающиеся в стенках сосуда различные модификации липопротеинов низкой плотности (Пигаревский и соавт., 2006). Таким образом, нарушенный баланс между про- и анти-воспалительными клетками в очагах иммунного воспаления может способствовать развитию атеросклероза, его активации и прогрессированию. Влияние про- и антивоспалительных цитокинов на формирование атеросклеротических поражений Интерлейкин-17 (IL-17). Продуцирующие IL-17 T-хелперы (Тh17) – недавно открытая популяция лимфоцитов, играющая ключевую роль в развитии аутоиммунных заболеваний. Однако роль Th17 клеток и IL-17 в атерогенезе однозначно не определена. Иммуногистохимический анализ сосудистой стенки показал, что основным местом локализации мононуклеаров, экспрессирующих IL-17, являются места максимальной деструкции интимы нестабильной атеросклеротической бляшки, часто в районе разрыва ее покрышки. В стабильных поражениях выявлялись либо единичные мононуклеары с IL-17 в цитоплазме, либо они отсутствовали совсем. При морфометрическом анализе артерий человека максимальное число эндотелиальных клеток, экспрессирующих IL-17, было выявлено на начальной стадии поражения. Так, их количество в липидном пятне выше в 1,8 раза по сравнению с нормой, в 1,5 раза по сравнению со стабильной бляшкой. Число эндотелиальных клеток, экспрессирующих IL-17, также возрастает в нестабильной атеросклеротической бляшке – в 1,7 раза по сравнению с нормой и в 1,3 раза по сравнению со стабильным поражением (Рис. 10). Рис. 10. Количественное содержание эндотелиальных и мононуклеарных клеток, экспрессирующих IL-17, в норме и в различных типах атеросклеротических поражений интимы артерий. Одновременно с эндотелиальными клетками, выявлено существенное увеличение числа мононуклеарных клеток, экспрессирующих IL-17, в интиме нестабильной атеросклеротической бляшки в 2,6 раза (p<0,05) по сравнению с нормальными участками сосудистой стенки. Параллельно их количество возрастает в липидном пятне (в 2,6 раза) и в стабильной бляшке (в 1,3 раза) по сравнению с нормой (Рис.10). Нами впервые был осуществлен иммуногистохимический и морфометрический анализ эндотелиальных и мононуклеарных клеток, экспрессирующих IL-17, в интиме и адвентиции артерий на разных стадиях формирования нестабильных атеросклеротических поражений. Показано, что максимальная численность клеток, экспрессирующих IL-17, наблюдалась в районе разрыва покрышки нестабильной атеросклеротической бляшки. Полученные нами данные могут говорить о том, что Th- 17-клетки и секретируемый ими IL-17 способны оказывать провоспалительное действие и существенное влияние на формирование нестабильных атеросклеротических поражений. Полученные результаты полностью соответствуют данным X.Tang (2019), который показал исключительную роль Th-17 – клеток и продуцируемого ими сывороточного IL-17 в формировании атеросклеротических поражений (Tang, 2019). Интерлейкин-18 (IL-18). Наблюдаемые дегенеративные процессы в нестабильных атеросклеротических бляшках могут быть связаны с опосредованным действием IL-18 за счет индукции синтеза INF-γ в Т-лимфоцитах и макрофагах. Известно, что INF-γ обладает способностью ингибировать синтез коллагена и эластина в гладкомышечных клетках сосудистой стенки и тем самым препятствовать формированию прочной фиброзной покрышки бляшки (Пигаревский, 2018). Его роль в дестабилизации атеросклеротических поражений оставалась до сих пор неизвестной. При иммуногистохимическом анализе сосудистой стенки человека впервые удалось установить локализацию IL-18 в клеточных и тканевых элементах как в нестабильных, так и в стабильных атеросклеротических бляшках. В нормальных участках интимы сосудистой стенки этот цитокин выявлялся либо в незначительном количестве, либо отсутствовал совсем. Как внутриклеточная (эндотелиальные клетки, макрофаги/моноциты), так и диффузная внеклеточная локализация IL-18 обнаруживалась преимущественно в нестабильных поражениях. Он выявлялся в цитоплазме эндотелиальных клеток и макрофагов, располагающихся непосредственно в зонах деструкции, эрозии и разрывов фиброзной покрышки нестабильной бляшки. В отличие от нестабильных поражений, в мононуклеарных клетках, располагающихся в различных зонах стабильных атеросклеротических бляшек, IL-18 либо отсутствовал, либо обнаруживался в незначительных количествах. Последующее морфометрическое исследование артерий человека на разных стадиях формирования атеросклеротической бляшки, показало увеличение численности эндотелиальных клеток, экспрессирующих IL-18, в интиме нестабильного поражения в 2,1 раза по сравнению с нормой. Параллельно с нестабильной бляшкой, их количество возрастает и в стабильном поражении в 1,7 раза по сравнению с нормальными участками интимы. Одновременно с эндотелиальными клетками экспрессия IL-18 выявлялась в мононуклеарных клетках. В нестабильном атеросклеротическом поражении их численность возрастала в 3,2 раза (p <0,05), по сравнению с нормой. Согласно немногочисленным литературным данным, основанных на биохимических исследованиях, с помощью ПЦР реакций установлено, что уровень IL- 18 в нестабильных поражениях в 3 раза выше по сравнению со стабильными. При этом в наибольшей степени увеличение этого интерлейкина отмечалось в атеросклеротических бляшках с тромбами (Рагино и соавт., 2011; Рагино и соавт, 2012; Пигаревский и соавт., 2014). В результате проведенного исследования нам впервые удалось выявить точную локализацию IL-18 в клеточных и тканевых элементах нестабильных и стабильных атеросклеротических бляшек. Сравнительный морфометрический анализ показал выраженное преобладание эндотелиальных и мононуклеарных клеток, экспрессирующих IL-18, в интиме нестабильного атеросклеротического поражения. На основании полученных данных нами сделано предположение о том, что IL-18 может влиять на деструкцию эластического и коллагенового каркаса в нестабильной бляшке за счет его способности индуцировать синтез INF-γ в Т-лимфоцитах и макрофагах. Интерферон-гамма (INF-γ). INF-γ обладает способностью ингибировать синтез коллагена и эластина в гладкомышечных клетках сосудистой стенки и тем самым препятствовать формированию прочной фиброзной покрышки бляшки, что в итоге может приводить к дестабилизации атеросклеротического поражения. Проведенный нами иммуногистохимический анализ сосудистой стенки показал, что INF-γ отсутствует в клеточных и внеклеточных структурах нормальных участков артерий. На начальной стадии развития атеросклеротического поражения в районе эндотелия сосуда наблюдаются мононуклеарные клетки, активно экспрессирующие INF-γ, что, может быть связано с их адгезией и дальнейшим проникновением в интиму. По мере формирования нестабильной атеросклеротической бляшки такие мононуклеары выявляются в зоне её покрышки. Важно отметить, что многочисленные клетки, инфильтрирующие сосудистую стенку и синтезирующие INF-γ, постоянно обнаруживаются в участках деструкции и разрыва фиброзной покрышки нестабильной бляшки. В отличие от нестабильных атеросклеротических поражений, в фиброзной покрышке стабильной атеросклеротической бляшки наблюдается полное отсутствие вне- и внутриклеточной экспрессии INF-γ. Известно, что INF-γ активирует клетки эндотелия и способствует поляризации Т- хелперов в провоспалительный и проатерогенный класс Th1 лимфоцитов. Для данного цитокина характерно участие в иммуноопосредованной и аутоиммунной патологии, которые развиваются в процессе реакций гиперчувствительности замедленного типа (Пигаревский, 2018). Клетками, продуцирующими эндогенный INF-γ в аорте, являются: Th1-клетки (CD4+-клетки), цитотоксические Т-клетки (CD8+-клетки) и натуральные киллеры (NK-клетки) (Koltsova et al., 2012). Экспериментальные данные, полученные при моделировании на животных, а также при анализе патогенеза атеросклероза у человека, убедительно показывают патогенную роль INF-γ в развитии атеросклероза (Дутова и соавт., 2018). Проведенные нами исследования подтверждают эти сведения при формировании нестабильных атеросклеротических поражений. Фактор некроза опухоли (TNF-α). Биологическую роль TNF-α оценивают, как ведущую к прогрессии осложнений при развитии атеросклероза, нестабильной стенокардии и коронарных рестенозов. Известно, что TNF-α продуцируется преимущественно моноцитами/макрофагами, эндотелиальными и тучными клетками. Согласно другим данным, этот цитокин секретируется Th-1 клетками, после чего он активирует макрофаги и индуцирует воспаление. Следует подчеркнуть, что роль TNF-α при формировании нестабильных атеросклеротических поражений до сих пор мало изучена. Проведенное нами иммуногистохимическое исследование мононуклеарно- клеточных инфильтратов показало, что мощный провоспалительный цитокин TNF-α присутствует в цитоплазме макрофагов, располагающихся в покрышке нестабильной атеросклеротической бляшки (Рис.11). Одновременно экспрессия TNF-α обнаруживалась в многочисленных мононуклеарных клетках воспалительных инфильтратов, находящихся в зонах под нестабильными атеросклеротическими поражениями. Интересно, что экспрессия TNF-α выявлялась и в цитоплазме гладкомышечных клеток в покрышке нестабильной бляшки. В отличие от нестабильных поражений, в стабильных бляшках ни внутри-, ни внеклеточной экспрессии данного цитокина не наблюдалось. Рис.11. TNF-α в цитоплазме макрофагов, располагающихся в районе деструкции покрышки нестабильной атеросклеротической бляшки. Иммунопероксидазный метод. Ув. х 600. В немногочисленной литературе имеются данные о том, что высокий уровень TNF-α, который характеризуется не только провоспалительным, но и деструктивным эффектом, является отличительной особенностью нестабильных бляшек дистрофически- некротического типа (Wang, Connolly, 2010; Рагино и соавт., 2012). Проведенное нами иммунноморфологическое исследование сосудистой стенки показало, что TNF-α активно экспрессируется, как в цитоплазме макрофагов и лимфоцитов, так и в гладкомышечных клетках нестабильного атеросклеротического поражения. Что может свидетельствовать о способности TNF-α иницировать мощный иммуновоспалительный процесс в сосудистой стенке при развитии нестабильной бляшки. Интерлейкин-4 (IL-4). Наряду с провоспалительными интерлейкинами, обладающими проатерогенным действием важно узнать состояние антивоспалительного цитокинового профиля при развитии нестабильных и стабильных атеросклеротических поражений. Ярким представителем этого семейства является интерлейкин-4. Одной из основных функций IL-4 является регуляция дифференцировки активированных антигеном нативных CD4+Т-лимфоцитов-хелперов в направлении субпопуляции Th2- клеток. При помощи IL-4 осуществляется дифференцировка Th2-клеток, обеспечивая развитие гуморального иммунного ответа (Симбирцев, 2018; Пигаревский, 2018). При помощи проведенного нами иммуногистохимического анализа сосудистой стенки, удалось выявить немногочисленные мононуклеарные клетки, экспрессирующие IL-4 в поверхностных отделах покрышки стабильной атеросклеротической бляшки. В отличие от стабильных атеросклеротических поражений, в районе разрыва покрышки нестабильной бляшки экспрессии IL-4 в мононуклеарных клетках не наблюдалось. Из литературных данных известно, что при иммунноферментном анализе супернатантных культур Т-лимфоцитов, полученных из нестабильных атеросклеротических поражений, было установлено значительное снижение уровня IL-4 по сравнению с культурой, выделенной из стабильных бляшек (Profumo et al., 2013; Дутова и соавт., 2018). В ходе иммуноморфологического исследования нам впервые удалось выявить немногочисленные мононуклеарные клетки, экспрессирующие IL-4 в поверхностных отделах покрышки стабильной атеросклеротической бляшки, в то время как в нестабильной бляшке он не выявлялся, видимо его продукция там была заблокирована. Нами высказано предположение о том, что продукция IL-4 в сосудистой стенке может быть связана с развитием Th2-иммунного ответа, который обладает антиатерогенным действием. ЗАКЛЮЧЕНИЕ На основании собственных и литературных данных создана морфологическая классификация обобщенных типов состоявшихся нестабильных и стабильных атеросклеротических поражений. Выявлена отдельная прогрессирующая форма нестабильной атеросклеротической бляшки. Показано, что при формировании нестабильной атеросклеротической бляшки наряду с отложением липопротеинов, образованием пенистых клеток, наблюдаются выраженные изменения волокнистых структур. Выявлены патологические изменения коллагеновых и эластических волокон, возникающие при формировании нестабильной атеросклеротической бляшки. Впервые было показано резкое снижение численности гладкомышечных клеток в нестабильном поражении вплоть до их полного исчезновения. Проведенное исследование позволило установить, что при формировании нестабильного атеросклеротического поражения в эндотелиальных клетках наблюдается выраженная экспрессия мощного хемоаттрактанта IL-8, который способствует проникновению мононуклеарных клеток в интиму сосудистой стенки, в ходе чего образуются мононуклеарно-клеточные инфильтраты, способствующие развитию иммуновоспалительных реакций. Показано, что в нестабильных атеросклеротических бляшках такие инфильтраты состоят преимущественно из различной степени зрелости лимфоидных клеток (малых и средних лимфоцитов) и макрофагов. Полученные результаты подтверждают основные положения иммуновоспалительной теории патогенеза атеросклероза: при формировании нестабильного атеросклеротического поражения, как на ранних, так и на более выраженных стадиях заболевания, наравне с липопротеинами низкой плотности, ведущую роль играют иммунокомпетентные клетки, необходимые для формирования иммунного ответа. На основании более детального иммуноморфологического анализа установлено, что лимфоидная популяция представлена в основном Т-лимфоцитами (CD3-клетками), среди которых преобладают хелперные CD4-клетки. Впервые выявлен факт количественного преобладания Т-лимфоцитов над макрофагами во всех видах атеросклеротических поражений. Показано, что взаимодействие этих клеток в сосудистой стенке при формировании атеросклеротической бляшки приводит к развитию полноценного иммунного ответа по Т-типу. Признаков развития В-иммунного ответа, напротив, не наблюдается. Сделано предположение о том, что возможным источником Т-лимфоцитов в сосудистой стенке могут быть регионарные к ней парааортальные лимфатические узлы. В рамках представленной работы показана роль проатерогенного Th1-иммунного ответа при формировании атеросклеротических поражений. Установлено, что из Т- клеточной популяции, начиная с самых ранних стадий заболевания, Th1-лимфоциты, экспрессирующие провоспалительные цитокины, превалируют над Th2-клетками, синтезирующими антивоспалительный IL-4. Сделано предположение о том, что такие изменения являются ответом на откладывающиеся в сосудистой стенке различные модификации липопротеинов низкой плотности. Показано, что баланс между про- и анти-воспалительными клетками в очагах иммунного воспаления оказывает важное влияние на развитие атеросклероза, его активацию и прогрессирование. В результате проведенной работы выявлен цитокиновый профиль иммуновоспалительных реакций при формировании атеросклеротических поражений. Показано, что наблюдаемые дегенеративные процессы в нестабильной бляшке могут быть связаны с действием провоспалительных цитокинов (IFN-γ, TNFα, IL-17, IL-18), которые усиливают деструктивные эффекты в сосудистой стенке. Наряду с провоспалительными интерлейкинами, в данной работе в качестве антивоспалительного цитокина был изучен IL-4 в нестабильных и стабильных атеросклеротических поражениях. Установлено, что при атеросклерозе IL-4 обладает не только мощным противовоспалительным, но и антиатерогенным действием. Показано, что продукция IL-4 в сосудистой стенке может быть связана с развитием Th2- иммунного ответа. Таким образом, в настоящей работе раскрыты механизмы формирования нестабильных атеросклеротических поражений. Подтверждена роль иммуновоспалительной теории патогенеза атеросклероза. Показано, что в основе развития дестабилизации атеросклеротической бляшки лежат аутоиммунные и иммуновоспалительные реакции. ВЫВОДЫ 1. В результате сравнительного иммуноморфологического и морфометрического исследования впервые выявлены клеточные и внеклеточные факторы, лежащие в основе механизмов дестабилизации атеросклеротической бляшки у человека. 2. Создана морфологическая классификация обобщенных типов состоявшихся нестабильных и стабильных атеросклеротических поражений. Выявлена отдельная прогрессирующая форма нестабильной атеросклеротической бляшки с чередованием слоев вновь образующихся липидных отложений со слоями фиброзной соединительной ткани. Обобщены патологические изменения эластико- коллагенового каркаса сосудистой стенки, возникающие при формировании нестабильной атеросклеротической бляшки. 3. Для нестабильного атеросклеротического поражения характерна выраженная мононуклеарно-клеточная инфильтрация различных его отделов. 4. Установлено, что при формировании нестабильного атеросклеротического поражения в эндотелиальных и мононуклеарных клетках наблюдается выраженная экспрессия мощного хемоаттрактанта IL-8. Этот факт может говорить о генерализованном характере адгезионного процесса в сосудистой стенке, и о необходимости, проникающих в интиму сосуда макрофагов и лимфоцитов, для инициации и усиления иммуновоспалительных реакций. 5. Впервые исследованы количественное содержание и функциональная активность различных типов лимфоцитов и макрофагов: CD3, CD4, CD8, CD68, CD163-клеток и их медиаторов (IL-17, IL-18, INF-γ, TNF-α, IL-4) в прогрессирующих типах атеросклеротических поражений. Установлено, что наблюдаемые дегенеративные процессы в нестабильной бляшке могут быть связаны с действием провоспалительных цитокинов (IFN-γ, TNFα, IL-17, IL-18). Показано, что баланс между про- и анти-воспалительными клетками в очагах иммунного воспаления может оказывать важное влияние на развитие атеросклероза, его активацию и прогрессирование. Показано, что возможным источником Т-лимфоцитов в сосудистой стенке могут быть регионарные к ней парааортальные лимфатические узлы. 6. Изучена роль проатерогенного Th1-иммунного ответа при формировании нестабильных атеросклеротических поражений. Установлено, что из Т-клеточной популяции, начиная с самых ранних стадий заболевания, Th1-лимфоциты, экспрессирующие провоспалительные цитокины, превалируют над Th2-клетками, синтезирующими антивоспалительный IL-4. Высказана гипотеза о том, что такие изменения являются ответом на откладывающиеся в стенке артерий различные модификации липопротеинов низкой плотности. Баланс между про- и анти- воспалительными клетками в очагах иммунного воспаления оказывает важное влияние на развитие атеросклероза, его активацию и прогрессирование.